Virus influenza reordenantes.

Virus influenza reordenante 6:2, en el que dicho virus comprende 6 segmentos de genoma internos de uno o más virus donadores distintos de A/Ann Arbor/6/60 y 2 segmentos de genoma de antígeno de superficie,

en el que los segmentos de genoma de antígeno de superficie codifican para un polipéptido de HA y uno de NA, en el que el segmento de genoma de antígeno de superficie que codifica para el polipéptido de HA produce un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 83

Virus influenza reordenantes Antecedentes de la invención Las vacunas contra cepas de influenza diversas y en evolución son importantes desde un punto de vista de salud comunitaria, así como comercial, puesto que cada año numerosos individuos se infectan con diferentes cepas y tipos de virus influenza. Los lactantes, los ancianos, las personas sin asistencia sanitaria adecuada y las inmunocomprometidas corren un riesgo especial de muerte debido a tales infecciones. El problema de las infecciones por influenza se ve agravado porque las cepas de influenza novedosas evolucionan fácilmente y pueden propagarse entre diversas especies, haciendo así que sea necesaria la producción continua de nuevas vacunas.

Se han producido numerosas vacunas que pueden producir una respuesta inmunitaria protectora específica para diferentes virus/cepas de virus influenza durante más de 50 años e incluyen vacunas de virus completos, vacunas de virus divididos, vacunas de antígenos de superficie y vacunas de virus vivos atenuados. Sin embargo, aunque formulaciones apropiadas de cualquiera de estos tipos de vacuna pueden producir una respuesta inmunitaria sistémica, las vacunas de virus vivos atenuados tienen la ventaja de poder estimular también la inmunidad de la mucosa local en las vías respiratorias. Se ha realizado un trabajo considerable en la producción de virus influenza, y fragmentos de los mismos, para la producción de vacunas por los presentes inventores y colaboradores; véanse, por ejemplo, la solicitud estadounidense nº 60/420.708, presentada el 23 de octubre de 2002, la solicitud estadounidense nº 10/423.828, presentada el 25 de abril de 2003 y la solicitud estadounidense nº 60/574.117, presentada el 24 de mayo de 2004, todas tituladas “Multi-Plasmid System for the Production of Influenza Virus”.

Debido a la aparición (o reaparición) continua de diferentes cepas de influenza, se desean continuamente nuevas vacunas contra la gripe. Tales vacunas se crean normalmente usando restos antigénicos de las cepas de virus de aparición reciente de modo que, por tanto, son altamente deseables polipéptidos y polinucleótidos de cepas de virus novedosas, de aparición reciente o de reaparición reciente (especialmente secuencias de genes antigénicos) . Además, también son altamente deseables tales secuencias dentro de vectores preferidos.

La presente invención proporciona variantes de hemaglutinina y neuraminidasa de influenza nuevas y/o recientemente aisladas, opcionalmente dentro de vectores preferidos, que pueden usarse en la producción de numerosos tipos de vacunas así como en investigación, diagnóstico, etc. Otros numerosos beneficios resultarán evidentes tras la revisión de lo siguiente.

Sumario de la invención En algunos aspectos en el presente documento, la invención comprende un virus influenza reordenante 6:2, en el que dicho virus comprende 6 segmentos de genoma internos de uno o más virus donadores distintos de A/Ann Arbor/6/60 y 2 segmentos de genoma de antígeno de superficie, en el que los segmentos de genoma de antígeno de superficie codifican para un polipéptido HA y uno de NA, en el que el segmento de genoma de antígeno de superficie que codifica para el polipéptido de HA produce un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 83.

La invención proporciona un virus influenza reordenante que incluye un polipéptido de HA que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 83. Se proporciona un virus influenza reordenante según la reivindicación 1 para su uso en métodos para estimular el sistema inmunitario de un individuo para producir una respuesta inmunitaria protectora frente a virus influenza, a través de la administración de una cantidad inmunológicamente eficaz de tal virus influenza recombinante en un portador fisiológicamente aceptable, también son parte de la invención. Tal virus puede comprender opcionalmente un virus reordenante 6:2 con 6 genes que codifican para regiones de uno o más virus donadores (por ejemplo A/AA/6/60, B/Ann Arbor/1/66, A/Puerto Rico/8/34, que se conoce más comúnmente como PR8) , B/Leningrad/14/17/55, B/14/5/1, B/USSR/60/69, B/Leningrad/179/86, B/Leningrad/14/55 o B/England/2608/76 y 2 regiones codificantes génicas que codifican para HA y NA, por ejemplo SEQ ID NO:35. Composiciones inmunogénicas que comprenden tal virus reordenante (recombinante) también son características de la invención.

Los virus de reordenamiento (opcionalmente virus vivos) de la invención pueden incluir virus donadores que son uno o más de, por ejemplo, sensibles a la temperatura (ts) , adaptados al frío (ca) o atenuados (att) . Por ejemplo, los virus de reordenamiento pueden comprender, por ejemplo, A/Ann Arbor/6/60, B/Ann Arbor/1/66, A/Puerto Rico/8/34, B/Leningrad/14/17/55, B/14/5/1, B/USSR/60/69, B/Leningrad/179/86, B/Leningrad/14/55 o B/England/2608/76, etc. En muchas realizaciones, los virus producidos son virus vivos (por ejemplo, que van a usarse en vacunas, etc.) . Otras realizaciones incluyen virus muertos o inactivados (por ejemplo, que también pueden usarse en vacunas, etc.) . Células que comprenden cualquiera de los virus anteriores también son productos de la invención.

Métodos de producción de virus influenza reordenante/recombinante a través del cultivo de una célula huésped que alberga un virus influenza en un medio de cultivo adecuado en condiciones que permiten la expresión de ácido

nucleico; y aislamiento y recuperación del virus influenza recombinante de uno o más de la célula huésped o el medio también son parte de la invención. Por tanto, la introducción de una pluralidad de vectores que tienen un genoma de virus influenza en una población de células huésped en la que los vectores comprenden al menos 6 segmentos de genoma internos de una primera cepa de influenza (de nuevo, por ejemplo, B/AA/1/66, A/PR/8/34, B/Leningrad/14/17/55, B/14/5/1, B/USSR/60/69, B/Leningrad/179/86, B/Leningrad/14/55 o B/England/2608/76, etc.) y al menos uno (y preferiblemente dos) segmentos de genoma se seleccionan de una segunda cepa de influenza, segmentos de genoma que comprenden el polinucleótido de SEQ ID NO: 35 o un polinucleótido que codifica para un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 83. Preferiblemente, la primera cepa de virus está adaptada al frío y/o es sensible a la temperatura y/o está atenuada. También preferiblemente, tales virus son adecuados para su administración como parte de una formulación de vacuna intranasal. Por supuesto, otras realizaciones son adecuadas para su administración como formulaciones de vacunas desactivadas o inactivadas, formulaciones de vacunas no nasales vivas/atenuadas, etc. Los vectores en tales métodos pueden comprender virus influenza A y/o virus influenza B. Las células huésped para tales métodos pueden comprender opcionalmente, por ejemplo, células Vero, células PerC6, células MDCK, células 293T, células COS, etc. Las realizaciones típicas no comprenden virus auxiliares en el método y aún otras realizaciones típicas comprenden vectores de ocho plásmidos que contienen el genoma de influenza.

En otras realizaciones en el presente documento, la invención comprende composiciones inmunogénicas que tienen una cantidad inmunológicamente eficaz del virus influenza recombinante descrito anteriormente (por ejemplo, un virus vivo) . Otras realizaciones incluyen virus para su uso en métodos para estimular el sistema inmunitario de un individuo para que produzca una respuesta inmunitaria protectora frente a virus influenza administrando al individuo una cantidad inmunológicamente eficaz del virus influenza recombinante descrito anteriormente (opcionalmente en un portador fisiológicamente eficaz) .

Otros aspectos de la invención incluyen métodos de producción de un polipéptido aislado o recombinante cultivando cualquier célula huésped anterior, en un medio de cultivo adecuado en condiciones que permiten la expresión de ácido nucleico, y aislando el polipéptido de uno o más de la célula huésped o el medio en el que se hace crecer.

También están incluidos en la invención métodos de producción de una vacuna de virus influenza. Por ejemplo, la invención incluye introducir una pluralidad de vectores (por ejemplo, vectores de plásmido) que comprenden un genoma de influenza (por ejemplo, influenza A o B) en una población de células huésped que pueden soportar la replicación de tal virus, cultivar las células, recuperar una pluralidad de virus influenza y proporcionar uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables con tal virus a un individuo (por ejemplo, uno que necesita tal tratamiento) . Tales virus pueden estar opcionalmente adaptados al frío y/o ser sensibles a la temperatura y/o estar... [Seguir leyendo]

1. Virus influenza reordenante 6:2, en el que dicho virus comprende 6 segmentos de genoma internos de uno o más virus donadores distintos de A/Ann Arbor/6/60 y 2 segmentos de genoma de antígeno de superficie, en el que los segmentos de genoma de antígeno de superficie codifican para un polipéptido de HA y uno de NA, en el que el segmento de genoma de antígeno de superficie que codifica para el polipéptido de HA produce un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 83.

2. Virus influenza reordenante 6:2 según la reivindicación 1, en el que dicho uno o más virus donadores comprenden uno o más de los siguientes fenotipos: sensible a la temperatura, adaptado al frío o atenuado.

3. Virus influenza reordenante 6:2 según la reivindicación 1, en el que dicho virus donador es PR8.

4. Composición inmunogénica que comprende una cantidad inmunológicamente eficaz del virus influenza reordenante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Virus influenza reordenante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o composición inmunogénica según la reivindicación 4, para su uso en la estimulación del sistema inmunitario de un sujeto para producir una respuesta inmunitaria protectora frente a virus influenza, en el que el virus influenza reordenante va a administrarse al sujeto en una cantidad inmunológicamente eficaz y en un portador fisiológicamente eficaz.

6. Virus influenza reordenante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o composición inmunogénica según la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección viral en un sujeto, en el que el virus influenza reordenante va a administrarse al sujeto en una cantidad eficaz para producir una respuesta inmunogénica frente a la infección viral.

7. Virus influenza reordenante según la reivindicación 5 ó 6, en el que dicho virus está desactivado o inactivado.

8. Vacuna contra la gripe viva atenuada que comprende la composición inmunogénica según la reivindicación

4.

9. Método para producir un virus influenza en cultivo celular, comprendiendo el método:

i) introducir en una población de células huésped, población de células huésped que puede soportar la replicación de virus influenza, una pluralidad de vectores que comprenden secuencias de nucleótidos que corresponden a:

(a) al menos 6 segmentos de genoma internos de una cepa donadora, en el que la cepa donadora no es A/Ann Arbor/6/60; al menos un segmento de genoma que codifica para un polipéptido de antígeno de superficie de HA en el que el polipéptido de antígeno de superficie comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 83; y al menos un segmento de genoma que codifica para un polipéptido de antígeno de superficie de NA; o

(b) al menos 6 segmentos de genoma internos de una cepa donadora, en el que la cepa donadora no es A/Ann Arbor/6/60 y cepa donadora que comprende uno o más atributos fenotípicos seleccionados del grupo que consiste en: atenuado, adaptado al frío y sensible a la temperatura; al menos un segmento de genoma que codifica para un antígeno de superficie de HA en el que el polipéptido de antígeno de superficie comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 83; y al menos un segmento de genoma que codifica para un polipéptido de antígeno de superficie de NA;

ii) cultivar la población de células huésped a una temperatura inferior o igual a 35º C; y

iii) recuperar un virus influenza.