Secuenciación libre de errores de ADN.
Método de secuenciación libre de errores de ADN, que comprende las etapas de:
(a) en una muestra que comprende ADN;
(b) digerir el ADN con una endonucleasa de restricción en condiciones adecuadas para obtener fragmentos de ADN de longitud similar,
en el que dicha endonucleasa de restricción puede proporcionar proyecciones en 5', en el que el nucleótido terminal de la proyección está fosforilado o,
en el que dicha endonucleasa de restricción puede proporcionar proyecciones en 3', en el que el nucleótido terminal de la proyección está hidroxilado en dichos fragmentos de ADN;
(c) aparear un primer oligonucleótido con dichos fragmentos de ADN, en el que una primera secuencia de dicho primer oligonucleótido es complementaria a la proyección en 5' o en 3', respectivamente, de dicho fragmento de ADN, y una segunda secuencia de dicho primer oligonucleótido es complementaria a una primera secuencia de un segundo oligonucleótido, en el que dicho segundo oligonucleótido comprende una segunda y una tercera secuencias, en el que dicha segunda secuencia de dicho segundo oligonucleótido comprende una secuencia aleatorizada;
(d) ligar dicho segundo oligonucleótido a dicho fragmento de ADN, mediante lo cual el primer oligonucleótido no se liga al ADN;
(e) rellenar las proyecciones generadas;
(f) amplificar dichos fragmentos de ADN usando un tercer oligonucleótido que comprende una secuencia que se une a dicha tercera secuencia de dicho segundo oligonucleótido; y
(g) secuenciar dichos fragmentos de ADN amplificados.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2015/052436.
Solicitante: FRAUNHOFER-GESELLSCHAFT ZUR FORDERUNG DER ANGEWANDTEN FORSCHUNG E.V..
Inventor/es: KIRSCH, STEFAN, DR., KLEIN, CHRISTOPH, CZYZ,ZBIGNIEW TADEUSZ, LAHRMANN,URS.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/6869 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Métodos de secuenciación.
PDF original: ES-2730962_T3.pdf
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