Ensayo de múltiples analitos en fase sólida para fármacos psicóticos y sus metabolitos.
Un procedimiento para determinar la presencia de un analito de interés en una muestra,
que comprende:
(a) poner en contacto una composición de analito en fase sólida,
en el que la composición de analito en fase sólida comprende al menos dos analitos diferentes unidos a unreceptáculo en fase sólida, en el que los al menos dos analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitosy están unidos a dicho receptáculo en fase sólida como un mezcla,
en el que además uno de los al menos dos analitos diferentes es el analito de interés, con:
i) un anticuerpo, en el que el anticuerpo es específico para el analito de interés; y
ii) una muestra; y
(b) determinar si el analito de interés está presente en la muestra.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/042061.
Solicitante: PSYCHEMEDICS CORPORATION.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 125 Nagog Park Suite 200 Acton, MA 01720 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: HILL,VIRGINIA, ATEFI,MOHAMMAD, SCHAFFER,MICHAEL I.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/94 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que intervienen narcóticos.
PDF original: ES-2452473_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Ensayo de múltiples analitos en fase sólida para fármacos psicóticos y sus metabolitos
Campo técnico
La presente divulgación se refiere a procedimientos y composiciones para determinar la presencia y/o la cantidad de uno o más analitos (por ejemplo, estupefacientes) en una muestra (por ejemplo, una muestra corporal o una muestra no corporal) y, más particularmente, a procedimientos y composiciones para realizar esta determinación usando inmunoensayos competitivos. En algunas realizaciones, los procedimientos y las composiciones pueden ser usados para determinar la presencia y/o la cantidad de dos o más analitos en una muestra simultáneamente, en tándem o en serie. Se describen composiciones de analito en fase sólida que comprenden dos o más analitos diferentes unidos a una fase sólida, así como procedimientos para el uso de las mismas en inmunoensayos competitivos, para determinar la presencia y la cantidad de uno o más analitos de interés.
Antecedentes Los inmunoensayos tales como radioinmunoensayos (RIA) y los inmunoensayos enzimáticos (IEE) son procedimientos útiles para la determinación de la presencia, la identidad y la cantidad de uno o más analitos de interés en una muestra. Muchos inmunoensayos inmovilizan un anticuerpo específico para un analito de interés en una fase sólida, por ejemplo, una microplaca o perla; la unión entre el anticuerpo unido y el analito presente en una muestra es detectada, por ejemplo, mediante el uso de un ensayo de tipo sándwich. Otros inmunoensayos inmovilizan el analito; estos inmunoensayos pueden denominarse inmunoensayos de antígeno en fase sólida o de analito en fase sólida. En los inmunoensayos de analito en fase sólida, el analito en fase sólida compite con el analito presente en una muestra por la unión a un anticuerpo específico para el analito. Típicamente, en dichos ensayos de analito en fase sólida, el anticuerpo es detectable de alguna manera, por ejemplo, está marcado, por ejemplo, marcado radiactiva, fluorescente, luminiscente o enzimáticamente (por ejemplo, se produce una reacción enzimática en presencia de un sustrato apropiado, resultando en un cambio de color) , o su presencia es detectada por medio de un anticuerpo secundario que está marcado.
Con el fin de determinar si una muestra particular contenía más de un analito de interés, los procedimientos de la técnica anterior empleaban típicamente componentes en fase sólida separados (por ejemplo, microplacas o conjuntos de microperlas separados) , donde cada componente en fase sólida contenía un anticuerpo unido específico para un analito particular, o donde cada componente en fase sólida contenía un único tipo de analito unido. Dicha necesidad de componentes separados en fase sólida para cada analito hace los ensayos de múltiples analitos sean caros, técnicamente complejos y requieran mucho tiempo. Existe una necesidad de un procedimiento de detección de analito eficiente y relativamente barato que pueda determinar rápidamente la presencia y/o la cantidad de uno o más analitos, incluyendo analitos tales como estupefacientes, en una muestra.
Du et al, Biomedical Microdevices 2005, 7 (2) :143-146, divulga un inmunoensayo competitivo multiplexado para anfetamina, metanfetamina, barbitúricos, benzoilecgonina, digoxina, metadona, morfina, fenciclidina, antidepresivos tricíclicos y teofilina, que comprende: poner en contacto una muestra y anticuerpos específicos para los fármacos psicóticos indicados anteriormente con una matriz de fármacos psicóticos inmovilizados en una fase sólida; y detectar los fármacos psicóticos con anticuerpos secundarios fluorescentes.
Du et al, Analytical Chemistr y 2004, 76 (20) :6166-6171, divulga un inmunoensayo competitivo multiplexado para algunos esteroides susceptibles de abuso, que comprende: poner en contacto una muestra y anticuerpos específicos para los esteroides con una matriz de esteroides inmovilizados en una fase sólida; y detectar los esteroides con anticuerpos secundarios fluorescentes.
Sumario Los inmunoensayos son herramientas poderosas para detectar la presencia y/o la cantidad de analitos presentes en, o que se sospecha que están presentes en, una muestra. La capacidad de detectar múltiples analitos en una muestra, sin embargo, requiere típicamente el uso de múltiples ensayos separados, por ejemplo, uno por cada analito de interés, aumentando de esta manera el coste, el tiempo y la complejidad técnica del procedimiento, y conduciendo a posibles errores del operario durante una de las múltiples etapas. Los presentes inventores han encontrado sorprendentemente que el uso de composiciones de analito en fase sólida, que comprenden al menos dos analitos unidos a la fase sólida, facilitan el rendimiento de los ensayos de múltiples analitos y exhiben altas sensibilidades y eficiencias. Los ensayos de múltiples analitos descritos en la presente memoria son flexibles, y pueden ser realizados simultáneamente, en serie, o en tándem, lo que resulta en menores coste, tiempo y complejidad del procedimiento.
En consecuencia, en la presente memoria se proporciona un procedimiento para determinar la presencia de un analito de interés en una muestra, que comprende:
(a) poner en contacto una composición de analito en fase sólida, en la que la composición de analito en fase sólida comprende al menos dos analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en el que los al menos dos analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos y están unidos a dicho receptáculo en fase sólida como una mezcla, en el que uno de los al menos dos analitos diferentes es el analito de interés, con:
i) un anticuerpo, en el que el anticuerpo es específico para el analito de interés; y
ii) una muestra; y
(b) determinar si el analito de interés está presente en la muestra.
En algunas realizaciones, la composición de analito en fase sólida se pone en contacto, en primer lugar, con la muestra y, a continuación, con el anticuerpo. En algunas realizaciones, el anticuerpo está marcado de manera detectable, por ejemplo, marcado de manera detectable con un marcador fluorescente, luminiscente (incluyendo quimioluminiscente o bioluminiscente) , radiactivo o enzimático. En algunas realizaciones, el anticuerpo no está marcado.
En algunas realizaciones, el procedimiento comprende eliminar el anticuerpo que no está unido a la composición de analito en fase sólida.
El procedimiento puede comprender determinar la cantidad de analito presente, si hay analito presente.
La presencia del analito en la muestra puede ser determinada comparando una señal generada por el anticuerpo unido a la composición de analito en fase sólida en la muestra con una señal generada por el anticuerpo unido a la composición de analito en fase sólida en una muestra de control que no comprende el analito de interés.
La señal generada por el anticuerpo unido a la composición de analito en fase sólida puede ser derivada desde un marcador detectable en el anticuerpo.
La señal generada por el anticuerpo unido a la composición de analito en fase sólida puede ser derivada desde la unión de un anticuerpo secundario al anticuerpo, en el que el anticuerpo secundario está marcado de manera detectable.
El marcador detectable puede ser un marcador fluorescente, luminiscente (incluyendo quimioluminiscente o bioluminiscente) , radiactivo o enzimático.
En algunas realizaciones, el procedimiento comprende además poner en contacto la composición de analito en fase sólida con un segundo anticuerpo, donde el segundo anticuerpo es específico para el al menos segundo analito diferente unido a la fase sólida, y determinar si el segundo analito está presente en la muestra.
En algunas realizaciones del procedimiento, los al menos dos analitos diferentes están unidos a la fase sólida de manera no covalente, directa o indirectamente.
En algunas realizaciones, los al menos dos analitos diferentes están unidos a la fase sólida de manera covalente, directa o indirectamente.
En algunas realizaciones, los al menos dos analitos diferentes están unidos a la fase sólida mediante adsorción, directa o indirectamente.
En algunas realizaciones, los al menos dos analitos diferentes están unidos de manera covalente a un agente de unión que está unido a la fase sólida de manera no covalente o mediante adsorción.
En algunas realizaciones, el agente de unión se selecciona de entre HSA y BSA.
Los al menos dos analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos. Un fármaco psicótico o sus metabolitos puede ser seleccionado de entre cocaína, benzoilecgonina, cocaetileno, norcocaína, PCP, anfetamina, metanfetamina,... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un procedimiento para determinar la presencia de un analito de interés en una muestra, que comprende:
(a) poner en contacto una composición de analito en fase sólida, en el que la composición de analito en fase sólida comprende al menos dos analitos diferentes unidos a un
receptáculo en fase sólida, en el que los al menos dos analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos y están unidos a dicho receptáculo en fase sólida como un mezcla, en el que además uno de los al menos dos analitos diferentes es el analito de interés, con:
i) un anticuerpo, en el que el anticuerpo es específico para el analito de interés; y ii) una muestra; y 10 (b) determinar si el analito de interés está presente en la muestra.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la composición de analito en fase sólida se pone en contacto, en primer lugar, con la muestra y, a continuación, con el anticuerpo.
3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo está marcado de manera detectable.
4. Procedimiento según la reivindicación 1, que comprende además eliminar el anticuerpo que no está unido a la 15 composición de analito en fase sólida.
5. Procedimiento según la reivindicación 1, que comprende además poner en contacto la composición de analito en fase sólida con un segundo anticuerpo, en el que el segundo anticuerpo es específico para el al menos segundo analito diferente unido a la fase sólida, y determinar si el segundo analito está presente en la muestra.
6. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que los al menos dos analitos diferentes están unidos a la fase sólida de 20 manera no covalente, directa o indirectamente, o
en el que los al menos dos analitos diferentes están unidos a la fase sólida de manera covalente, directa o indirectamente, o en el que los al menos dos analitos diferentes están unidos a la fase sólida mediante absorción, directa o indirectamente, o en el que los al menos dos analitos diferentes están asociados de manera covalente a un agente de unión que está unido a la fase sólida de manera no covalente o mediante absorción.
7. Procedimiento según la reivindicación 6, en el que el agente de unión se selecciona de entre HSA y BSA.
8. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que los fármacos psicóticos o sus metabolitos se seleccionan de entre cocaína, benzoilecgonina, cocaetileno, norcocaína, PCP, anfetaminas, metanfetaminas, cannabinoides, THC, carboxi
THC, heroína, codeína, morfina, 6-monoacetilmorfina (MAM) , oxicodona, 3, 4-metilendioxianfetamina (MDA) y 3, 4metilendioximetanfetamina (MDMA) .
9. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la muestra es una muestra corporal o una muestra derivada de una muestra corporal.
10. Un procedimiento para determinar la presencia de una pluralidad de analitos de interés diferentes, representados por 35 el número "N", en una muestra, en el que el procedimiento comprende:
(a) poner en contacto una composición de analito en fase sólida, en la que la composición de analito en fase sólida comprende al menos "N" diferentes analitos unidos a un receptáculo en fase sólida, en el que los al menos "N" diferentes analitos son fármacos psicóticos o sus metabolitos y están unidos a dicho receptáculo en fase sólida como una mezcla, 40 en el que además los al menos "N" analitos diferentes unidos incluyen la pluralidad de analitos de interés, con:
i) una pluralidad de anticuerpos, en el que la pluralidad de anticuerpos comprende un anticuerpo específico para cada analito de interés diferente; y ii) una muestra; y
(b) determinar si cada analito de interés diferente en la pluralidad está presente en la muestra.
11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que los anticuerpos específicos para cada analito de interés diferente son detectables por separado
12. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que la pluralidad de anticuerpos se pone en contacto con la composición de analito en fase sólida simultáneamente, o
en el que al menos uno de entre la pluralidad de anticuerpos se pone en contacto con la composición de analito en fase sólida en un momento diferente que al menos otro de entre la pluralidad de anticuerpos.
13. Una composición que comprende al menos dos analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en la que los al menos dos analitos diferentes son analitos de fármacos psicóticos o sus metabolitos y están unidos a dicho receptáculo en fase sólida como una mezcla.
14. Composición según la reivindicación 13, en la que los al menos dos analitos diferentes están unidos de manera covalente a la fase sólida, directa o indirectamente, o
en la que los al menos dos analitos diferentes están unidos de manera no covalente a la fase sólida, directa o indirectamente,
o que comprende de 2 a 10 analitos diferentes unidos a una fase sólida, o en el que los al menos dos analitos diferentes se seleccionan de entre cocaína, benzoilecgonina, cocaetileno, norcocaína, PCP, anfetaminas, metanfetaminas, cannabinoides, THC, carboxi-THC, heroína, codeína, morfina, 6-monoacetilmorfina (MAM) , oxicodona, 3, 4metilendioxianfetamina (MDA) y 3, 4-metilendioximetanfetamina (MDMA) .
15. Un kit que comprende la composición según la reivindicación 13, y al menos un anticuerpo específico para al menos uno de los dos analitos diferentes unidos al receptáculo en fase sólida.
16. Procedimiento según la reivindicación 9 o 10, en el que la muestra es una estructura queratinizada.
17. Procedimiento según la reivindicación 16, en el que la muestra es cabello.
18. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la composición de analito en fase sólida comprende al menos tres analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en el que los al menos tres analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos.
19. Procedimiento según la reivindicación 18, en el que la composición de analito en fase sólida comprende al menos cuatro analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en el que los al menos cuatro analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos.
20. Procedimiento según la reivindicación 19, en el que la composición de analito en fase sólida comprende al menos cinco analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en el que los al menos cinco analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos.
21. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que al menos dos de los fármacos psicóticos o sus metabolitos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: cocaína, opioide, PCP, anfetaminas y cannabinoides.
22. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que al menos dos de fármacos psicóticos o sus metabolitos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: morfina, codeína, oxicodona, oximorfona, hidrocodona o hidromorfona.
23. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que al menos dos de los fármacos psicóticos o sus metabolitos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: cocaína y un opioide.
24. Composición según la reivindicación 13, en la que la composición de analito en fase sólida comprende al menos tres analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en la que los al menos tres analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos.
25. Composición según la reivindicación 24, en la que la composición de analito en fase sólida comprende al menos cuatro analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en la que los al menos cuatro analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos.
26. Composición según la reivindicación 25, en la que la composición de analito en fase sólida comprende al menos cinco analitos diferentes unidos a un receptáculo en fase sólida, en la que los al menos cinco analitos diferentes son fármacos psicóticos o sus metabolitos.
27. Composición según la reivindicación 13, en la que al menos dos de los fármacos psicóticos o sus metabolitos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: cocaína, un opioide, PCP, anfetaminas y cannabinoides.
28. Composición según la reivindicación 13, en la que al menos dos de los fármacos psicóticos o sus metabolitos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: morfina, codeína, oxicodona, oximorfona, hidrocodona o hidromorfona.
29. Composición según la reivindicación 13, en la que al menos dos de los fármacos psicóticos o sus metabolitos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: cocaína y un opioide.
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