Células posparto derivadas de tejido del cordón umbilical y métodos de preparación y uso de las mismas para la reparación y regeneración de tejido blando.

Una población homogénea aislada de células derivadas de tejido del cordón umbilical humano,

para su uso en inducir angiogénesis, en la que dicha población de células es obtenible por digestión enzimática de tejido del cordón umbilical humano libre de sangre con una metaloproteasa de matriz, proteasa neutra y enzima mucolítica, y en la que dicha población de células es capaz de auto-renovación y expansión en cultivo, tiene el potencial de diferenciarse en células de otros fenotipos, y en la que la población de células:

a) produce cada uno de CD10, CD13, CD44, CD73, CD90, HLA-A, B, C y PDGFr-alfa, como se detecta por citometría de flujo; y

b) no produce ninguno de CD31, CD34, CD45, CD117, CD141 y HLA-DR,DP,DQ, como se detecta por citometría de flujo.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de la biología de células de mamífero y cultivo celular. En particular, la invención se refiere a células cultivadas derivadas de tejido posparto que tienen el potencial de sostener células de y/o diferenciarse en células de un linaje de tejido blando, y métodos de preparación y uso de aquellas células derivadas de tejido posparto. La invención también se refiere a métodos para el uso de tales células derivadas del posparto en la regeneración y reparación de tejido blando, y en terapias basadas en células para afecciones de tejido blando.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las lesiones al tejido blando, por ejemplo, tejido vascular, de la piel o musculoesquelético, son bastante comunes. Un ejemplo de una lesión al tejido blando bastante común es el daño al suelo pélvico. Éstas es una afección médica posiblemente grave que puede producirse durante el parto o de complicaciones del mismo que pueden conducir a daño a la fascia vesicovaginal. Una lesión tal puede producir un cistocele, que es una hernia de la vejiga. Afecciones médicas similares incluyen rectoceles (una hernia del recto), enteroceles (una protrusión del intestino a través de la bolsa rectovaginal o vesicovaginal) y enterocistoceles (una hernia doble en la que tanto la vejiga como el intestino sobresalen).

La manifestación básica de una hernia es una protrusión de un órgano en un defecto dentro de la fascia. Los enfoques quirúrgicos hacia la reparación de la hernia se han centrado en reducir la presencia del contenido hemiario en la cavidad peritoneal y generar un cierre firme del defecto fascial tanto usando materiales protésicos, alógenos como autólogos. Se han usado varias técnicas para producir este cierre, que incluye el movimiento de tejidos autólogos y el uso de productos de malla sintéticos. Los inconvenientes a estos productos y procedimientos actuales incluyen reaparición de la hernia tras el debilitamiento del cierre.

En otro ejemplo más, los ligamentos y tendones son estructuras viscoelásticas que median en el movimiento y estabilidad normal de las articulaciones y se someten a desgarro y fragilidad con la edad o lesión. Estas estructuras son estructuras colagenosas complejas relativamente estáticas con enlaces funcionales al hueso, músculo, menisco y otros tendones y ligamentos próximos.

Las afecciones del tejido blando incluyen adicionalmente, por ejemplo, afecciones de la piel (por ejemplo, revisión de cicatrices o el tratamiento de heridas traumáticas, quemaduras graves, úlceras de la piel (por ejemplo, úlceras de decúbito (presión), úlceras venosas y úlceras diabéticas) y heridas quirúrgicas tales como aquellas asociadas a la extirpación de cánceres de piel); afección vascular (por ejemplo, enfermedad vascular tal como enfermedad arterial periférica, aneurisma aórtico abdominal, enfermedad de la carótida y enfermedad venosa; lesión vascular; desarrollo vascular inapropiado); afecciones que afectan las cuerdas vocales; afecciones cosméticas (por ejemplo, aquellas que implican reparación, aumento, o embellecimiento); enfermedades musculares (por ejemplo, miopatías congénitas; miastenia grave; enfermedades musculares inflamatorias, neurogénicas y miogénicas; y distrofias musculares tales como distrofia muscular de Duchenne, distrofia muscular de Becker, distrofia miotónica, distrofia muscular de cinturas, distrofia muscular facioescapulohumeral, distrofias musculares congénitas, distrofia muscular oculofaríngea, distrofia muscular distal y distrofia muscular de Emery-Dreifuss); afecciones de tejidos conjuntivos tales como tendones y ligamentos, que incluyen, pero no se limitan a, un ligamento periodontal y ligamento cruzado anterior; y afecciones de órganos y/o fascia (por ejemplo, la vejiga, intestino, suelo pélvico).

Los enfoques quirúrgicos para corregir los defectos de tejido blando en el cuerpo generalmente implican la implantación de estructuras hechas de materiales inertes biocompatibles que intentan reemplazar o sustituir la función defectuosa. La implantación de materiales no biodegradables produce estructuras permanentes que permanecen en el cuerpo como un objeto extraño. Se sugieren implantes que están hechos de materiales resorbibles para su uso como sustituciones temporales en las que el objetivo es permitir que el proceso de curación reemplace del material resorbido. Sin embargo, estos enfoques se han cumplido con éxito limitado para la corrección a largo plazo de estructuras en el cuerpo.

Así, novedosas pautas terapéuticas para afecciones relacionadas con el tejido blando son de gran significancia clínica.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona una población homogénea aislada de células derivadas de tejido del cordón umbilical humano, para su uso en inducir angiogénesis, en la que dicha población de células es obtenible por digestión enzimática de tejido del cordón umbilical humano libre de sangre con una metaloproteasa de matriz, proteasa neutra

y enzima mucolítica, y en la que dicha población de células es capaz de auto-renovación y expansión en cultivo, tiene el potencial de diferenciarse en células de otros fenotipos, y en la que la población de células:

a) produce cada uno de CD10, CD13, CD44, CD73, CD90, HLA-A, B, C y PDGFr-alfa, como se detecta por citometría de flujo; y

b) no produce ninguno de CD31, CD34, CD45, CD117, CD141 y HLA-DR,DP,DQ, como se detecta por citometría de flujo.

La Invención también proporciona una población homogénea aislada de células derivadas de tejido del cordón umbilical humano, para su uso en producir una red vascular in vivo, en la que dicha población de células es obtenible por digestión enzimática de tejido del cordón umbilical humano libre de sangre con una metaloproteasa de matriz, proteasa neutra y enzima mucolítica, y en la que dicha población de células es capaz de auto-renovación y expansión en cultivo, tiene el potencial de diferenciarse en células de otros fenotipos, y en la que la población de células:

a) produce cada uno de CD10, CD13, CD44, CD73, CD90, HLA-A, B, C y PDGFr-alfa, como se detecta por citometría de flujo; y

b) no produce ninguno de CD31, CD34, CD45, CD117, CD141 y HLA-DR,DP,DQ, como se detecta por citometría de flujo.

La divulgación se refiere generalmente a células derivadas del posparto que se derivan de tejido posparto que está sustancialmente libre de sangre y que es capaz de auto-renovación y expansión en cultivo y que tiene el potencial de diferenciarse en o proporcionar soporte trófico a una célula de un linaje mesodérmico o ectodérmico, por ejemplo, un fenotipo de célula de tejido blando.

En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona células derivadas de tejido posparto humano sustancialmente libre de sangre, que es capaz de auto-renovación y expansión en cultivo, que tiene la capacidad de diferenciarse en o proporcionar soporte trófico a células de un fenotipo de tejido blando o de diferenciarse en células de un fenotipo de tejido blando; que requiere L-valina para el crecimiento; capaz de crecer en aproximadamente 5 % a aproximadamente 20 % de oxígeno; y adicionalmente que tiene al menos una de las siguientes características:

producción de al menos uno de GCP-2, factor de tejido, vimentina y alfa-actina de músculo liso;

falta de producción de al menos uno de falta de producción de al menos uno de NOGO-A, GRO-alfa o receptor de

lipoproteínas de baja densidad oxidadas, como se detecta por citometría de flujo;

producción de al menos uno de CD10, CD13, CD44, CD73, CD90, PDGFr-alfa, PD-L2 y HLA-A, B, C;

falta de producción de al menos uno de CD31, CD34, CD45, CD80, CD86, CD117, CD141, CD 178, B7-H2, HLA-G,

y HLA-DR,DP,DQ, como se detecta por citometría de flujo;

la expresión, que con respecto a una célula humana que es un fibroblasto, un cltoblasto mesenqulmatoso, o una célula de la médula ósea de las crestas Ilíacas, es elevada para al menos uno de ¡nterleuclna 8; retlculon 1; ligando 1 de qulmloclnas (motivo C-X-C) (actividad estimulante del crecimiento de melanoma, alfa); ligando 6 de quimiocinas (motivo C-X-C) (proteína 2 quimiotáctica de granulocitos); ligando 3 de quimiocinas (motivo C-X-C); y proteína 3 inducida por el factor de necrosis tumoral alfa, o la expresión, que con respecto a una célula humana que es un fibroblasto, un citoblasto mesenquimatoso, o una célula de la médula ósea de las crestas Ilíacas, es elevada para al menos uno del miembro A2 de la superfamilia de lectina tipo C, tumor 1 de Wilms, miembro A2 de la familia de la aldehido deshidrogenasa 1, renina, receptor 1 de lipoproteínas de baja... [Seguir leyendo]

1. Una población homogénea aislada de células derivadas de tejido del cordón umbilical humano, para su uso en inducir angiogénesis, en la que dicha población de células es obtenible por digestión enzimática de tejido del cordón umbilical humano libre de sangre con una metaloproteasa de matriz, proteasa neutra y enzima mucolítica, y en la que dicha población de células es capaz de auto-renovación y expansión en cultivo, tiene el potencial de diferenciarse en células de otros fenotipos, y en la que la población de células:

a) produce cada uno de CD10, CD13, CD44, CD73, CD90, HLA-A, B, C y PDGFr-alfa, como se detecta por citometría de flujo; y

b) no produce ninguno de CD31, CD34, CD45, CD117, CD141 y HLA-DR,DP,DQ, como se detecta por citometría de flujo.

2. Una población homogénea aislada de células derivadas de tejido del cordón umbilical humano, para su uso en producir una red vascular in vivo, en la que dicha población de células es obtenible por digestión enzimática de tejido del cordón umbilical humano libre de sangre con una metaloproteasa de matriz, proteasa neutra y enzima mucolítica, y en la que dicha población de células es capaz de auto-renovación y expansión en cultivo, tiene el potencial de diferenciarse en células de otros fenotipos, y en la que la población de células:

a) produce cada uno de CD10, CD13, CD44, CD73, CD90, HLA-A, B, C y PDGFr-alfa, como se detecta por citometría de flujo; y

b) no produce ninguno de CD31, CD34, CD45, CD117, CD141 y HLA-DR,DP,DQ, como se detecta por citometría de flujo.

3. La población de células para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicha población de células requiere L-valina para el crecimiento.

4. La población de células para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicha población de células se obtiene por digestión enzimática de tejido del cordón umbilical humano con colagenasa, dispasa e hialuronidasa.

5. La población de células para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que las células se administran como mezclas con otras células.

6. La población de células para el uso de la reivindicación 5, en la que las otras células son células epiteliales, células de la médula ósea, adipocitos, queratinocitos, células endoteliales vasculares, mioblastos, miocitos, células del estroma, u otras células de tejido blando.

7. La población de células para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que las células se administran con otro fármaco o molécula biológica.

8. La población de células para el uso de la reivindicación 7, en la que las células se administran con el fármaco o molécula biológica adicional, junto en una única composición farmacéutica o en composiciones farmacéuticas separadas, simultáneamente o secuencialmente.

9. La población de células para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que las células se siembran sobre un andamiaje tridimensional antes de la implantación.