Método para el tratamiento de condiciones mediadas por células T por la disminución de las células positivas de ICOS in vivo.

Un agente enlazante de ICOS seleccionado de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo,

en donde dicho agenteuna vez enlazado a ICOS expresa en la superficie de las células, en particular células T soporte de ICOS, resulta enla disminución in vivo de las células a la cuales está enlazado.

Método para el tratamiento de condiciones mediadas por células T por la disminución de las células positivas de ICOS in vivo.

La presente invención se relaciona en general con agentes enlazantes útiles en la disminución selectiva de células T

in vivo. Más específicamente, la invención se relaciona a agentes enlazantes de ICOS que una vez enlazados a los expresados ICOS en la superficie de las células, en particular células T soporte de ICOS, resultan en la disminución in vivo de las células a las que están enlazados. Métodos de tratamiento de enfermedades relacionadas con células T usando dichos agentes enlazantes de ICOS, composiciones farmacéuticas que comprenden dichos agentes enlazantes de ICOS, un método de identificación de un agente enlazante de ICOS, y también se proporcionan anticuerpos anti-ICOS monoclonales capaces de eliminación in vivo de células que expresan ICOS en su superficie.

El concepto de disminución de las células T en la enfermedad autoimmune y trasplante no es nuevo y ha sido practicado con éxito en la clínica por décadas (Hargreaves REG, Trends in Molecular Medicine 2004;10: 130-135) . Sin embargo, los antígenos que fueron dirigidos sobre las células T (CD3, CD4, CD52) se expresan ampliamente en células T en reposo y activadas o incluso en otros tipos de células. Por lo tanto, los regímenes terapéuticos existentes son ampliamente inmunosupresores. La disminución de las células T activadas que expresan ICOS in vivo, tal como se describe en la presente invención, ofrece mucha mayor especificidad del efecto terapéutico, ya que ICOS se expresa solamente de manera significativa en las células T efectoras activadas. (Löhning M, Journal of Experimental Medicine 2003;197:181-193; Bonhagen K, European Journal of Immunology 2003;33:392-401) .

En la Solicitud de Patente Europea EP1 158 004 A2 se describen anticuerpos humanos, los cuales pueden matar

transfectantes que sobreexpresan ICOS in vitro basados en el mecanismo de Citotoxicidad Mediada por Células Dependiente de Anticuerpos (ADCC) con linfocitos de sangre periférica humana. El experimento descrito demuestra que los anticuerpos utilizados pueden mediar un cierto tipo de citotoxicidad in vitro pero no proporciona ninguna información si las células T que expresan ICOS pueden en modo alguno ser disminuidas in vivo. Hay un número de razones, por qué este experimento no pueda proveer esta información: 1. Líneas transfectadas que sobreexpresan ICOS fueron usadas como objetivos y las células T no normales con expresión de ICOS fisiológica. 2. ADCC tal como se usa en el experimento descrito con frecuencia ha sido demostrado como un mecanismo de disminución celular in vitro, pero ha sido excluido en gran medida como un mecanismo para la disminución celular in vivo (Alters SE, Journal of Immunology 1990;144: 4587-4592; Uchida J, Journal of Experimental Medicine 2004;199:1659-1669) . La ADCC trabajará in vitro con cualquier anticuerpo capaz de enlazarse a una molécula de superficie teniendo el

isótopo derecho a ser reconocido por las células citotóxicas in vitro. 3. Hay una variedad de razones adicionales (véase abajo) , por qué las pruebas de disminución in vitro en general no tienen ningún valor predictivo para la disminución in vivo (Uchida J, Journal of Experimental Medicine 2004;199:1659-1669, Isaacs JD, Rheumatology 2001;40:724-738) . Esta es la razón por la que ha sido difícil generar anticuerpos de disminución in vivo dirigidos contra otros antígenos de activación de la superficie de células T como CTLA-4 o OX40, puesto que (por ejemplo basado en ADCC) la disminución de células T contra estos objetivos funcionará bien in vivo (Hargreaves REG, Trends in Molecular Medicine 2004;10:130-135) .

Un mayor número de factores son importantes en la determinación de si una molécula de superficie celular determinado puede ser utilizado como un objetivo para la disminución celular in vivo: nivel de expresión de superficie de la célula de la molécula objetivo, valencia del antígeno objetivo, la distribución del antígeno objetivo en la 40 superficie de la célula, su proximidad a la membrana celular, ocurrencia o no de internalización de la molécula objetivo después del enlazamiento del anticuerpo, el curso y la duración de la expresión fisiológica, la accesibilidad del antígeno objetivo en varios tejidos (nodos linfáticos, bazo, sangre) , y otros factores (Alters SE, Journal of Immunology 1990;144:4587-4592; Uchida J, Journal of Experimental Medicine 2004;199:1659-1669; Isaacs JD, Rheumatology 2001;40:724-738) . Estos factores y por lo tanto la utilidad general de una molécula determinada como 45 un objetivo para la disminución celular sólo pueden ser probados usando un modelo apropiado en vivo.

Por otra parte, ICOS como molécula co-estimuladora plantea el peligro de que los anticuerpos u otros agentes dirigidos a ICOS en lugar de disminución a una activación adversa y a la expansión de células T ICOS+ in vivo con enfermedades potencialmente severas- agravando los efectos. Hasta la fecha no hay datos disponibles si las células T se pueden disminuir in vivo utilizando una molécula co-estimulante como objetivo. Las pruebas in vitro para 50 efectos co-estimulantes ICOS no tienen un valor predictivo para la situación in vivo. Las pruebas in vitro para efectos co-estimulantes de ICOS no tienen un valor predictivo para la situación in vivo, puesto que muchos parámetros críticos muchos parámetros críticos no pueden ser reproducidos correctamente in vitro (por ejemplo densidad de

superficie de ICOS y distribución de la superficie, características de enlace de los agentes enlazantes de ICOS a diversos tejidos, etc.) . Por lo tanto, la cuestión de si ICOS se puede utilizar como un objetivo para una disminución terapéutica de las células T activadas in vivo sin la activación de células adversa y la proliferación sólo puede ser contestada en un modelo apropiado de enfermedad in vivo. Solamente una prueba de este tipo in vivo tiene una capacidad predictiva para la utilidad de ICOS como objetivo terapéutico. Al mismo tiempo, solo las pruebas in vivo tienen un valor predictivo para la utilidad de los anticuerpos monoclonales dirigidos a ICOS como agentes de disminución.

En la presente invención se describe que es posible disminuir las células T que expresan ICOS in vivo sin reacciones adversas (por ejemplo activación celular, proliferación, expansión de células T que expresan ICOS) en un modelo de alergia de pulmones con el uso de anticuerpos monoclonales. Además se demuestran que es posible atenuar la enfermedad modelo por disminución de células ICOS+ in vivo.

El sistema inmune se compone de varios tipos de células altamente especializadas, entre ellos linfocitos T. Fisiológicamente, los linfocitos T circulan en el cuerpo en un estado de reposo. Bajo estas circunstancias, las células T expresan en su superficie el receptor de células T, el cual es responsable por el reconocimiento de antígeno. Además del receptor de células T, los linfocitos T en reposo expresan un número de otras moléculas de la superficie celular de una manera constitutiva. Algunas de estas proteínas superficiales son responsables de la migración adecuada de las células T a través de compartimentos del cuerpo, algunos proporcionan fuerzas de enlace ("adhesión") a otras células del sistema inmune, algunos se expresan para asegurar la activación apropiada de las células T una vez que éstos reconocen su antígeno (por ejemplo CD4, CD8, CD3, CD28) . Siempre que las células T que patrullan los diversos compartimientos corporales no encuentren un antígeno al que se dirige su receptor de células T, permanecen en reposo y no cambian su patrón de moléculas de superficie celular. Una vez que las células T encuentran antígeno presentado por "células presentadoras de antígeno" (por ejemplo las células dendríticas) , las células T se activan parcialmente. El reconocimiento del antígeno por el receptor de células T solo es en la mayoría de los casos insuficiente para la activación completa de los linfocitos T, que por lo general requiere la estimulación simultánea por moléculas de superficie de células T adicionales (también llamados más adelante "coestimuladora" o "moléculas co-estimulantes") . Tras la activación por antígeno, las células T comienzan a expresar un número de nuevas moléculas de superficie celular (por ejemplo CD25, CD69) , entre ellas también nuevas moléculas co-estimulantes (por ejemplo ICOS, OX-40, 4-1BB, (Carreno B et al., Annu. Rev. Immunol. 2002, 20:29-53; Croft M, Nat. Rev. Immunol. 2003, 3: 609-620) ) . Las células T activadas también empiezan a proliferar e inician a sintetizar numerosas citoquinas, por ejemplo IL-2 y IFN-y, que empiezan... [Seguir leyendo]

1. Un agente enlazante de ICOS seleccionado de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, en donde dicho agente una vez enlazado a ICOS expresa en la superficie de las células, en particular células T soporte de ICOS, resulta en la disminución in vivo de las células a la cuales está enlazado.

2. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 la cual es, o compite cruzado con, un anticuerpo monoclonal secretado por la línea celular de hibridoma MIC-944, depositado en la Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ) bajo el número de acceso DSM ACC 2645, o por la línea celular de hibridoma 9F3, depositado en la DSMZ bajo el número de acceso DSM ACC 2646.

3. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde ICOS es ICOS humano.

4. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 3 en el que el anticuerpo anti-ICOS o fragmento del mismo es monoclonal, policlonal, quimérico, humanizado, biespecífico, multiespecífico, en particular, un anticuerpo recombinante o fragmento de anticuerpo.

5. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 4 en el que el enlazante del agente enlazante de ICOS a ICOS impide el enlazamiento de ICOSL a ICOS.

6. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 5 que enlaza ICOS sin estimular la señalización de ICOS.

7. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 6 el cual es internalizado en la célula al enlazante a ICOS.

8. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 6 el cual no se internaliza en la célula al enlazante a ICOS.

9. Una composición farmacéutica que comprende un agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 8 en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Un uso de un agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 9 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una condición mediada directamente o indirectamente por las células que expresan ICOS en su superficie.

11. Un uso de un agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 9 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una condición mediada directamente o indirectamente por las células T.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, en donde la condición es una enfermedad alérgica, inflamatoria

o autoinmune, y/o cáncer mediada por células T.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la condición es una enfermedad mediada por células T seleccionado del grupo consistente de asma alérgica, fiebre del heno, alergia al veneno de abeja, alergia a los alimentos, esclerosis múltiple, sarcoidosis, artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, síndrome de Sjögren, lupus eritematoso sistémico, enfermedades inflamatorias del intestino (colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn) , psoriasis, vasculitis, linfoma de células T que expresan ICOS, rechazo de un órgano o tejido trasplantado y la enfermedad de injerto contra huésped.

14. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 1 a 8, el cual comprende un agente de enlazante de ICOS conjugado a una o más moléculas efectoras.

15. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con la reivindicación 14 en el que la al menos una molécula efectora es un agente citotóxico.

16. El agente enlazante de ICOS de acuerdo con la reivindicación 14 en el que la al menos una molécula efectora incluye una región Fc de inmunoglobulina.