Métodos de producción de composiciones de vacuna contra la gripe.

Un método para aumentar el rendimiento de partículas de virus reagrupados de la gripe B adaptados al frío,

método que comprende:

(a) la introducción de una pluralidad de virus reagrupados de la gripe B adaptados al frío en huevos de gallina embrionados SPF;

(b) la incubación de los huevos hospedadores a una temperatura de 31 ± 0,5 ºC; y,

(c) la recuperación de las partículas de virus de la gripe a partir de los huevos hospedadores, mediante lo cual el rendimiento, cuantificado mediante la determinación de un título logarítmico medio del cultivo tisular infeccioso por mililitro de dosis (log10 de la TCID50/ml) del líquido alantoideo de los huevos hospedadores es de al menos 1,01 veces el rendimiento obtenible mediante el cultivo de los huevos a 33 ºC.

Métodos de producción de composiciones de vacuna contra la gripe ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las vacunas contra cepas diversas y en evolución de la gripe son importantes no sólo desde un punto de vista sanitario de la población, sino también comercial mente, ya que cada año numerosos individuos son infectados por diferentes cepas y tipos del virus de la gripe. Los niños, los ancianos, aquellas personas sin los cuidados sanitarios adecuados y las personas inmunodeficientes presentan un riesgo especial de muerte por dichas infecciones. Para mayor preocupación, el problema de las infecciones por gripe es que las nuevas cepas de la gripe evolucionan fácilmente, necesitando por ello la continua producción de nuevas vacunas.

Durante 5 años se han producido numerosas vacunas capaces de producir una respuesta inmunitaria protectora específica para dichos virus diferentes de la gripe e incluyen, por ejemplo, vacunas de virus completos, vacunas de virus degradados, vacunas de antígenos de superficie y vacunas de virus vivos atenuados. Sin embargo, aunque las formulaciones apropiadas de cualquiera de estos tipos de vacunas son capaces de producir una respuesta inmunitaria sistémica, las vacunas de virus vivos atenuados tienen la ventaja de ser también capaces de estimular la inmunidad local de la mucosa en el tracto respiratorio. Una vacuna que comprende un virus vivo atenuado que es susceptible de ser producida de forma rápida y económica y que es susceptible de ser transportada / almacenada con facilidad, es por lo tanto bastante deseable. También serían deseables métodos para aumentar la producción de dichos virus, y por lo tanto de vacunas contra dichos virus, especialmente para las cepas de virus que han demostrado ser difíciles de producir y/o de escalar para la producción comercial mediante el uso de los métodos tradicionales.

Hasta la fecha, toda las vacunas contra la gripe disponibles comercialmente en los Estados Unidos se han propagado en huevos de gallina embrionados. Aunque muchas cepas del virus de la gripe crecen bien en los huevos de gallina, la producción de la vacuna depende de la disponibilidad de dichos huevos. Debido a que debe organizarse el suministro de huevos, y las cepas para la producción de las vacunas deben elegirse con meses de antelación con respecto a la siguiente época de gripe, la flexibilidad de esta metodología puede ser limitada, y a menudo da como resultado retrasos y faltas de producción y de distribución. También, algunas cepas del virus de la gripe crecen peor en huevos (por ejemplo, no se producen con un elevado título) que otras cepas de la gripe. Por lo tanto, son altamente deseables métodos para aumentar la producción, por ejemplo, de las cepas deseadas de dichos virus, y por lo tanto de las vacunas.

En los años recientes también se han desarrollado sistemas para la producción de virus de la gripe en cultivo celular (véase, por ejemplo, Furminger, Vaccine Production, en Nicholson et al. (eds.) Textbook of Influenza, páginas 324 - 332; Merten et al. (1996), Production of influenza virus in cell cultures for vaccine preparation, en Cohén & Shafferman (eds.) Novel Strategies in Design and Production of Vaccines, páginas 141 -151). Sin embargo, dichos sistemas también pueden implicar la producción o el aumento de escala en huevos, y por lo tanto pueden encontrarse con problemas de productividad, especialmente en lo que respecta a algunas cepas específicas. Por lo tanto, también es muy deseable cualquier método para aumentar la producción de virus / vacunas en estos sistemas.

El presente inventor y sus colaboradores han realizado un trabajo considerable en la producción del virus de la gripe para la producción de vacunas; véanse, por ejemplo, las Publicaciones PCT WO 3/9141, el documento WO 5/14862 y las Solicitudes de Patente PCT PCT/US5/17734, depositadas el 2 de mayo de 25, y el documento PCT/US5/35614, depositado el 4 de octubre de 25. La presente invención proporciona métodos para aumentar la producción del virus de la gripe y de composiciones de virus para la producción de composiciones de vacuna. Algunos aspectos de la actual invención son aplicables al huevo de gallina tradicional y a nuevos estilos de producción de vacunas en cultivo celular (y también en sistemas combinados) que comprenden las etapas del crecimiento de los virus en huevos de gallina, y comprenden otros numerosos beneficios que serán apreciables a partir de la revisión de lo siguiente.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La actual invención está definida por las reivindicaciones. Con más detalle, la invención se refiere a un método para aumentar el rendimiento de partículas reagrupadas del virus de la gripe B adaptadas al frío, comprendiendo el método: (a) introducir una pluralidad de virus reagrupados de la gripe B adaptados al frío en huevos de gallina embrionados SPF; (b) incubar los huevos hospedadores a una temperatura de 31 ± ,5 °C; y (c) recuperar las partículas del virus de la gripe a partir de los huevos hospedadores, mediante lo cual el rendimiento, cuantificado mediante la determinación de un título logarítmico medio del cultivo tisular infeccioso por mililitro de dosis (log-iode la TCID5o/ml) del líquido alantoideo de los huevos hospedadores, es de al menos 1,1 veces el rendimiento obtenible mediante el cultivo de los huevos a 33 °C. También se describen en este documento métodos para la producción de partículas del virus de la gripe mediante la introducción de una pluralidad de vectores (por ejemplo, plásmidos, virus, etc., véase a continuación) que comprenden o que codifican para el genoma o el genoma parcial de un virus de la

gripe, en uno o más huevos hospedadores o en otras células hospedadoras (por ejemplo, MDCK y Vero) e Incubar los huevos hospedadores o las otras células hospedadoras (por ejemplo, MDCK y Vero) a una temperatura por debajo de 33 °C; y recuperar las partículas del virus de la gripe a partir de los huevos hospedadores o de las otras células hospedadoras (por ejemplo, MDCK y Vero). La presente divulgación también incluye métodos para aumentar el rendimiento de las partículas del virus de la gripe que comprenden la incubación de dichas partículas víricas a una temperatura por debajo de 33 °C (por ejemplo, a 31 °C) en células hospedadoras (por ejemplo, un cultivo celular continuo de células MDCK o Vero) o en huevos embrionados. El logi del título de la TCID5/ml de las partículas víricas producidas a una temperatura por debajo de 33 °C puede ser mayor que el de las mismas partículas víricas producidas a 33 °C. Los métodos descritos en este documento pueden incluir la introducción del virus de la gripe (por ejemplo, un virus reagrupado) en uno o más huevos embrionados que son capaces de dar soporte a la replicación del virus de la gripe, Infectando así dichos huevos embrionados. Los métodos descritos en este documento también pueden Incluir la Introducción del virus de la gripe (por ejemplo, un virus reagrupado) en células hospedadoras (por ejemplo, MDCK y Vero) que son capaces de dar soporte a la replicación del virus de la gripe, infectando así dichas células hospedadoras. El virus producido puede ser un virus de la gripe de la cepa B, un virus de la gripe atenuado, un virus de la gripe adaptado al frío, un virus de la gripe sensible a la temperatura, un virus de la gripe atenuado sensible a la temperatura adaptado al frío, o cualquier combinación de los mismos. El virus puede comprender un esqueleto de PR8, aunque alternativamente, el virus puede comprender un esqueleto de la cepa de la gripe Ann Arbor B, un esqueleto de B/Leningrad/14/17/55, un esqueleto de B/14/5/1, un esqueleto de B/USSR/6/69, un esqueleto de B/Lenlngrad/179/86, un esqueleto de B/Leningrad/14/55 o un esqueleto de B/England/268/76. El virus puede ser la B/Jilin/2/3 ca. Los huevos pueden ser huevos de gallina SPF. Las células hospedadoras pueden ser células MDCK. También, la incubación por debajo de 33 °C puede comprender la incubación de los huevos o de otras células hospedadoras (por ejemplo, MDCK y Vero) a entre 29 °C y 33 °C, o a entre 31 °C y 33 °C, o a entre 31 °C y 32 °C, o a 31 °C.

También se describe en este documento el virus de la gripe producido mediante dichos métodos anteriores, así como las composiciones que comprenden dichos virus, y vacunas contra la gripe que comprenden dichos virus (por ejemplo, vacunas intranasales de virus vivos atenuados). Dicho virus que puede cultivarse mediante la actual divulgación, puede comprender opcionalmente, por ejemplo, CAIV (virus de la gripe adaptados al frío, por ejemplo, en formulaciones trivalentes), virus tales como los de la Publicación PCT WO 5/14862, virus tales como los descritos, por ejemplo, en las Publicaciones PCT WO 1/183794, en el documento WO /65,... [Seguir leyendo]

1. Un método para aumentar el rendimiento de partículas de virus reagrupados de la gripe B adaptados al frío, método que comprende:

(a) la introducción de una pluralidad de virus reagrupados de la gripe B adaptados al frío en huevos de gallina embrionados SPF;

(b) la incubación de los huevos hospedadores a una temperatura de 31 ± ,5 °C; y,

(c) la recuperación de las partículas de virus de la gripe a partir de los huevos hospedadores, mediante lo cual el

rendimiento, cuantificado mediante la determinación de un título logarítmico medio del cultivo tisular infeccioso

por mililitro de dosis (log-io de la TCIDso/ml) del líquido alantoideo de los huevos hospedadores es de al menos 1,1 veces el rendimiento obtenible mediante el cultivo de los huevos a 33 °C.

2. El método de la reivindicación 1, en el que el virus reagrupado de la gripe B adaptado al frío comprende un 15 genoma parcial del virus de la gripe B B/USSR/6/69.

3. El método de la reivindicación 1 o 2, en el que los huevos hospedadores se incuban a 31 °C.

4. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el virus reagrupado de la gripe B adaptado al 2 frío es un reagrupado 6:2.

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el virus reagrupado de la gripe B adaptado al frío comprende un genoma parcial del virus de la gripe B/Ann Arbor/1/66.