Procesador de tejido histológico de una sola cavidad.

Un sistema (100) para el procesamiento de muestras de tejido, que comprende:

al menos una cavidad (104) que comprende una pared lateral (121) y una parte inferior (122) para el procesamiento de dichas muestras de tejido, donde la al menos una cavidad (104) está conectada a un dispositivo (202) de generación de microondas para la aplicación de radiación de microondas a un interior de la al menos una cavidad (104),

al menos un elemento resistivo (205) de calentamiento conectado funcionalmente a la al menos una cavidad (104), donde dicho elemento resistivo (205) de calentamiento está situado dentro de la pared lateral (121) de la cavidad (104), y

un sistema de transferencia de fluido que comprende sistemas de transferencia separados para la cera y para los reactivos para transferir al menos uno de una pluralidad de fluidos desde una pluralidad de recipientes de almacenamiento, que comprenden recipientes (110) para reactivos y un recipiente (212) de almacenamiento de cera, hasta el interior y al exterior de la al menos una cavidad (104) mediante el bombeo directo del fluido dentro y fuera de la al menos una cavidad (104), donde los fluidos comprenden al menos un reactivo y cera fundida, donde por medio de los sistemas de transferencia separados se drenan los reactivos utilizados de vuelta al respectivo recipiente (110) desde el que han sido bombeados a la cavidad (104), o a un depósito (222) de desechos y se devuelve la cera al recipiente de almacenamiento de cera (212), y

caracterizado por que la al menos una cavidad (104) comprende adicionalmente un sistema de drenaje dedicado para cera y un sistema de drenaje dedicado separado para reactivos, cada uno de dichos sistemas de drenaje comprende un agujero de drenaje (400) en forma de U dentro de la pared lateral (121) de la cavidad (104) que tiene la entrada/salida externa (401) de cavidad y la entrada/salida interna (402) de cavidad del agujero de drenaje situadas en la parte inferior de la cavidad (104).

Procesador de tejido histológico de una sola cavidad

Campo de la invención

La presente invención se refiere al tratamiento de muestras de tejido orgánico que están sujetas a una investigación adicional. Más específicamente, la presente invención se refiere al procesamiento de muestras de tejido orgánico al menos a través de una combinación de microondas, y tratamientos térmicos.

Antecedentes de la invención

Las muestras de patología para diagnóstico, y de anatomía patología, en la actualidad se preparan de acuerdo con un método convencional, que comprende a modo de ejemplo:

En primer lugar se trata el tejido a examinar con formol o con una solución salina para detener el proceso de descomposición, y para estabilizar el tejido a fin de protegerlo contra las rigideces físicas y químicas de procesamiento.

Las directrices de patología más recientes, en particular las relativas al protocolo restringido para la preparación del tejido mamario, lanzado por CAP (Colegio Americano de Patólogos) y por la FDA (Administración de Medicamentos y Alimentos) para el mercado de Estados Unidos establecen que los tejidos a estudiar no deben pasar un período superior a 48 horas de fijación en formol. Esta restricción se traduce en un problema logístico para los laboratorios que emplean métodos convencionales, en especial durante los fines de semana y días festivos.

Por ejemplo, si se recibe una muestra de mama a última hora del viernes por la tarde, no podrá prepararse durante el mismo día, pero debe permanecer en el fijador (formol) antes de que su procesamiento completo el siguiente lunes por la mañana. En casos como estos, la exposición del tejido al formol es superior a 48 horas.

En una segunda etapa del método convencional, se deshidrata la muestra, es decir, se retira de la misma una parte o la totalidad del agua libre contenida en la muestra. Durante este procedimiento, se también se disuelven diversos componentes celulares mediante los fluidos deshidratantes, tales como lípidos, que se extraen, y las proteínas solubles en agua, que se disuelven en alcoholes acuosos.

La tercera etapa incluye el tratamiento del tejido con otro disolvente, el denominado agente de aclaramiento (que también elimina los lípidos) . El aclaramiento es la etapa de transición entre la deshidratación e infiltración con un medio de soporte. Dado que muchos deshidratantes son inmiscibles con dicho medio de soporte aplicado posteriormente, se usa un disolvente miscible tanto con el deshidratante como con el medio de inclusión para facilitar la transición entre la etapa de deshidratación y una etapa de infiltración subsiguiente.

La última etapa en el procesamiento de muestras de tejido consiste en la infiltración en las cavidades de tejido y en las células de un medio de soporte, tal como una cera, y finalmente la inclusión del tejido en el medio, lo que proporcionará un soporte externo suficiente durante el posterior procesamiento.

Los procesadores de muestras de tejidos comercializados convencionales emplean el método descrito anteriormente y utilizan una sola retorta para el procedimiento completo de procesamiento de tejidos, introduciendo y extrayendo la secuencia de reactivos (hasta 12) y durante al menos tres secuencias de cera líquida. La transferencia de cera líquida fundida, normalmente entre 55 °C a 65 °C, a través del circuito de fluido y la válvula de reactivos es un punto crítico para el rendimiento técnico del instrumento. Si los usuarios no llevan a cabo procedimientos regulares de limpieza y un mantenimiento preventivo intensivo al menos en este componente de las unidades de tipo convencional, su fiabilidad quedará seriamente comprometida.

Los métodos convencionales muestran, además de las señaladas anteriormente, diversas otras desventajas, tales como largos tiempos de procesamiento de las muestras, que pueden llegar a hasta 50 horas por muestra. Además, 55 deben emplearse grandes cantidades de agente/s de deshidratación y agente/s de aclaramiento. En un procedimiento normal, las muestras se tratan varias veces con el agente deshidratante, por ejemplo etanol en concentraciones crecientes (hasta 100% de etanol) , y posteriormente varias veces con el agente de aclaramiento, con el fin de deshacerse del agente deshidratante. Dado que tienen que emplearse grandes cantidades de disolventes, teniendo a veces dichos disolventes una elevada pureza, los costes de tales procedimientos son considerables.

A partir del artículo de "The Two-Step Vacuum-Microwave Method for Histoprocessing" por M.E. Boon y otros, European Journal of Morphology, Vol. 33, Nº 4, 1.995, páginas 349-358, se conoce un procedimiento histoprocesamiento que intenta resolver algunas de las desventajas anteriormente mencionadas, que presenta 65 tiempos de procesamiento más cortos. El método de histoprocesamiento de tejidos orgánicos divulgado en dicho documento incluye las etapas de la fijación del tejido, deshidratación de la muestra, aclaramiento de la muestra e

inclusión de la muestra en parafina, por lo que la deshidratación y la limpieza de la muestra se llevan a cabo simultáneamente en isopropanol al 100%, en una cámara de vacío calentada por microondas. El isopropanol se utiliza en esta etapa dado que es a la vez un deshidratador débil y un agente de aclaramiento. La temperatura se controla a 55 °C y la presión a 0, 04 MPa (400 mbar) de tal manera que el tejido pueda soportar los peligros del tratamiento sin efectos adversos.

Existen tecnologías patentadas que tratan también de resolver algunos de los anteriores inconvenientes anteriormente indicados, como las incorporadas en el sistema Pathos (MR de Milestone SRL, Italia) . Dicha tecnología presenta una secuencia de etapas de procesamiento diferente de la muestra de patología, empezando por ejemplo por una etapa en la que se desciende la gradilla de muestras al interior de una cavidad de microondas. A continuación se lleva a cabo una etapa posterior de fijación-deshidratación y aclaramiento que implica al menos extraer los lípidos y sustituir las moléculas de agua con etanol o isopropanol. Se añade formol y se lleva a cabo la fijación con una temperatura y una duración de tiempo seleccionados. Se vacía el exceso de formol. Posteriormente, se efectúa una etapa de enjuagado con etanol para eliminar el exceso de formol. A continuación se añade etanol para llevar a cabo una rápida deshidratación del tejido y, posteriormente, se enjuaga el etanol. Se añade isopropanol y se lleva a cabo el aclaramiento. Cuando se utiliza la solución Milestone, las dos últimas etapas anteriormente mencionadas se condensan en una sola. El exceso de disolventes de tejido se evapora al vacío. A continuación se transfiere la gradilla seca a una cavidad calentada por resistencia con parafina a temperaturas de 65-75 ºC. Mientras se calienta la cavidad con una resistencia exterior, se lleva a cabo la impregnación de cera con unas condiciones prefijadas de vacío / temperatura. Al finalizar el procedimiento, el aparato notifica al operador con una alarma auditiva / visual. Para la conservación del tejido, la gradilla permanece en la parafina fundida hasta que se genera un comando manual. Se descarga la gradilla para su posterior procesamiento. Se carga una nueva gradilla. Puede cargarse una nueva gradilla inmediatamente, dado que no se requiere un ciclo de limpieza para el acceso continuo.

Aunque las tecnologías anteriores presentan tiempos de procesamiento más cortos y un procesamiento automatizado, aún presentan inconvenientes tales como que el aparato anterior implica el uso de al menos dos cavidades separadas, una siendo una cavidad de microondas y siendo la segunda una cavidad de calentamiento equipada con una resistencia. El procesador de tejidos todavía emplea una retorta para el procedimiento completo de procesamiento de tejidos, introduciendo y extrayendo la secuencia de reactivos (hasta 12) y 3 secuencias de cera líquida de calidad histológica. La transferencia de cera líquida fundida, normalmente entre 55 °C y 65 °C, a través del circuito de fluido y la válvula de reactivos conlleva depósitos de cera no deseados sobre dicha válvula y dentro del circuito. Sin unos procedimientos de limpieza y un mantenimiento preventivo intensivo regulares, que consumen tiempo y perturban el ritmo, la fiabilidad de estas unidades convencionales se ve seriamente comprometida. Además, el llenado y drenaje de cera en la retorta no son independientes del circuito de reactivos, dando lugar a mezclas no deseadas y a una calidad debilitada del reactivo.

Adicionalmente, tanto en Pathos como en los procesadores de tejidos convencionales, deberán colocarse los reactivos en recipientes dispuestos en una... [Seguir leyendo]

1. Un sistema (100) para el procesamiento de muestras de tejido, que comprende:

al menos una cavidad (104) que comprende una pared lateral (121) y una parte inferior (122) para el procesamiento de dichas muestras de tejido, donde la al menos una cavidad (104) está conectada a un dispositivo (202) de generación de microondas para la aplicación de radiación de microondas a un interior de la al menos una cavidad (104) , al menos un elemento resistivo (205) de calentamiento conectado funcionalmente a la al menos una cavidad (104) , donde dicho elemento resistivo (205) de calentamiento está situado dentro de la pared lateral (121) de la cavidad (104) , y un sistema de transferencia de fluido que comprende sistemas de transferencia separados para la cera y para los reactivos para transferir al menos uno de una pluralidad de fluidos desde una pluralidad de recipientes de almacenamiento, que comprenden recipientes (110) para reactivos y un recipiente (212) de almacenamiento de cera, hasta el interior y al exterior de la al menos una cavidad (104) mediante el bombeo directo del fluido dentro y fuera de la al menos una cavidad (104) , donde los fluidos comprenden al menos un reactivo y cera fundida, donde por medio de los sistemas de transferencia separados se drenan los reactivos utilizados de vuelta al respectivo recipiente (110) desde el que han sido bombeados a la cavidad (104) , o a un depósito (222) de desechos y se devuelve la cera al recipiente de almacenamiento de cera (212) , y caracterizado por que la al menos una cavidad (104) comprende adicionalmente un sistema de drenaje dedicado para cera y un sistema de drenaje dedicado separado para reactivos, cada uno de dichos sistemas de drenaje comprende un agujero de drenaje (400) en forma de U dentro de la pared lateral (121) de la cavidad (104) que tiene la entrada/salida externa (401) de cavidad y la entrada/salida interna (402) de cavidad del agujero de drenaje situadas en la parte inferior de la cavidad (104) . 25

2. El sistema (100) de la reivindicación 1, donde dicho dispositivo resistivo (205) de calentamiento es independiente de dicho dispositivo de generación de microondas, y donde dicho sistema (100) comprende adicionalmente una unidad de control para controlar por separado el de generación de dispositivo de generación de microondas y el dispositivo de generación de energía térmica con el fin de lograr una curva de la temperatura deseada en el interior de la cavidad (104) .

3. El sistema (100) de la reivindicación 1, donde dicho dispositivo resistivo (205) de calentamiento está unido a la cavidad (104) , situado también dentro de la parte inferior de la cavidad (104) , y/o donde dicho al menos un elemento resistivo de calentamiento tiene una forma cilíndrica.

4. El sistema (100) de la reivindicación 3, donde se proporcionan dos elementos resistivos (205) de calentamiento dentro de la pared de la cavidad (104) opuestos entre sí, y dichos dos elementos resistivos (205) de calentamiento se extienden a lo largo de al menos una parte de la pared en una dirección paralela al eje longitudinal de la cavidad

(104) o donde se proporcionan cuatro elementos resistivos (205) de calentamiento dentro de la pared de la cavidad

(104) equidistantes entre sí, y dichos cuatro elementos resistivos (205) de calentamiento se extienden a lo largo de al menos una parte de la pared en una dirección paralela al eje longitudinal de la cavidad (104) , o donde se proporcionan dos elementos resistivos (205) de calentamiento dentro de la pared de la cavidad (104) opuestos entre sí y se proporciona al menos un elemento resistivo (205) de calentamiento adicional dentro de la parte inferior de la cavidad (104) , extendiéndose dichos dos elementos resistivos (205) de calentamiento dentro de la pared a lo largo

de al menos una parte de la pared en una dirección paralela al eje longitudinal de la cavidad (104) .

5. El sistema (100) de la reivindicación 3, donde el elemento resistivo (205) de calentamiento es una lámina resistiva flexible unida a la pared exterior de la cavidad (104) , que consiste preferentemente en un material conductor de silicio.

6. Un método (300) para el procesamiento de muestras de tejido, que comprende:

transferir (302) un portamuestras de tejido de una pluralidad de muestras de tejido a al menos una cavidad (104) , que comprende una pared lateral (121) y una parte inferior (122) , por medio de un dispositivo;

cerrar (304) la al menos una cavidad (104) con una tapa acoplada a dicho portamuestras de tejido; procesar (306) la pluralidad de muestras de tejido en la al menos una cavidad (104) ; transferir selectivamente (308) dentro y fuera de la al menos una cavidad (104) , desde un recipiente de almacenamiento, al menos dos fluidos por medio de un sistema de transferencia de fluido que comprende sistemas de transferencia separados para la cera y para los reactivos comprendiendo los fluidos al menos un reactivo, procedente de un recipiente (110) de almacenamiento de reactivos, y cera procedente de un recipiente (212) de almacenamiento de cera, a través del bombeo secuencial directo dentro y fuera de la al menos una cavidad (104) ; aplicar (310) radiación de microondas y energía térmica, producida por calentamiento resistivo, en el interior de la al menos una cavidad (104) por medio de un dispositivo (202) de generación de microondas y de un dispositivo 65 resistivo de generación de energía térmica, situado dentro de la pared lateral (121) de la cavidad (104) , que está conectado a la al menos una cavidad (104) , donde por medio de los sistemas de transferencia separados se 17

drenan los reactivos usados de vuelta hasta el respectivo recipiente desde el que se han bombeado los mismos al interior de la cavidad (104) o a un depósito (222) de desechos y se devuelve la cera al recipiente (212) de almacenamiento de cera, y caracterizado por que la al menos una cavidad (104) comprende adicionalmente un sistema de drenaje dedicado para cera y un sistema de drenaje dedicado para reactivos separado, comprendiendo cada uno de dichos sistemas de drenaje un agujero (400) de drenaje en forma de U dentro de la pared lateral (121) de la cavidad (104) que tiene la entrada/salida externa (401) de cavidad y la entrada/salida interna (402) de cavidad del agujero de drenaje situadas en la parte inferior (122) de la cavidad (104) .

7. El método (300) de la reivindicación 6, que comprende adicionalmente la etapa de generar un gradiente positivo de energía dentro de la cavidad durante una etapa de aumento gradual de una curva de temperatura deseada empleando radiación de microondas.

8. El método (300) de la reivindicación 7, que comprende adicionalmente las etapas de medir la temperatura actual dentro de la cavidad y emplear energía térmica, generada por el dispositivo de generación de energía térmica, de forma simultánea a la radiación de microondas en caso de que la temperatura medida sea menor que la temperatura de la curva de temperatura deseada.

9. El método (300) para el procesamiento de muestras de tejido de cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, donde mientras se transfiere un primer portamuestras de tejido con una pluralidad de muestras de tejido dentro de dicha cavidad (212) de almacenamiento de cera, se transfiere un segundo portamuestras de tejido con una pluralidad de muestras de tejido dentro de dicha cavidad de microondas, facilitando así el procesamiento en paralelo de dichas primera y segunda pluralidades de muestras de tejido.