Método y kit para detectar una secuencia de ADN diana de tipo salvaje y/o mutada.

Un método para detectar al menos una de al menos una primera secuencia de ADN diana y al menos una segunda secuencia de ADN diana de una biblioteca de secuencias de ADN,

en donde la primera secuencia de ADN diana difiere de la segunda secuencia de ADN diana en que una sustitución o eliminación o inserción de nucleótidos individuales o múltiples en la segunda secuencia diana genera un sitio de restricción para una endonucleasa de restricción, dando lugar - si se escinde por la endonucleasa de restricción - a una primera secuencia, segunda diana 3' escindida del sitio de restricción generado y una segunda secuencia, segunda diana 5' escindida del sitio de restricción generado, que comprende los pasos de:

(a) proporcionar la biblioteca de secuencias de ADN, comprendiendo cada una de las secuencias de ADN, respectivamente, desde el extremo 5' hasta el extremo 3', un primer segmento de secuencia que tiene una longitud de a 50 nucleótidos, un segundo segmento de secuencia de ADN genómico tal como es escindido por la endonucleasa de restricción, y un tercer segmento de secuencia reversa complementaria a la unión del primer segmento de secuencia y, si lo hay, el saliente en 5' generado por la endonucleasa de restricción;

(b) amplificar la biblioteca de secuencias de ADN mediante PCR usando:

- al menos un primer cebador reverso que se hibrida con la región del extremo 3' del segundo segmento de secuencia de la al menos una primera cadena positiva de secuencia diana o al menos una primera cadena positiva de secuencia, segunda diana escindida;

- al menos un segundo cebador de avance que se hibrida con la región del extremo 3' del segundo segmento de secuencia de la al menos una primera cadena antipositiva de la secuencia diana;

- al menos un tercer cebador de avance que comprende una primera porción 5' que se hibrida con la región de extremo 5' del tercer segmento de secuencia de la al menos una primera cadena antipositiva de secuencia, segunda diana escindida y una segunda porción 3' que hibrida con la región de extremo 3' del segundo segmento de secuencia de la al meos una primera cadena antipositiva de secuencia, segunda diana escindida, en donde la primera porción del al menos un tercer cebador de avance tiene una longitud de 20% a 80% con respecto a la longitud total de al menos un tercer cebador de avance.

(c) detectar secuencias de ADN amplificadas en la etapa (b).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2013/059827.

Solicitante: Menarini Silicon Biosystems S.p.A.

Nacionalidad solicitante: Italia.

Dirección: Via G. di Vittorio, 21 B/3 40013 Castel Maggiore (BO) ITALIA.

Inventor/es: MANARESI,NICOLO, FONTANA,FRANCESCA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2674122_T3.pdf

 

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