Método para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno utilizando técnicas tromboelastográficas.

Método para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno,

mediante determinación simultánea de los dos estados deficitarios potenciales a partir de una muestra, así como su comparación,

por una parte

- mediante comparación de determinados parámetros TEG en presencia, con determinados parámetros TEG en ausencia de inhibidores de factor XIII o

- mediante comparación de determinados parámetros TEG en el caso de adición con los de sin adición de factor XIII,

así como, por otra parte,

- mediante comparación de determinados parámetros TEG en presencia de activadores de fibrinógeno con determinados parámetros TEG en presencia de activadores de fibrinógeno en sangre o plasmas normales.

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DESCRIPCIÓN

Método para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno utilizando técnicas tromboelastográficas

Introducción La invención se refiere a un método para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno, mediante determinación simultánea de los dos estados deficitarios potenciales a partir de una muestra, así como a su comparación, por una parte -mediante comparación de determinados parámetros TEG en presencia, con determinados parámetros TEG en ausencia de inhibidores de factor XIII 15 o -mediante comparación de determinados parámetros TEG en el caso de adición con los de sin adición de factor XIII, así como, por otra parte, -mediante comparación de determinados parámetros TEG en presencia de activadores de fibrinógeno con determinados parámetros TEG en presencia de activadores de fibrinógeno en sangre o plasmas normales.

Presentación del estado conocido de la técnica La trombelastografía (TEG) es un método de diagnóstico que examina de forma mecánica la formación o la disolución de coágulos en un sistema oscilante. En este caso, un recipiente (taza) se mueve de manera oscilante alrededor de una varilla de medición (Pin) (TEG convencional) , o bien el recipiente está fijo y el Pin se pone en movimientos de rotación oscilantes (ROTEG o bien ROTEM) . Se registran las fuerzas mecánicas que se manifiestan entre la copa y el Pin. Tan pronto como la sangre o el plasma pase a la coagulación, se produce una desviación de la señal de medición inicial. Ambas versiones se denominan en este documento TEG.

El TEG se utiliza para las pruebas de sangre o de plasma para determinar los parámetros relevantes para la coagulación (parámetros TEG) tales como el tiempo hasta alcanzar una primera formación de coágulos significativa con una amplitud de 2 mm (tiempo de coagulación o reacción r) , espacio de tiempo hasta alcanzar una potencia del coágulo de una amplitud de 20 mm (valor k) , la velocidad a la que se forma el coágulo (ángulo alfa) , las propiedades mecánicas del coágulo en el caso de una amplitud máxima (MA â?" siglas en alemán) o en cualquier otro momento deseado, el espacio de tiempo requerido hasta la MA (TMA) , o el espacio de tiempo hasta que la firmeza del coágulo, debido a la fibrinólisis, haya caído de nuevo a un determinado valor. Clínicamente, el TEG se utiliza, entre otros, para evaluar la coagulopatía, por ejemplo en la cirugía cardiaca, en trasplantes de hígado, cirugía abdominal mayor y como una prueba de noche casi en la gestión peri-operatoria de la coagulación como medida de diagnóstico (Kettner SC et al. 1999) , Anesth Analg; 89: 580-584; Shore Lesserson L et al. 1999) , Anesth Analg; 88: 312-319 et al, . Harding SA et al. (1997) , Br J Anaesth; 78: 175-179; Kettner SC, et al. (1998) Anesth Analg; 86: 691695, Pivalizza EG et al. (1998) , J Cardiothorac Vasc Anesth; 12: 305-308, Mahla E et al, (2001) , Anest Analg; 92:

572-577; Calatzis AN et al. (1996) , Eur Surg Res; 28: S1 (89) , Mahla E et al. (2001) , Anesth Analg; 92 (3) : 572-577) . El TEG se encuentra a disposición, de forma complementaria, para el diagnóstico de coagulación estándar (entre otros, Quick, aPTT, número de trombocitos, AT III, fibrinógeno, dímeros D, tiempo de sangría) , que requiere mucho tiempo para la determinación de los valores, para una rápida orientación sobre las tendencias de sangría. Esto es especialmente importante si se manifiestan coagulopatías en el marco de intervenciones quirúrgicas extensivas o 50 después de politraumatismo, ya que los trastornos de hemostasia graves pueden conducir rápidamente al desarrollo de lesiones tisulares secundarias y, a menudo, son resistentes frente a una terapia hemostática convencional sobre la base de un diagnóstico de coagulación estándar que requiere mucho tiempo.

Los parámetros TEG mencionados se ven afectados por una serie de factores que se denominarán en lo que sigue 55 factores con relevancia trombelastográfica. Factores con relevancia trombelastográfica son, ante todo, los niveles de fibrinógeno, factor XIII y de plaquetas, así como componentes del sistema fibrinolítico tales como plasmina, activadores de plasmina e inhibidores de plasmina. Así, por ejemplo, el fibrinógeno se correlaciona como sustrato de la coagulación con la estabilidad del coágulo. Esto se puede demostrar de manera inequívoca en el trombelastograma. Además de ello, el factor XIII modula asimismo, a través de la reticulación de la fibrina formada a 60 partir del fibrinógeno, las propiedades mecánicas del coágulo y limita su lisis (P. Lauer et al. (2002) , Thromb Haemost; 88:967-974) . Ambos efectos no son hasta ahora inequívocamente separables en la trombelastografía, ya que afectan por igual a las métricas claves de un trombelastograma. Tanto el fibrinógeno como el factor XIII influyen

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de forma significativa sobre los parámetros tiempo de coagulación (r) , firmeza máxima del coágulo, ángulo alfa como medida de la velocidad de la formación del coágulo y el tiempo de lisis del coágulo significativa (Nielsen VG et al. (2004) , Anesth Analg; 99: 120-123) . Dado que no necesariamente caen por igual el nivel de fibrinógeno y de factor XIII en estados deficitarios adquiridos tales como politraumatismo o cirugía mayor, no es hasta ahora posible una intervención terapéutica preestablecida de forma inequívoca a favor de uno u otro componente sobre la base de del trombelastograma. Por tanto, sería deseable disponer de un método que permitiera, en base al diagnóstico rápido de TEG, poder afirmar si una tendencia a la sangría se basa en una deficiencia de factor XIII y/o en una deficiencia de fibrinógeno.

El documento WO2004/092742 describe un procedimiento para la medición de una deficiencia de trombina. En este caso se añade a las muestras heparina en calidad de anticoagulante indirecto de antitrombina.

El documento WO0107070 da a conocer un procedimiento para la medición de la actividad de factores de coagulación, añadiéndose a las muestra inhibidores frente a diversos factores de coagulación y midiéndose el tiempo de coagulación. El método sirve descubrir estados hipercoagulativos.

El documento WO2004081579 da a conocer el uso de la tromboelastografía para vigilar diferentes parámetros tromboelastográficos en la inhibición de plaquetas.

El documento US 6.245.573 se ocupa de la influencia de iones de metales sobre la viscosidad y la actividad de coagulación de la sangre.

Craft et al. (American Society of Anesthesiologists, Filadelfia, PA, EE.UU nº 2003, 15 de octubre de 2003 , Resumen Nº 148) , Katori et al. (Anesthesia and Analgesia, tomo 99, Nº 6 (2004) describe una tromboelastografía modificada mediante batroxobina para la detección de una inhibición de las plaquetas inducida por eptifibatida.

Nielsen et al. (Acta Aneasthesiologica Scandinavia, tomo 49, Nº 2, páginas 222-231 (2005) se ocupa del papel del fibrinógeno en el caso de las mediciones tromboelastográficas. Se muestra una clara dependencia de la tromboelastografía de la concentración de fibrinógeno.

Estner (Disertación presentada el 23.4.2001 en la Universidad Técnica de München) investiga el papel de factor XIII en la formación del coágulo y la firmeza del coágulo antes y después de intervenciones quirúrgicas del corazón con ayuda de la tromoboelastografía.

Wilmer et al. (HÃmatoserologie 1, (2002) ) describe el uso de diversos métodos, entre ellos también el de la tromboelastografía para la determinación de la formación del coágulo y de la calidad del coágulo.

Tyler et al. (1969) examina la influencia de la reticulación de fibrina sobre parámetros tromboelastográficos.

Presentación del problema y su solución Las presentes investigaciones tuvieron por misión posibilitar, por medio de técnicas tromboelastográficas, una diferenciación inequívoca de las magnitudes de influencia factor XIII y fibrinógeno en el caso de trastornos de hemostasis y evaluar su respectiva proporción en el trastorno de la hemostasis, para permitir con ello una intervención terapéutica preestablecida por sustitución del factor que falta.

El problema se resolvió debido a que se desarrolló un procedimiento que sirve para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno, mediante la determinación simultánea de los dos estados deficitarios potenciales a partir de una muestra, así como su comparación.

En particular, el contenido de los factores tromboelastográficos... [Seguir leyendo]

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1. Método para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno, mediante determinación simultánea de los dos estados deficitarios potenciales a partir de una muestra, así como su comparación, por una parte -mediante comparación de determinados parámetros TEG en presencia, con determinados parámetros TEG en ausencia de inhibidores de factor XIII 10 o -mediante comparación de determinados parámetros TEG en el caso de adición con los de sin adición de factor XIII, así como, por otra parte, -mediante comparación de determinados parámetros TEG en presencia de activadores de fibrinógeno con 15 determinados parámetros TEG en presencia de activadores de fibrinógeno en sangre o plasmas normales.

2. Método según la reivindicación 1, en el que tiene lugar una determinación de estados deficitarios de factor XIII mediante medición, evaluación y comparación de determinados parámetros TEG en presencia y ausencia de inhibidores de factor XIII.

3. Método según la reivindicación 1, en el que tiene lugar una determinación de estados deficitarios de factor XIII mediante medición, evaluación y comparación de determinados parámetros TEG en el caso de adición de factor XIII y sin adición de factor XIII.

4. Método según la reivindicación 1, en el que tiene lugar una determinación de estados deficitarios de fibrinógeno mediante comparación de parámetros tromboelastográficos en presencia de activadores de fibrinógeno con valores normales de TEG, obtenidos mediante el uso de activadores de fibrinógeno en sangre o plasmas normales, siendo los activadores de fibrinógeno proteasas que activan el fibrinógeno, pero que no son reactivas frente al factor XIII.

5. Método según la reivindicación 1, para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno, bajo la exclusión de la influencia de plaquetas sanguíneas mediante la determinación de los parámetros TEG en el caso de utilizar plasma pobre en plaquetas o mediante el empleo de antagonistas de plaquetas en el caso de utilizar sangre entera o plasma rico en plaquetas.

6. Método según la reivindicación 1, para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno, bajo la exclusión de la influencia del sistema trombolítico mediante la determinación de los parámetros TEG en el caso de utilizar inhibidores del sistema trombolítico.

7. Método según la reivindicación 1, para la diferenciación de estados deficitarios de factor XIII frente a estados deficitarios de fibrinógeno, en el caso de utilizar plasma pobre en plaquetas o mediante el empleo de antagonistas de plaquetas en el caso de utilizar sangre entera o plasma rico en plaquetas, así como inhibición simultánea del sistema trombolítico según las reivindicaciones 5 y 6.

8. Uso de un método según las reivindicaciones 1 a 7, como base para tomar una decisión sobre una sustitución 45 preestablecida de factor XIII y/o fibrinógeno.

9. Método correspondiente a las reivindicaciones 1, 2 así como 5 a 7, en el que como inhibidores del factor XIII se emplean anticuerpos policlonales o monoclonales.

10. Método correspondiente a las reivindicaciones 1, 2 así como 5 a 7, en el que como inhibidores del factor XIII se emplean inhibidores peptídicos.

11. Método correspondiente a las reivindicaciones 1, 2 así como 5 a 7, en el que como inhibidores del factor XIII se emplean inhibidores de bajo peso molecular.

12. Método correspondiente a las reivindicaciones 1, así como 5 a 8, en el que como activadores de fibrinógeno se emplean proteasas que no son activas frente al factor XIII.

13. Método correspondiente a las reivindicaciones 1, así como 5 a 8, en el que como activador de fibrinógeno se 60 emplea batroxobina.

14. Método según las reivindicaciones 6 a 7, en el que como inhibidor del sistema trombolítico se emplea aprotinina.