Moléculas de unión a antígeno con afinidad de unión a receptores Fc y función efectora incrementadas.

Anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada seleccionada de entre el grupo que consiste de SEC ID nº 32 y SEC ID nº 40,

y

(b) la región variable de cadena ligera de KV1 de SEC ID nº 76.

Moléculas de unión a antlgeno con afinidad de unión a receptores Fe y función efectora incrementadas ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la invención

La exposición se refiere de manera general a moléculas de unión a antlgeno (MUA). En realizaciones particulares, la presente exposición se refiere a anticuerpos monoclonales recombinantes, incluyendo anticuerpo quiméricos, primatizados o humanizados específicos para CD20 humano. Además, la presente exposición se refiere a moléculas de ácidos nucleicos codificantes de dichos MUA y a vectores y células huésped que comprenden dichas moléculas de ácidos nucleicos. La exposición se refiere además a métodos para producir las MUA de la exposición, y a métodos de utilización de los dichos MUA en el tratamiento de enfermedades. Además, la presente exposición se refiere a MUA con glucosilación modificada que presentan propiedades terapéuticas mejoradas, incluyendo anticuerpos con una unión a receptores de Fe incrementada y una función efectora incrementada.

La invención se define en las reivindicaciones. La invención se refiere a un anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada seleccionada de entre el grupo que consiste de SEC ID n° 32 y SEC ID n° 40, y

(b) la región variable de cadena ligera de KV1 de SEC ID n° 76.

Además, la invención se refiere a un anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado que comprende una región variable de cadena pesada que está codificado por una secuencia de ácidos nucleicos que es por lo menos 80% idéntica a SEC ID n° 31 ó a la secuencia SEC ID n° 39 y una región variable de cadena ligera que está codificado por una secuencia de ácidos nucleicos que es por lo menos 80% idéntica a SEC ID n° 75, en el que dicho anticuerpo induce niveles más altos de apoptosis al incubarlo con células humanas positivas para CD20 que un control bajo condiciones idénticas utilizando el anticuerpo lgG1 quimérico C2B8 con una secuencia idéntica a rituximab.

Antecedentes de la técnica

El sistema inmunológico y los anticuerpos anti-CD20

El sistema inmunológico de los vertebrados, incluido el ser humano, consiste de varios órganos y tipos celulares, que han evolucionado para reconocer, unirse y destruir exacta y específicamente los microorganismos foráneos invasores ("antígenos"). Los linfocitos resultan críticos para la función correcta del sistema inmunológico. Estas células se producen en el timo, el bazo y la médula ósea (adulta) y representan aproximadamente 30% de los glóbulos blancos totales presentes en el sistema circulatorios del ser humano adulto. Existen dos subpoblaclones importantes de linfocitos: las células T y las células B. Las células T son responsables de la inmunidad mediada por células, mientras que las células B son responsables de la producción de anticuerpos (inmunidad humoral). Sin embargo, en una respuesta ¡nmunológlca típica, las células T y las células B funcionan independientemente. Las células T son activadas al unirse el receptor de células T a fragmentos de un antígeno que se encuentran unidos a glucoproteínas del complejo de histocompatlbllldad mayor ("CMH") sobre la superficie de una célula presentadora de antígenos; esta activación provoca la liberación de mediadores biológicos ("interleuquinas"), que estimulan a las células B a diferenciarse y producir anticuerpos ("Inmunoglobulinas") contra el antígeno.

Cada célula B dentro del huésped expresa un anticuerpo de un tipo y especificidad particulares, y diferentes células B expresan anticuerpos específicos para diferentes antígenos. La proliferación de las células B y la producción de anticuerpos alcanzan un máximo como reacción a un foráneo antígeno, y típicamente ambos cesan (o se reducen sustanclalmente) tras neutralizar el antígeno foráneo. Ocasionalmente, sin embargo, la proliferación de una célula B particular puede continuar sin control; dicha proliferación puede resultar en un cáncer denominado "llnfoma de células B".

Tanto las células T como las células B comprenden proteínas de superficie celular que pueden utilizarse como "marcadores" para la diferenciación e identificación. Una de estas células B humanas marcadoras es el antígeno Bp35 de diferenciación restringido a linfocitos D, denominado "CD20". CD20 se expresa durante el desarrollo temprano de las células pre-B y permanece hasta la diferenciación de la célula plasmática. Específicamente, la molécula CD20 podría regular una etapa en el proceso de activación que resulta necesaria para el Inicio y diferenciación del ciclo celular, y habltualmente se expresa a niveles muy altos en las células B neoplásicas ("tumorales"). Debido a que CD20 se encuentra presente a niveles elevados sobre células B "malignas", es decir, aquellas células B cuya proliferación no controlada puede conducir a un linfoma de células B, el antígeno de superficie CD20 presenta el potencial de servir como candidato para el "reconocimiento" de los linfomas de células B.

En esencia, dicho reconocimiento puede generalizarse de la manera siguiente: se introducen anticuerpos específicos del antígeno de superficie CD20 de las células B en un paciente, mediante inyección, por ejemplo. Estos anticuerpos anti-CD20 se unen específicamente al antígeno de superficie celular CD20 de, aparentemente, células normales y células B malignas; el anticuerpo anti-CD20 unido al antígeno de superficie CD20 puede conducir a la destrucción y marcada reducción de las células B neoplásicas. Además, algunos agentes químicos o mareajes radioactivos que presentan el potencial de destruir el tumor pueden conjugarse con el anticuerpo anti-CD20 de manera que el agente se "administre" específicamente a, por ejemplo, las células B neoplásicas. Con independencia del enfoque, un objetivo principal es destruir el tumor: el enfoque específico puede ser determinado por el anticuerpo anti-CD20 particular que se utilice y, de esta manera, los enfoques disponibles para el reconocimiento del antígeno CD20 pueden variar considerablemente.

Los anticuerpos monoclonales (mAbs) no conjugados pueden ser medicinas útiles para el tratamiento del cáncer, tal como demuestra la autorización de la U.S. Food and Drug Administraron del Rituximab (RituxanTM; IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA, y Genentech Inc., San Francisco, CA) para el tratamiento de células B CD20- positivas, linfoma no de Hodgkin folicular o de grado bajo, trastuzumab (HerceptinTM, Genentech Inc.), para el tratamiento del cáncer de mama avanzado (Grillo-Lopez, A.-J. et al., Semin. Oncol. 26:66-73, 1999; Goldenberg M.M., Clin Ther. 21:309-18, 1999), Gemtuzumab (MylotargTM, Celltech/Wyeth-Ayerst) para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda en recaída, y Alemtuzumab (CAM-PATHTM, Millenium Pharmaceuticals/Schering AG) para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica de células B. El éxito de estos productos se basa no sólo en su eficacia, sino también en sus excepcionales perfiles de seguridad (Grillo-Lopez A.-J. et al., Semin. Oncol. 26:66-73, 1999; Goldenberg M.M., Clin. Ther. 21:309-18, 1999). A pesar de los éxitos obtenidos con estos fármacos, en la actualidad existe un gran interés en obtener una actividad específica más alta de anticuerpo que la proporcionada típicamente por la terapia de mAb no conjugado. El anticuerpo monoclonal murino B-Ly1 es otro anticuerpo que es conocido que es específico de el CD20 humano (Poppema S. y Visser L., Biotest Bulletin 3:131-139, 1987). Polyak, M.J. y Deans J.P., Blood 99:3256-3262, 2002, describen el anticuerpo B-Ly1 murino como uno de los 16 anticuerpos anti-CD20. Sin embargo, ninguno de los anticuerpos individualmente dado a conocer ha sido caracterizado estructuralmente por completo y ninguno de ellos ha sido dejado en depósito.

Los resultados de varios estudios sugieren que los mecanismos dependientes del receptor Fe contribuyen sustancialmente a la acción de los anticuerpos citotóxicos contra los tumores, e indican que un anticuerpo óptimo contra los tumores se uniría preferentemente a receptores Fe de activación y mínimamente a la pareja inhibidora FcyRIIB (Clynes R.A. et al., Nature Medicine 6(4):443-446, 2000; Kalergis A.M. y Ravetch J.V., J. Exp. Med. 19S(12): 1653-1659, junio de 2002). Por ejemplo, los resultados de por lo menos un estudio sugieren que el receptor FcyRIlia en particular se encuentra fuertemente asociado a la eficacia de la terapia de anticuerpos (Cartron G. etal., Blood 99(3)754-757, febrero de 2002). Este estudio demostró que los pacientes homocigóticos para FcyRIIIa presentaban una mejor respuesta frente al Rituximab que los pacientes heterocigóticos. Los autores concluyeron que la superior respuesta se debía a la mejor unión in vivo... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada seleccionada de entre el grupo que consiste de SEC ID n° 32 y SEC ID n°

40, y

(b) la región variable de cadena ligera de KV1 de SEC ID n° 76.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que la reglón variable de cadena pesada es la secuencia SEC ID n° 40.

3. Anticuerpo antl-CD20 de tipo II humanizado que comprende una región variable de cadena pesada que presenta los residuos determinantes de especificidad de la reglón variable de cadena pesada del anticuerpo según la reivindicación 1 o 2, en el que dicho anticuerpo induce niveles más altos de apoptosis al incubarlo con células humanas positivas para CD20 que un control bajo condiciones idénticas utilizando el anticuerpo lgG1 quimérico C2B8 con una secuencia idéntica a rituximab.

4. Anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado que comprende una región variable de cadena pesada que está codificado por una secuencia de ácidos nucleicos que es por lo menos 80% idéntica a SEC ID n° 31 ó a la secuencia SEC ID n° 39 y una región variable de cadena ligera que está codificado por una secuencia de ácidos nucleicos que es por lo menos 80% idéntica a SEC ID n° 75, en el que dicho anticuerpo induce niveles más altos de apoptosis al incubarlo con células humanas positivas para CD20 que un control bajo condiciones idénticas utilizando el anticuerpo lgG1 quimérico C2B8 con una secuencia idéntica a rituximab.

5. Vector de expresión que comprende un polinucleótido codificante de una región variable de cadena pesada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un polinucleótido codificante de una región variable de cadena ligera según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 4.

6. Vector según la reivindicación 5, que es policistrónico.

7. Célula huésped aislada que comprende el vector de expresión según la reivindicación 5 o 6 o un polinucleótido codificante de una región variable de cadena pesada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un polinucleótido codificante de una región variable de cadena ligera según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 4.

8. Célula huésped según la reivindicación 7, en la que dicha célula huésped ha sido manipulada para expresar por lo menos un ácido nucleico codificante de un polipéptido que presenta actividad de (3(1,4)-N- acetilglucosaminiltransferasa III.

9. Célula huésped según la reivindicación 8, en la que dicho polipéptido que presenta actividad de (3(1,4)-N- acetilglucosaminiltransferasa III es un polipéptido de fusión que comprende además un dominio de localización en Golgi de un polipéptido residente en el Golgi heterólogo.

10. Célula huésped según la reivindicación 9, en la que dicho dominio de localización en el Golgi se selecciona de entre el dominio de localización de la manosidasa II, el dominio de localización de la (3(1,2)-N- acetilglucosaminiltransferasa I, (3(1,2)-N-acet¡lglucosaminiltransferasa II, manosidasa I o a1,6-fucosiltransferasa nuclear.

11. Método para la producción de un anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que comprende cultivar la célula huésped según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10 bajo condiciones que permiten la producción de dicho anticuerpo y recuperar dicho anticuerpo a partir de dicho cultivo.

12. Anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado, en el que el anticuerpo es producido por la célula huésped según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10.

13. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o 12, o producido mediante el método según la reivindicación 11, en el que dicho anticuerpo comprende una región Fe manipulada mediante glucosilación.

14. Anticuerpo según la reivindicación 13, en el que dicho anticuerpo presenta un incremento de la fracción de oligosacáridos no fucosilados unidos a dicha región Fe manipulada mediante glucosilación.

15. Anticuerpo según la reivindicación 13, en el que dicho anticuerpo presenta un incremento de la fracción de oligosacáridos no fucosilados bisectados unidos a dicha región Fe manipulada mediante glucosilación.

16. Anticuerpo según la reivindicación 13, en el que dicho anticuerpo presenta niveles significativamente más altos de unión a receptores FcgammaRIII humanos que el anticuerpo no manipulado mediante glucosilación.

17. Anticuerpo según la reivindicación 13, en el que dicho anticuerpo presenta niveles significativamente más altos de actividad de ADCC que el anticuerpo no manipulado mediante glucosilación.

18. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o 12 a 17, o producida mediante el método según la reivindicación 11, y un portador farmacéuticamente aceptable.

19. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o 12 a 17, o producido mediante el método según la reivindicación 11, para la utilización como medicamento destinado al tratamiento de un trastorno de las células B.

20. Anticuerpo según la reivindicación 19, en el que dicho trastorno de las células B es un linfoma de células B.

21. Utilización del anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o 12 a 17, o producido mediante el método según la reivindicación 11, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de un trastorno tratable mediante la reducción marcada de las células B.

22. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a4o12a17, o producido mediante el método según la reivindicación 11, para la utilización como medicamento destinado al tratamiento de un trastorno tratable mediante la reducción marcada de las células B.

23. Utilización según la reivindicación 21 o anticuerpo según la reivindicación 22, en la que dicho trastorno es una neoplasia hematológica o una enfermedad autoinmunológica.

24. Anticuerpo o utilización según la reivindicación 23, en el que dicha neoplasia hematológica es linfoma de células B, linfoma no de Hodgkin o leucemia linfocítica crónica de las células B.

25. Anticuerpo o utilización según la reivindicación 23, en el que dicha enfermedad autoinmunológica es la artritis reumatolde o el lupus.