Medios y métodos para inmunoterapia celular activa de cáncer usando células tumorales destruidas por alta presión hidrostática y células dendríticas.

Composición farmacéutica para inducir una respuesta inmunitaria contra células tumorales que comprende

a) células tumorales que son apoptóticas provocado por el tratamiento con alta presión hidrostática igual a o mayor de 100 MPa durante 10 minutos a 2 horas y

b) células dendríticas

Medios y métodos para inmunoterapia celular activa de cáncer usando células tumorales destruidas por alta presión hidrostática y células dendrítlcas

Antecedentes de la presente invención

Las enfermedades provocadas por diferentes tumores aún son problemas importantes en la medicina y la salud humana. La combinación de cirugía, quimioterapia y radioterapia han mejorado en gran medida el pronóstico de pacientes con cáncer. A pesar de que este enfoque da como resultado frecuentemente una reducción significativa de la masa tumoral, una población pequeña de células tumorales precursoras o células madre de cáncer con frecuencia sobrevive y da lugar posteriormente a una nueva población de células tumorales que conduce a una recaída. Incluso si el tumor principal se retira por tratamientos quirúrgicos y/u otros, cantidades menores de células tumorales en circulación pueden provocar tumores metastásicos en diferentes áreas del cuerpo. Por lo tanto, existe una necesidad permanente de medicamentos y métodos de tratamiento alternativos que pueden usarse solos o preferentemente combinarse con otros métodos de tratamiento del tumor.

Técnica anterior

El documento WO 26/9533 describe métodos para inhibir el crecimiento de poblaciones celulares dañando térmica, mecánica y/o químicamente células portadoras de antígenos e introduciendo dichas células como agregado con células presentadoras de antígenos en pacientes.

Frank et al. "Harnessing Naturally Occurring Tumor Immunity; A Clinical Vaccine Trial in Prostate Cáncer", PLOS ONE, vol. 5, N° 9, 1 de enero de 21 (1/1/21), página E12367, desvela una vacuna tumoral que comprende células dendríticas autólogas y células LNCaP irradiadas con UV apoptóticas.

Minarik et al. "Phase l/ll of Clinical Study of Prostate Cáncer Immunotherapy Using Dendritic Cell Vaccination Strategy - First Results", European Urology Supplements, vol. 9, N° 6, 1 de septiembre de 21, página 629, desvela el resultado preliminar de un estudio clínico de fase l/ll de inmunoterapia de cáncer de próstata usando células dendríticas pulsadas con células LNCaP apoptóticas destruidas por irradiación UVA.

Welss ef al. "Ex vivo- and ¡n vlvo-lnduced dead tumor cells as modulators of antitumor responses", Annals ofthe New York Academy of Sciences, vol. 129, N° 1, 1 de octubre de 21 (1-1-21), páginas 19-117, desvela el tratamiento de alta presión hidrostática de células tumorales. Las células tumorales muertas se usan directamente como vacunas de cáncer en modelos animales.

Welss ef al. "High hydrostatlc pressure treatment generates inactivated mammalian tumor cells with immunogeneic features", Journal of Immunotoxlcology, vol. 7, N°. 3, 1 de septiembre de 21, páginas 194-24, desvela que el tratamiento con alta presión hidrostática induce apoptosis en la que las células tumorales son inactivas e inmunogénicas. Se han producido anticuerpos dirigidos contra células tumorales y se han identificado en un modelo de ratón.

El documento US 28/286314 desvela vacunas de cáncer que comprenden células presentadoras de antígenos cargadas con células cancerosas sometidas a choque térmico que son no apoptóticas que pueden usarse para tratar a pacientes con cáncer.

La presente invención

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que pueden usarse para la inducción de respuesta inmunitaria antitumoral, en particular en vacunación tumoral que provoca que el cuerpo produzca una reacción inmunogénica contra células tumorales. La invención se define por las reivindicaciones.

Las células tumorales destruidas por modalidades convencionales tales como irradiación son normalmente no inmunogénicas. Si se usan para la generación de productos de inmunoterapia de cáncer, no es necesario administrar las células tumorales irradiadas en combinación con un potente adyuvante. Cuando se usan para pulsado de células presentadoras de antígenos, tales como células dendríticas, las células tumorales destruidas irradiadas no proporcionan una señal activadora. Es necesario por lo tanto activar células dendríticas por otra sustancia, tal como moléculas derivadas de patógenos.

Se desvela un nuevo proceso que induce una muerte inmunogénica de células tumorales humanas, en particular, células de cáncer ovárico y de próstata y células de leucemia linfoblástica aguda de origen humano. Las células tumorales destruidas por alta presión hidrostática (en lo sucesivo también: HHP) proporcionan un estímulo de activación potente para células dendríticas, en particular para células dendríticas inmaduras, incluso en ausencia de estímulos adicionales. Las células tumorales destruidas por este método expresan altos niveles de marcadores de muerte celular inmunogénica y células dendríticas cargadas con las células tumorales inmunogénicas inducen altos

números de linfocitos T específicos de tumor sin expandir linfocitos T reguladores no deseables. Los datos experimentales de la presente invención muestran que la combinación de células tumorales destruidas por la aplicación de alta presión hidrostática y células dendríticas da como resultado la fagocitosis y presentación eficaz de antígenos tumorales y la inducción de fuertes respuestas inmunitarias antitumorales.

Las células tumorales no son o son solamente débilmente inmunogénicas y habitualmente no tienen la capacidad de inducir una respuesta inmunitaria específica de tumor si se usan en ausencia de un adyuvante potente. Los recientes estudios han demostrado que las células tumorales destruidas por algunos productos quimioterapéuticos, tales como bortezomib, oxaliplatino y antraciclinas, pueden inducir una respuesta inmunitaria específica de tumor. Esta muerte celular inmunogénica se caracteriza por acontecimientos moleculares compartidos por todos los productos quimioterapéuticos descritos. En un período de horas después del inicio de la muerte celular inmunogénica, las células de tumor preapoptótico traslocan la calreticulina y proteínas de choque térmico del retículo endoplásmico a la superficie celular junto con otras moléculas que actúan como señales de alimentación (fosfatidilserina).

Al mismo tiempo, las células tumorales que experimentan muerte celular tumoral inmunogénica regulan negativamente la expresión de señales de no alimentación (tales como CD47 de superficie) para facilitar el reconocimiento de células tumorales y captura por células dendríticas. Adicionalmente, después de la permeabilización de la membrana plasmática, las células liberan el marcador de apoptosis tardío caja de grupo de alta movilidad 1 (HMGB1) al medio extracelular. El HMGB1 puede unirse con varios receptores de reconocimiento de patrones (PRR), tales como receptor de tipo Toll 2 (TLR2), TLR4 y receptor para productos finales de glucosilación avanzada (RAGE). La liberación de esta proteína parece requerirse para la presentación óptima de antígenos de células tumorales moribundas, sensibilización de linfocitos T por células dendríticas y posterior eliminación mediada por linfocitos T del tumor.

El uso de células tumorales destruidas de tal manera que se hagan inmunogénicas es extremadamente importante para el diseño de estrategias inmunoterapéuticas de cáncer. La administración de células tumorales inmunogénicas puede inducir una respuesta inmunitaria específica de tumor que controlará después el crecimiento de células tumorales. Esto ralentizará o incluso estabilizará la progresión de la enfermedad y mejorará el pronóstico de pacientes con cáncer. También se supone que la distribución de células tumorales que circulan en el cuerpo y la formación de metástasis pueden reducirse al menos sustancialmente.

Realizaciones preferidas de la presente invención

Se desvelan un método nuevo y composiciones farmacéuticas que inducen una muerte celular inmunogénica de tumores humanos, en particular células de cáncer ovárico y de próstata y células de la leucemia linfoblástica aguda en un grado mucho mayor que los productos quimioterapéuticos recientemente descritos. Las células tumorales destruidas por este método y capturadas por células dendríticas expresan altos niveles de marcadores de muerte celular inmunogénicos e inducen altos números de linfocitos T específicos de tumor sin inducir linfocitos T reguladores que podrían inhibir la respuesta inmunitaria antitumoral. Se ha descubierto que el grado de la respuesta inmunitaria antitumoral obtenida por la combinación de células tumorales tratadas de acuerdo con la presente invención y las células dendríticas es aproximadamente 1 veces mayor que la respuesta inmunitaria inducida por células tumorales inmunogénicas solamente.

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1. Composición farmacéutica para inducir una respuesta inmunitaria contra células tumorales que comprende

a) células tumorales que son apoptóticas provocado por el tratamiento con alta presión hidrostática igual a o mayor de 1 MPa durante 1 minutos a 2 horas y

b) células dendríticas.

2. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que las células tumorales se trataron con presión hidrostática durante al menos 1 minutos a una presión de al menos 2 MPa.

3. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que las células tumorales se trataron con presión hidrostática de 2-3 MPa.

4. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizada por que las células tumorales apoptóticas no son necróticas.

5. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por que las células tumorales derivaron de líneas celulares tumorales.

6. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada por que las células tumorales derivaron de un tumor aislado del paciente a quien tratar.

7. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizada por que las células dendríticas inmaduras se cargaron con células tumorales apoptóticas que se habían tratado con alta presión hidrostática.

8. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizada por que las células dendríticas inmaduras se obtuvieron por leucoféresis.

9. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizada por que las células dendríticas Inmaduras se obtuvieron por leucoféresis y cultivo in vitro en presencia de citocinas.

1. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para uso en pacientes que padecen tanto un estadio temprano como uno tardío de cáncer.

11. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para uso en el tratamiento de cáncer que comprende cáncer de próstata, cáncer ovárlco o leucemia linfoblástica aguda.

12. Método para preparar una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizado por que se cargan células dendríticas Inmaduras con células tumorales apoptóticas que se han tratado con alta presión hidrostática igual a o mayor de 1 MPa y posterior maduración de las células dendríticas.

13. Método para preparar una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 12 para uso en vacunación de cáncer humano, que comprende la carga de células dendríticas inmaduras con células tumorales de modo que dichas células tumorales se convierten en un estadio apoptótlco por tratamiento durante 1 minutos a 2 horas con alta presión hidrostática igual o mayor de 1 MPa, de modo que las células dendríticas maduran opcionalmente antes de aplicarse la composición farmacéutica.

14. Método para preparar una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 12 para uso en vacunación de cáncer humano, que comprende la carga de células dendríticas Inmaduras con células tumorales obtenidas de una línea celular tumoral que se convierten a un estadio apoptótlco por tratamiento durante 1 minutos a 2 horas con alta presión hidrostática Igual a o mayor de 1 MPa de modo que las células dendríticas maduran opcionalmente antes de aplicarse la composición farmacéutica.