Detección de drogas.

Un inmunógeno de la estructura**Fórmula**

donde,

accm es un material portador que confiere antigenicidad,

que consiste en un polipéptido sintético, un polipéptido semisintético, un fragmento de proteína o una proteína;

X es carbonilo o amino;

Y es -Z-(A)n-, en la que Z es un alquileno C1-5 de cadena lineal sustituida o no sustituida o una fracción de arileno, A es O, NH, S, éster, tioéster o amida y n ≥ 0, o 1.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIïN

La mefedrona, cuya denominaciïn sistemïtica es (RS) -2-metilamino-l- (4-metilfenil) propan-l-ona, es una droga de diseïo de la clase de estimulantes catinona causante de un nïmero de fallecimientos por su consumo. Es ilegal en varios païses del mundo, pero a pesar de su ilegalidad, varios estudios recientes destacan que no ha disminuido ni su popularidad ni la facilidad con la que se consigue, debido al nuevo enfoque que los proveedores han dado a la marca, denominando a los productos de la mefedrona como "alternativos", asignïndoles un nombre como NRG-1 (Energïa 1) y etiquetïndolos como ''euforizantes legales'' (legal highs en inglïs) que contienen naftilpirovalerona, que no es mïs que mefedrona (Brandt y col. 2010a; Brandt y col. 2010b) . El metabolismo de la mefedrona se produce a travïs de varias combinaciones de la oxidaciïn del grupo metilo unido al anillo de benceno, N-desmetilaciïn y la reducciïn de la funciïn ceto (Meyer y col. 2010) . Existe un alto porcentaje de posibilidades de las personas que pueden conseguir con facilidad la mefedrana sufran acontecimientos adversos o abusen de su consumo, especialmente cuando se presenta como NRG-1 ya que, por las campaïas de marketing dirigidas al gran pïblico, da la impresiïn de ser segura. Por lo tanto, existe una necesidad en la toxicologïa clïnica y forense de detectarla o determinarla utilizando mïtodos de anïlisis prïcticos y econïmicos. El documento EP 1340980 da a conocer inmunoensayos sensibles y especïficos para detectar la clase metilendioxi de drogas de ïxtasis. Findlay y col. (J. of Pharm. Sci., 1981, vol 70: 624-621) divulgaron un radioinmunoensayo estereoespecïfico de d-pseudoefedrina para su uso en estudios de disposiciïn del fïrmaco. Los mïtodos de anïlisis que se han utilizado para detectar e identificar la mefedrona y sus metabolitos incluyen la cromatografïa de gases vinculada a la espectrometrïa de masas (GC-MS) y la resonancia magnïtica nuclear (RMN) (Brandt y col. 2010a; Wood y col. 2010; Meyer y col. 2010) . Segïn los inventores, aïn no ha salido a la luz ningïn inmunoensayo menos costoso y prïctico para detectar

o cuantificar la mefedrona o sus metabolitos.

Bibliografïa Brandt S.D. y col. (2010a) . Drug Test. Anal., 2: 377-382. Brandt S.D. y col. (2010b) . BMJ, 341: c3564. Wood D.M. (2010) . J. Med. Toxicol, 6: 327-330. Meyer M.R. (2010) . Anal. Bioanal. Chem., 397: 1225-1233.

COMPENDIO DE LA INVENCIïN

No existe una prueba barata y prïctica para detectar e identificar la mefedrona, sus metabolitos y sus compuestos relacionados en muestras de pacientes in vitro. La presente invenciïn ofrece una soluciïn a este problema, proporcionando un anticuerpo que se une a la mefedrona, los metabolitos de la mefedrona y aquellos compuestos con la estructura 2-metilamino-1-fenilpropano-1. En resumen: para superar las deficiencias asociadas con las tïcnicas analïticas actuales, los inventores idearon y desarrollaron un inmunoensayo para detectar y cuantificar la mefedrona, los metabolitos de mefedrona y los compuestos relacionados con la misma, basïndose en nuevos anticuerpos. El inmunoensayo tiene muchas ventajas sobre otros formatos analïticos utilizados comïnmente, como la cromatografïa de gases-espectrometrïa de masas (CG-MS) y la resonancia magnïtica nuclear (RMN) , con un coste menor y mayor facilidad de uso, ademïs de poder fabricarse en un formato compacto o portïtil para su uso en el terreno.

DIBUJOS

Figura 1 Ruta sintïtica de la mefedrona. Figura 2 Metabolitos de la mefedrona. Figura 3 Hapteno 1 e Inmunïgeno 1

EXPOSICIïN DETALLADA DE LA INVENCIïN

La invenciïn presente estï definida en su sentido mïs amplio por las reivindicaciones anexadas. Un primer aspecto de la invenciïn es un inmunïgeno de la estructura:

donde accm es un material portador que confiere antigenicidad; X es carbonilo o amino; Y es -Z (A) n- donde Z es alquileno C1-5 de cadena lineal sustituido o no sustituido o una fracciïn de arileno y A es O, NH, S, ïster, tioïster o amida y n = 0 o 1.

Preferiblemente, X es carbonilo o amino y Z es un C1-5, preferiblemente un alquileno C1-3 de cadena lineal no sustituido seleccionado del metileno, etileno y propileno, y donde n = 1 y A = O, NH o S. Una realizaciïn preferida de la invenciïn es un inmunïgeno en el que X = carbonilo, Z = -CH2- y en la que n = 1 y A = O. En una forma de realizaciïn, antes de la conjugaciïn a la accm, -XY- es (COOH) -CH2-O-.

La accm puede ser cualquier material que hace que la totalidad o parte del hapteno sea susceptible de ser reconocido por un anticuerpo y de producirse la uniïn. La accm es una proteïna, un fragmento de proteïna, un polipïptido sintïtico o un polipïptido semisintïtico. Los ejemplos ilustrativos de materiales portadores ïtiles que confieren antigenicidad son la albïmina de suero bovino (BSA) , la ovoalbïmina de huevo, la gammaglobulina bovina, la tiroglobulina bovina (BTG) , la hemocianina de lapa californiana (KLH) , etc. La accm tambiïn se puede seleccionar de la albïmina de suero bovino (BSA) y la tiroglobulina bovina (BTG) . En una realizaciïn, el inmunïgeno es hapteno-1 acoplado a BSA (Ilustraciïn 3) . Los inmunïgenos obtenidos se administran despuïs a mamïferos para inducir la producciïn de anticuerpos especïficos y opcionalmente anticuerpos policlonales que luego se utilizan para desarrollar inmunoensayos para mefedrona, metabolitos de mefedrona y compuestos que componen la estructura 2metilamino-1-fenil-propan-1-ona (metacatinona) y empleando conjugados marcados como reactivos de detecciïn.

Un segundo aspecto de la invenciïn es la generaciïn de un anticuerpo contra cualquiera de los inmunïgenos previamente descritos, siendo dicho anticuerpo capaz de unirse a un epïtopo de una molïcula con la siguiente Estructura 1

Los ïtomos de hidrïgeno explïcitos en la estructura anterior implican que los ïtomos a los que estïn unidos estos ïtomos de hidrïgeno explïcitos no pueden ser sustituidos por otros, es decir el anticuerpo producido por los inmunïgenos de la invenciïn se une a un epïtopo de molïculas que componen la subestructura de arriba (donde X = H o CH3) , la cual incluye molïculas sustituidas en posiciïn ''para'' del anillo de fenilo (''para'' a la fracciïn de propionil) . Los sustituyentes en la posiciïn ''para'' pueden ser cualquier tipo de sustituyente que dï lugar a una molïcula que entre dentro del marco de la invenciïn, es decir, que dï lugar a una molïcula que se clasifique como un estimulante a base de catinona. Por ejemplo, sin limitar la invenciïn a los mismos, los sustituyentes en la posiciïn ''para'' puede seleccionarse a partir de H, CH3 -O-CH3- o F, o cualquier otra fracciïn apropiada.

Cuando X es H y H estï presente en la posiciïn ''para'' del anillo de fenilo, la Estructura 1 es catinona. Cuando X es CH3 y H estï presente en la posiciïn ''para'' del anillo de fenilo, la Estructura 1 es 2- (metilamino) -1-fenilpropan-1-ona (metacatinona) . Cuando X es CH3 y CH3 estï presente en la posiciïn ''para'' del anillo de fenilo, la Estructura 1 es mefedrona (4-metilmetacatinona) . Cuando X es CH3 y -O-CH- estï presente en la posiciïn ''para'' del anillo de fenilo, la Estructura 1 es 4-metoximetacatinona (para-metoximetacatinona, mefedrona) . Cuando X es CH3 y H estï

presente en la posiciïn ''para'' del anillo de fenilo, la Estructura 1 es 4-fluorometacatinona (flefedrona) . Por lo tanto, la Estructura 1 puede representarse mediante la Estructura 2:

Estructura 2

donde Y puede ser cualquier sustituyente que dï lugar a una molïcula que entre dentro del ïmbito de la invenciïn, es decir una molïcula clasificada como un estimulante basado en la catinona. Por ejemplo, sin limitar la invenciïn a los mismos, Y puede seleccionarse a partir de H, CH3. -O-CH3- o F, o cualquier otra fracciïn apropiada. Cuando X es H e Y es H. La Estructura 2 es catinona. Cuando X es CH3 e Y es H, la Estructura 2 es 2-metilamino-Lfenilpropan-l-ona (metacatinona) . Cuando X es CH3 e Y es CH3, la Estructura 2 es mefedrona (4-metilmetcatonina) . Cuando X es CH3 e Y es -O-CH3-. La Estructura 2 es 4-metoximetacatinona (flefedrona) . Cuando X es CH3 e Y es F, la Estructura 1 es 4-fluorometacatinona (flefedrona) .

Preferiblemente, el anticuerpo es especïfico para un epïtopo de mefedrona y posee reactividad cruzada de mïs de un 10%, preferiblemente mayor al 15% respecto a un epïtopo de cada uno de catinona y metacatinona. Por lo tanto, el anticuerpo tiene una reactividad cruzada tanto a catinona y metacatinona, superior al 10%, preferiblemente superior a un 15%.

Los anticuerpos de la invenciïn tambiïn se unen a metabolitos de mefedrona (Ilustraciïn 2) . Cuando se utiliza haciendo... [Seguir leyendo]

- Un inmunïgeno de la estructura donde,

accm es un material portador que confiere antigenicidad, que consiste en un polipïptido sintïtico, un polipïptido semisintïtico, un fragmento de proteïna o una proteïna;

X es carbonilo o amino;

Y es -Z- (A) n-, en la que Z es un alquileno C1-5 de cadena lineal sustituida o no sustituida o una fracciïn de arileno, A 15 es O, NH, S, ïster, tioïster o amida y n = 0, o 1.

2. El inmunïgeno de la reivindicaciïn 1 en el que accm es albïmina de suero bovino, ovalbïmina de huevo, gamma globulina bovina, tiroglobulina bovina o hemocianina de lapa (KLH, Keyhole Limpet Hemocyanin en inglïs)

3. Un inmunïgeno de cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que X es carbonilo o amino y Z es un alquileno de cadena lineal no sustituido CH1-5, n = 1 y A = O, NH o S.

4. Un inmunïgeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 en la que X = carbonilo, Z =-CH2-, n = 1 y A = O.

5. Un anticuerpo generado con un inmunïgeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 que es especïfico para un

Estructura 1 30 donde X=H o CH3

6. Un anticuerpo generado con un inmunïgeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 que es especïfico para un epïtopo de mefedrona.

7. El anticuerpo de la reivindicaciïn 6, en el cual el anticuerpo posee una reactividad cruzada de mïs de un 10%, preferiblemente mayor de 15 % respecto a un epïtopo tanto de catinona como metacatinona.

8. Un mïtodo de detecciïn o determinaciïn de una molïcula o mïs molïculas de mefedrona, metcatinona y catinona en una muestra in vitro tomada de un paciente. El mïtodo consiste en poner en contacto la muestra con un anticuerpo de la invenciïn y un conjugado, midiendo el conjugado y deduciendo a partir de un calibrador la presencia o cantidad de la molïcula o molïculas mefedrona, metcatinona y catinona.

9. Un kit para detectar o determinar una molïcula o molïculas de la Estructura 1, que incluye un anticuerpo de la reivindicaciïn 5.

10. El kit de la reivindicaciïn 9 en el que la molïcula o molïculas que van a detectarse o determinarse son una o mïs molïculas de mefedrona, metacatinona y catinona.

11. El kit de la reivindicaciïn 9, que tambiïn comprende un conjugado o calibrador.

12. El anticuerpo descrito en la reivindicaciïn 5, que es un anticuerpo policlonal.

Figura 1

Figura 2

Figura 3 Hapteno 1 (Arriba) e Inmunïgeno (1)