Procedimiento y dispositivo de prueba inmunocromatográfica magnética.

Un procedimiento para detectar y cuantificar un analito en una muestra líquida,

usando una tira de prueba de 10 μm a 10 mm de grosor, que comprende una zona de recepción de muestra, una zona de lectura y una entidad móvil en forma de reactivo unido a una o varias partículas como marca detectable y basado en la detección de una cantidad de partículas magnéticas que se unen a una zona de lectura de una tira de prueba como resultado de la realización del procedimiento, estando dicha cantidad vinculada por una función al contenido de analito de la muestra, en el que las partículas magnéticas presentan una característica de magnetización no lineal, tira de prueba la cual está fabricada de material poroso que permite que la muestra líquida y el analito fluyan desde la zona de recepción de muestra en la dirección de, y a través de la zona de lectura y está dispuesta dentro de un estuche o cartucho que está rodeando la tira de prueba y que está provisto de una ventanilla para muestra orientada a la zona de recepción de muestra que permite poner la muestra líquida en contacto con la tira para formar un dispositivo de ensayo, en el que el estuche está fabricado enteramente de un material opaco (no transparente) que es permeable a un campo magnético, en el que para la lectura de la reacción, el dispositivo de ensayo se coloca en una celda de medida de un dispositivo de lectura magnética el cual detecta la cantidad de partículas magnéticas en la zona de lectura sometiéndola a al menos un campo magnético de excitación que tiene aproximadamente el 90 % de su potencia dentro de una banda de frecuencia o una pluralidad de bandas de frecuencia, y el dispositivo de lectura mide el campo de respuesta magnética inducida fuera de dicha banda de frecuencia o dicha pluralidad de bandas de frecuencia.

Procedimiento y dispositivo de prueba inmunocromatográfica magnética

[1] La presente invención se refiere a un procedimiento para la detección y cuantificación de un analito en una muestra. La invención también se refiere a un dispositivo de prueba de flujo lateral.

[2] El documento W24/11942 describe una tira de prueba de ensayo en un casete en forma de C que permite que un detector acceda a la tira de prueba desde el lateral, en lugar de desde el eje longitudinal de la tira de

prueba.

[3] El documento EP1262766 describe la detección y cuantificación de un analito en una muestra en la que se hace uso de partículas magnéticas como medio de detección. Este documento desvela particularmente el uso de mlcrocolumnas rellenas de un material poroso que definen una zona de lectura en la que está inmovilizado

un ligando. Este ligando se escoge para retener específicamente el analito que ha de ser detectado. En primer lugar, la muestra se mezcla con partículas magnéticas unidas a un reactivo que puede reaccionar con el analito, conduciendo a la formación de un complejo que comprende el analito, el reactivo y la partícula magnética. Después, esta mezcla se coloca en la microcolumna y se permite que se difunda en la misma, y el complejo es retenido por los ligandos inmovilizados. La emisión de un campo magnético apropiado permite que se determine la concentración de 2 partículas magnéticas y, finalmente, la concentración del analito en la muestra. Las microcolumnas pueden vaciarse con una estructura capilar o porosa similar a una columna de cromatografía, por ejemplo, microgránulos. El documento también prevé el uso de una tira de material poroso.

[4] El documento US-A-6518747 también se refiere al uso de eventos magnéticos para detectar una 25 reacción sobre una placa de soporte plana. Este documento enseña la medición de la acumulación de partículas

magnéticas en una zona de lectura determinada en la superficie de la placa de soporte. La detección usa sensores Hall y necesita una colocación muy precisa y cercana de la zona de lectura sobre la placa con respecto al campo magnético y, de este modo, la precisión de la lectura se obtiene debido al uso de un espacio muy delgado dentro del cual ha de Insertarse la placa de soporte. De este modo, la precisión de la lectura está estrechamente relacionada 3 con una colocación muy precisa de la placa con respecto al lector.

[5] Además, las tiras o placas desnudas de acuerdo con los documentos EP-A-1262766 y US-A-6518747 son difíciles de manipular antes y después de que se haya aplicado la muestra sobre las mismas, y son susceptibles de contaminaciones.

[6] Sorprendentemente, el solicitante ha descubierto que es posible usar tiras de material poroso protegidas por su Inserción en un estuche o similar en las que la marca comprende partículas magnéticas. De manera más sorprendente, el solicitante ha descubierto que esto es factible económicamente y en la práctica. A pesar de la presencia de un estuche que rodea la tira, es posible someter apropiadamente las partículas magnéticas

a un campo magnético, para detectar con gran sensibilidad las partículas magnéticas en una zona de reacción o de lectura y para cuantlflcar con precisión el analito que se haya presente en la muestra. No era de esperar a partir de los documentos EP1262766 y US-A-6518747 que el uso de un estuche que rodea la tira fuera compatible con la colocación del lector magnético y la lectura de la zona de lectura de tal manera que sea posible una cuantificación precisa. De este modo, el dispositivo y procedimiento de la invención permiten la presencia de un estuche o similar 45 en tanto que sin ser sustancialmente sensible a algunas variaciones de posición, Incluyendo variaciones angulares, de la tira con respecto al campo magnético, sin la necesidad de colocar la tira en una posición predeterminada y muy cercana o equidistante con respecto a los generadores del campo magnético.

[7] En este documento, las palabras "comprender/que comprende" son sinónimas (significan lo mismo 5 que) de "incluir/que Incluye", "contener/que contiene", son inclusivas o abiertas y no excluyen elementos adicionales

no enumerados.

Resumen de la invención

[8] Un primer objeto de la presente invención es un procedimiento para detectar y cuantificar un analito, con preferencia un compuesto biológico o químico, en una muestra líquida, usando una tira de prueba de 1 pm a 1 mm de grosor, que comprende una zona de recepción de muestra, una zona de lectura y una entidad móvil en forma de reactivo unido a una o varias partículas como marca detectable y basado en la detección de una cantidad de partículas magnéticas que se unen a una zona de lectura de una tira de prueba como resultado de la realización del

procedimiento, estando dicha cantidad vinculada por una función al contenido de analito de la muestra, en el que las partículas magnéticas presentan una característica de magnetización no lineal, tira de prueba la cual está fabricada de material poroso que permite que la muestra líquida y el analito fluyan desde la zona de recepción de muestra en la dirección de, y a través de la zona de lectura y está dispuesta dentro de un estuche o cartucho que está rodeando 5 la tira de prueba y que está provisto de una ventanilla para muestra orientada a la zona de recepción de muestra que permite poner la muestra líquida en contacto con la tira para formar un dispositivo de ensayo, en el que el estuche está fabricado enteramente de un material opaco (no transparente) que es permeable a un campo magnético, en el que para la lectura de la reacción, el dispositivo de ensayo se coloca en una celda de medida de un dispositivo de lectura magnética el cual detecta la cantidad de partículas magnéticas en la zona de lectura sometiéndola a al 1 menos un campo magnético de excitación que tiene aproximadamente el 9 % de su potencia dentro de una banda de frecuencia o una pluralidad de bandas de frecuencia, y el dispositivo de lectura mide el campo de respuesta magnética inducida fuera de dicha banda de frecuencia o dicha pluralidad de bandas de frecuencia.

[9] También se describe un procedimiento para detectar y cuantificar un analito, con preferencia un 15 compuesto biológico o químico, en una muestra líquida, basándose en la detección de un evento de unión específico

entre el analito vinculado a las partículas magnéticas (típicamente a un conjugado) o un conjugado y un ligando inmovilizado en una zona de lectura de una tira de prueba, en el que las partículas magnéticas presentan una característica de magnetización no lineal, tira de prueba la cual está fabricada de material poroso y está dispuesta dentro de un estuche o similar para formar un dispositivo de ensayo, en el que en su parte que rodea la zona de 2 lectura, el estuche está fabricado de un material que es permeable a un campo magnético, en el que después de la finalización de la reacción entre ligando y analito, el dispositivo de ensayo se coloca en una celda de medida de un dispositivo de lectura magnética el cual detecta la cantidad de partículas magnéticas en la zona de lectura sometiéndola a al menos un campo magnético de excitación que tiene aproximadamente el 9 % de su densidad espectral de potencia dentro de una banda de frecuencia o una pluralidad de bandas de frecuencia, y el dispositivo 25 de lectura mide el campo de respuesta magnética inducida fuera de dicha banda de frecuencia o dicha pluralidad de bandas de frecuencia.

[1] Otro objeto de la presente invención es un dispositivo de ensayo para detectar y cuantificar un analito en una muestra líquida, el cual puede usarse en el procedimiento de acuerdo con la invención. Este dispositivo

comprende una tira de prueba que tiene una zona de recepción de muestra y una zona de lectura y una entidad móvil en forma de un reactivo unido a una o varias partículas magnéticas como marca detectable, en el que las partículas magnéticas presentan una característica de magnetización no lineal. En una realización, está presente un almohadilla de conjugado en contacto de flujo con la tira. La tira de prueba está fabricada de material poroso que permite que la muestra líquida y el analito fluyan o se difundan desde la zona de recepción de muestra en la 35 dirección de, y a través de la zona de lectura. La tira de prueba está dispuesta dentro de un estuche o cartucho que está rodeando la tira de prueba y que está provisto de una ventanilla para muestra orientada a la zona de recepción de muestra que permite poner la muestra líquida en contacto con la tira. El estuche está fabricado de un material que es permeable a un campo magnético. El estuche está fabricado enteramente de... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para detectar y cuantificar un analito en una muestra líquida, usando una tira de prueba de 1 pm a 1 mm de grosor, que comprende una zona de recepción de muestra, una zona de lectura y una

entidad móvil en forma de reactivo unido a una o varias partículas como marca detectable y basado en la detección de una cantidad de partículas magnéticas que se unen a una zona de lectura de una tira de prueba como resultado de la realización del procedimiento, estando dicha cantidad vinculada por una función al contenido de analito de la muestra, en el que las partículas magnéticas presentan una característica de magnetización no lineal, tira de prueba la cual está fabricada de material poroso que permite que la muestra líquida y el analito fluyan desde la zona de 1 recepción de muestra en la dirección de, y a través de la zona de lectura y está dispuesta dentro de un estuche o cartucho que está rodeando la tira de prueba y que está provisto de una ventanilla para muestra orientada a la zona de recepción de muestra que permite poner la muestra líquida en contacto con la tira para formar un dispositivo de ensayo, en el que el estuche está fabricado enteramente de un material opaco (no transparente) que es permeable a un campo magnético, en el que para la lectura de la reacción, el dispositivo de ensayo se coloca en una celda de 15 medida de un dispositivo de lectura magnética el cual detecta la cantidad de partículas magnéticas en la zona de lectura sometiéndola a al menos un campo magnético de excitación que tiene aproximadamente el 9 % de su potencia dentro de una banda de frecuencia o una pluralidad de bandas de frecuencia, y el dispositivo de lectura mide el campo de respuesta magnética inducida fuera de dicha banda de frecuencia o dicha pluralidad de bandas de frecuencia.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, el cual usa un conjugado constituido por un reactivo vinculado a partículas magnéticas y está basado en la detección de un evento de unión específico entre el analito vinculado al conjugado o el conjugado y un ligando inmovilizado en una zona de lectura de una tira de prueba.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el dispositivo de ensayo se coloca en la celda de medida con el fin de someter la zona de lectura a:

- una etapa de excitación de la partículas magnéticas situadas en la zona de lectura con un campo magnético de 3 excitación que tiene una componente de frecuencia f1 y una componente de frecuencia h, y

- una etapa de medición de la amplitud del campo magnético inducido por las partículas magnéticas en respuesta a la excitación a una componente de frecuencia específica f¡, estando relacionada la frecuencia fi con las componentes de frecuencia fi y h mediante la siguiente relación:

fi = n.fi ± m.f2, donde myn son números enteros > , siendo al menos uno de m y n diferentes de

siendo la amplitud de la componente de frecuencia f¡ directamente proporcional a la cantidad de partículas magnéticas retenidas en la zona de lectura.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que n es 1 ymes±2.

5. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que n o m es cero.

6. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que las

partículas magnéticas son/comprenden un material superparamagnético.

7. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que las partículas superparamagnéticas están fabricadas de o comprenden un material superparamagnético escogido entre

el grupo constituido por Fe2C>3, Fe3Ü4 y mezclas de los mismos.

8. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la celda de medida comprende una bobina de excitación y/o medición que delimita un espacio de lectura cilindrico, el dispositivo de ensayo se coloca en este espacio, el campo de excitación magnética se emite en un plano transversal

a la tira de prueba de manera que la zona de lectura esté sometida por entero o sustancialmente por entero al campo magnético.

9. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el analito es un antígeno o un anticuerpo.

1. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se hace

uso de un dispositivo de ensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17.

11. Un dispositivo de ensayo para detectar y cuantificar un analito en una muestra líquida que comprende

una tira de prueba que tiene una zona de recepción de muestra y una zona de lectura y una entidad móvil en forma de un reactivo unido a una o varias partículas magnéticas como marca detectable, en el que las partículas magnéticas presentan una característica de magnetización no lineal, estando la tira de prueba fabricada de material poroso que permite que la muestra líquida y el analito fluyan o se difundan desde la zona de recepción de muestra 1 en la dirección de, y a través de la zona de lectura, tira de prueba que está dispuesta dentro de un estuche o cartucho que está rodeando la tira de prueba y que está provisto de una ventanilla para muestra orientada a la zona de recepción de muestra que permite poner la muestra líquida en contacto con la tira, en el que el estuche está fabricado enteramente de un material opaco (no transparente) que es permeable a un campo magnético y en el que la tira de prueba tiene un grosor (t) comprendido entre 1 pm y 1 mm.

12. El dispositivo de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el grosor de la tira (t) es entre ,1 mm y ,5 mm.

13. El dispositivo de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el grosor de la tira (t) es superior a ,5 mm 2 e Inferior o Igual a 2 mm.

14. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que la tira de prueba está constituida por una pluralidad de capas (pliegues) superpuestas.

15. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que la tira de

prueba está constituida por una lámina enrollada.

16. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, en el que la tira de prueba tiene una zona de lectura tridimensional que contiene un ligando inmovilizado que es específico para el

analito o análogo, teniendo dicha zona tridimensional la anchura (Zr) entre ,5 y 5 mm.

17. El dispositivo de acuerdo con la reivindicación 16, en el que la zona de lectura tridimensional tiene una anchura (Zr) entre 2 y 5 mm.