Amplificación selectiva de amplicones solapados.

Un método para amplificar de forma selectiva fragmentos de ácido nucleico que tienen una región solapada,

que comprende las etapas de:

a) obtener una primera secuencia de ácido nucleico que comprende una primera etiqueta (t2) y un primer cebador directo (F1) complementario a un primer fragmento de ácido nucleico diana, donde t2 está en posición extremo 5' respecto a F1;

b) obtener una segunda secuencia de ácido nucleico que comprende una segunda etiqueta (t1) y un primer cebador inverso (R1) complementario al primer fragmento de ácido nucleico diana, donde t1 está en posición extremo 5' respecto a R1;

c) obtener una tercera secuencia de ácido nucleico que comprende la segunda etiqueta (t1) y un segundo cebador directo (F2) complementario a un segundo fragmento de ácido nucleico, donde t1 está en posición extremo 5' respecto a F2;

d) obtener una cuarta secuencia de ácido nucleico que comprende una tercera etiqueta (t3), y un segundo cebador inverso (R2) complementario al segundo fragmento de ácido nucleico, donde t3 está en posición extremo 5' respecto a R2, en donde el primer y el segundo fragmento de ácido nucleico diana tienen una región solapada;

e) mezclar el primer y el segundo fragmento de ácido nucleico diana, la primera, la segunda, la tercera y la cuarta secuencia de ácido nucleico, y una cantidad efectiva de reactivos necesaria para llevar a cabo una reacción en cadena de polimerasa (PCR);

f) someter la mezcla de (e) a ciclos de etapas de desnaturalización, maduración y extensión de cebador de PCR durante al menos dos veces; y

g) someter la mezcla de (f) a ciclos de etapas de desnaturalización, maduración y extensión de cebador de PCR a una temperatura de maduración superior a la de la etapa (f) para obtener productos de amplificación.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2016/020284.

Solicitante: Pillar Biosciences Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 12 Michigan Drive Natick, Massachusetts 01760 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SONG,GANG, WANG,ZHAOHUI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/686

PDF original: ES-2718765_T3.pdf

 

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