Detección de cannabinoides sintéticos.

Uno o más inmunógenos de las siguientes estructuras**Fórmula**

Detección de cannabinoides sintéticos Antecedentes

El aumento creciente en el uso de drogas encubiertas (drogas sintéticas novedosas que previamente estaban, o permanecen, sin caracterizar analíticamente/estructuralmente y sin clasificar por instituciones gubernamentales), se ejemplifica mediante productos cannabinoides sintéticos que incorporan JWH-018 y/o CP 47.497 como principio activo. Los fabricantes de drogas cannabinoides sintéticas encubiertas (SSC) pueden basar su elección de diana molecular activa en estudios de la bibliografía científica que abordan el potencial terapéutico de agonistas y antagonistas de CBi (el receptor de cannabinoides del SNC). Mediante la incorporación de compuestos novedosos, sin caracterizar analíticamente, con alta afinidad por el receptor CBi en mezclas de hierbas (envasadas con nombres tales como Spice, Yucatán Fire) los fabricantes pueden dirigirse legalmente a los consumidores de drogas promocionando clandestinamente el material como producto terapéutico herbal. Un problema para los gobiernos y las agencias de lucha contra la droga es que incluso tras identificar y prohibir un nuevo cannabinoide sintético, los fabricantes pueden reaccionar rápidamente a la prohibición incorporando un análogo activo diferente en el mismo producto herbal o uno diferente; pequeños cambios específicos en la estructura molecular del compuesto activo conocido pueden preservar la actividad del receptor pero a menudo producen una molécula cuyo perfil de CG- EM/CL-EM (las técnicas de detección aplicadas comúnmente) es completamente diferente del de la molécula activa original. Así, la nueva molécula activa permanece inicialmente sin identificar y es preciso un estudio químico- analítico adicional y costoso, y que requiere muchos recursos para permitir la caracterización estructural. Los principales principios activos destacados en los productos SSC hasta la fecha son JWH-018, CP 47.497 y JWH-073 (Uchiyama et al. 2010; Hudson et al. 2010; Dresen et al. 2010). Los estudios iniciales del metabolismo de compuestos de tipo JWH y CP han destacado procesos metabólicos similares al metabolismo del tetrahidrocannabinol (THC), concretamente hidroxilación, carboxilación y glucuronidación del sustituyente de anillo y alquilo. Tal como se describe en el presente documento, a menos de indicarse otra cosa, JWH se refiere a moléculas que comprenden la estructura I que son activas frente a CBi o metabolitos del compuesto original activo frente a CBi, en las que el sistema de anillo de indol está presente como un grupo heterobicíclico condensado, es decir, no forma parte de, por ejemplo, un sistema de anillo heterotricíclico condensado. Y puede ser hidrógeno o un grupo alquilo sustituido o no sustituido tal como butilo, pentilo o 2-(morfolin-4-il)etilo, mientras que R es un átomo de carbono que puede formar parte de un anillo aromático, condensado o no condensado, sustituido o no sustituido, o una cadena de alquilo, alquenilo o alquinilo sustituida o no sustituida unida opcionalmente a un anillo aromático, condensado o no condensado, sustituido o no sustituido, pero es habitualmente un anillo de naftilo sustituido o no sustituido.

CP se refiere a moléculas de cannabinoide sintético que comprenden la estructura II bicíclica no condensada II, en la que X es etilo, n-propilo o n-butilo así como metabolitos de los mismos.

o

Y

Estructura I

o

Estructura II

Los metabolitos de indolilo, naftilo, carboxialquilo, N-desalquilado y de N-alquilo mono-, di- y tri-hidroxilado, así como sus conjugados glucuronidados son metabolitos de JWH-018 notificados (Sobolevsky et al. 2010; Kraemer et al. 2008). Moller et al. (2010) destacaron los mismos metabolitos que Sobolevsky et al. (2010), siendo la cadena de N- alquilo monohidroxilado el metabolito de fase I más abundante; Wintermeyer et al. (2010) realizaron un estudio in vitro que confirmó en gran medida los resultados previos. Se han analizado productos terapéuticos herbales usando extracción con disolventes, derivatización previa y finalmente análisis mediante CG-EM en modo SIM (Rana et al. 2010). Este método es inadecuado para la detección de SSC de tipo JWH y CP futuros y "actuales" (resulta concebible que los productos terapéuticos herbales "actuales", así como JWH-018 y CP 47.497, incorporen SSC de tipo JWH y CP que aún no se han caracterizado), y requiere la derivatización previa de la muestra, personal especializado para su ¡mplementación y equipos caros. El documento EP0736529 A1 da a conocer un método para detectar metabolitos del tetrahidrocannabinol usando anticuerpos contra dichos cannabinoides en ¡nmunoanálisis. Para abordar el problema asociado con la detección económica y rápida de moléculas de tipo JWH y CP conocidas y sus metabolitos y/o metabolitos futuros y asociados basándose en las familias de drogas de tipo JWH y CP, los inventores diseñaron un método novedoso basado en anticuerpos novedosos producidos a partir de inmunógenos novedosos. Los anticuerpos respaldan una solución analítica y económica eficaz para la detección y cuantificación de moléculas activas frente a CBi de tipo JWH y CP actuales y futuras en muestras de pacientes in vitro y productos terapéuticos herbales.

Bibliografía

Dresen et al. (2010). J. Mass Spectrom., 45: 1186-1194.

Kraemer et al. (2008). http://www.gtfch.org/cms/images/stories/ media/tk/tk76_2/ abstractsvortraege.pdf Hudson etal. (2010). J. Anal. Toxicol., 34: 252-260.

Moller et al. (2010). Drug Test Anal. 24 de sep. [publicación electrónica avance de la edición impresa].

Rana et al. (2010). Quantitative composition of synthetic cannabinomimetics in "Herbal High" products. Póster en SOFT 2010 Annual Meeting, Richmond, Virginia, EE.UU.

Sobolevsky etal. (2010). Foren. Sci. Int., 200(1-3): 141-147.

Uchiyama et al. (2010). Foren. Sci. Int., 198: 31-38.

Wintermeyer ef al. (2010). Anal. Bioanal. Chem., 398: 2141-2153.

Documento EP 0 736 529

Sumario de la invención

La invención describe un método rápido y práctico para la detección y determinación de cannabinoides sintéticos conocidos y/o encubiertos basados en las familias de drogas de tipo JWH y CP. También se describen kits y su uso para la detección y determinación de SSC de tipo JWH y CP en productos terapéuticos herbales y muestras de pacientes in vitro. La invención está respaldada por inmunógenos y anticuerpos novedosos que facilitan dichos métodos, kits y aplicaciones.

Dibujos

Figura 1 Síntesis de hapteno A Figura 2 Síntesis de hapteno B Figura 3 Síntesis de hapteno C Figura 4 Síntesis de hapteno D Figura 5 Inmunógenos I, II y III Figura 6 Moléculas representativas de la familia JWH

Figura 7 Metabolitos de tipo JWH identificados e hipotéticos (n = 1-2). Los metabolitos hidroxilados potencialmente se metabolizan además al/a los glucurónido(s) correspondiente(s)

Figura 8 Moléculas activas frente a CBi de la familia CP

Descripción detallada de la invención

La invención proporciona inmunógenos, anticuerpos, métodos, kits, usos y sustratos sólidos tal como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Un primer aspecto de la invención es uno o más inmunógenos que presentan las siguientes estructuras

GrUpo ' (a)~(d) (inmunógenos de la familia JWH)

accm

Grupo II (e)-(h) (inmunógenos de la familia CP)

en las que el accm es un material portador que confiere antigenlcldad; el agente retlculante es un grupo de unión funcionalizado que une el accm a la parte restante de la molécula. Por funcionalizado quiere decirse que el agente reticulante incorpora átomos que le permiten unirse tanto al accm como al resto de tipo JWH o CP, formando un grupo de unión en puente. En la estructura (e), el agente reticulante forma un enlace sencillo o uno doble con el anillo de ciclohexilo, en la estructura (c) el agente reticulante se extiende desde la posición 4, 5, 6 ó 7 del anillo de indol y en la estructura (d) el agente reticulante se extiende desde la posición 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 del anillo de naftilo. El concepto de agente reticulante lo conoce bien el experto en la síntesis de inmunógenos. Para la presente invención, cuando se conjuga el hapteno con el accm para formar el inmunógeno, la naturaleza y longitud del agente reticulante sigue métodos convencionales para optimizar el reconocimiento epitópico de haptenos por el anticuerpo. Esto conlleva un agente reticulante de baja inmunogenicidad y una longitud de cadena preferiblemente no mayor de aproximadamente diez átomos, lo más preferiblemente no mayor de seis átomos.

Uno o más inmunógenos de las siguientes estructuras

en las que el accm es un material portador que confiere antigenicidad elegido de una proteína, un fragmento de proteína, un polipéptido sintético o un polipéptido semisintético; el agente reticulante es un grupo de unión funcionalizado, preferiblemente de no más de 10 átomos de cadena lineal, lo más preferiblemente de no más de 6 átomos de cadena lineal, que une el accm a la parte restante de la molécula, que es para las estructuras (a), (b), (c), (d), (f) y (h) -X-Y- donde Y se elige de carbonilo, amino, tiol, maleimida, isocianato, isotiocianato, aldehido, diazo y ditiopiridilo y se une al accm, y X para la estructura (a) es -(CO)n-D- donde n = 0 ó 1, y D que se une a Y es un resto alquileno o arileno, de cadena lineal, sustituido o no sustituido C-mo, preferiblemente C1.5, y X para las estructuras (b), (c), (d), (f) y (h) es - (A)n-D- donde A = O, -N(R)-, S, -S(O)- o -S(0)2- donde R = H o alquilo C1-5, n = 0 ó 1, D que se une a Y es un resto alquileno o arileno, de cadena lineal, sustituido o no sustituido C-mo, preferiblemente C1.5, extendiéndose el agente reticulante de estructura (c) desde la posición 4, 5, 6 ó 7 del anillo de indol;

para la estructura (e) m = 1-3 y el agente reticulante es -(L)p-M-Q- o =N-0-M-Q- donde Q, que se une al accm, se elige de carbonilo, amino, tiol, maleimida, isocianato, isotiocianato, aldehido, diazo y ditiopiridilo, M es un resto alquileno o arileno, de cadena lineal, sustituido o no sustituido C-mo, preferiblemente C1.5, p = 0 ó 1 y L es O, NH, S, éster, tioéster o amida;

para la estructura (g) m = 1-3 y el agente reticulante es -(L)p-M-N- donde N, que se une al accm, es o carbonilo o amino, M es un resto alquileno o arileno, de cadena lineal, sustituido o no sustituido C-mo, preferiblemente C1.5, p = Oó1yLesO, NH, S, éster, tioéster o amida.

Inmunógeno de estructura (c) según la reivindicación 1, en el que el agente reticulante se extiende desde la posición 5 del anillo de indol.

Inmunógenos de estructuras (a) y (c) según la reivindicación 1, donde el inmunógeno (a) tiene Y = carbonilo, n = 0 y D = pentileno y el inmunógeno (c), donde el agente reticulante se extiende desde la posición 5 del anillo de indol, tiene Y = carbonilo, A = 0, n = 1yD = metileno.

Anticuerpo producido frente a un inmunógeno de cualquiera de las estructuras (a), (b), (c), (d), (e), (f), (g) o (h) según la reivindicación 1, donde un anticuerpo producido frente a un inmunógeno de estructura (a), (b), (c) o (d) puede unirse a un epítopo de una o más moléculas de la familia JWH, y donde un anticuerpo producido frente a un Inmunógeno de estructura (e), (f), (g) o (h) puede unirse a un epítopo de una o más moléculas de la familia CP.

Anticuerpo según la reivindicación 4, producido frente a un Inmunógeno de estructura (a), que puede unirse