Composiciones y métodos para prevenir o tratar una respuesta inflamatoria.

Una composición que comprende una cantidad eficaz de fenretinida para su uso para la prevención de inflamación aguda de las vías respiratorias o para su uso para prevenir o reducir una infección de las vías respiratorias en un sujeto con fibrosis quística.

Composiciones y métodos para prevenir o tratar una respuesta inflamatoria Antecedentes de la invención La fibrosis quística es la enfermedad hereditaria mortal más común entre los caucásicos y se caracteriza por una anomalía bioquímica en el canal CFTR (regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística) . La manifestación clínica más común en la fibrosis quística es la infección pulmonar crónica que da lugar a una destrucción progresiva del tejido y a morbilidad pulmonar y mortalidad elevadas. El daño en el tejido pulmonar en la fibrosis quística se ha relacionado con una respuesta inmunitaria anormalmente exacerbada en las células de fibrosis quística. Esta exacerbación se ha relacionado con una activación exagerada del factor transcripcional proinflamatorio NF-KB.

Una molécula que se sabe que inhibe la activación del NF-KB es la ceramida (N-acilesfingosina; Signorelli, et al. (2001) FASEB J. 15:2401-2414) , un esfingolípido reconocido como segundo mensajero en la modulación molecular de la apoptosis. El ciclo de la esfingomielina, con la conversión de la esfingomielina en ceramida por la esfingomielinasa (SMasa) , es una ruta de señalización clave en muchos sistemas celulares (Hannun, et al. (1996) Science 274 (5294) :1855-9) . Se han definido dos rutas principales para la generación de ceramida que incluyen la hidrólisis de esfingomielina, una especie de esfingolípido abundante en las membranas celulares, por la acción de las SMasas; y por la biosíntesis de novo catalizada por la ceramida sintasa (Levade and Jaffrezou (1999) Biochim. Biophys. Acta 1438:1-17) . Sin embargo, la ruta hidrolítica es la fuente principal de ceramida en las respuestas celulares a la señalización extracelular, es decir, factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-a) , lipopolisacáridos, gammainterferón e interleucinas (Chan and Goldkorn (2000) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 22:460-468) .

El tratamiento de células en cultivo con TNF-a ha surgido como uno de los modelos mejor caracterizados de la inducción de citocinas y de la función de la ceramida. El TNF-a induce la activación de la SMasa en estas células y esta activación es una consecuencia del descenso de glutatión que sigue a la activación del receptor de muerte y caspasa 8 (Liu, et al. (1998) J. Biol. Chem. 273:11313-11320; Luberto, et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:1476014766) . A la inversa, la complementación extracelular de glutatión o N-acetilcisteína, un conocido precursor de glutatión, inhibe la generación de ceramida inducida mediante el estrés oxidativo provocado por agentes tales como TNF-a, interleucina-1-

H, hipoxia y daunorubicina (Beaver and Waring (1995) Eur. J. Cell Biol. 68:47-54; Liu, et al. (1998) supra; Singh, et al. (1998) J. Biol. Chem. 273:20354-20362; Lavrentiadou, et al. (2001) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25:676-684) . El glutatión inhibe la activación de la SMasa neutra, dependiente de magnesio, e inhibe la generación de ceramida inducida por el TNF-a en células de carcinoma mamario humanas (Liu, et al. (1998) citado anteriormente) . Además, se ha demostrado que para la producción de ceramida se requirieron bajos niveles de glutatión en células pulmonares, mientras que altos niveles de glutatión inhiben la generación de ceramida (Lavrentiadou, et al. (2001) citado anteriormente) .

Se ha demostrado que la fenretinida, es decir, N- (4-hidroxifenil) retinamida (4-HPR) , un derivado sintético del ácido retinoico, incrementa la ceramida endotelial por la síntesis de novo, no mediada por esfingomielinasas, (Erdreich-Epstein, et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:49531-49537) dando como resultado la apoptosis endotelial, dependiente de caspasa, de células endoteliales microvasculares del cerebro humano. En consecuencia, para el uso en la prevención del cáncer se sugiere la fenretinida.

La patente de Estados Unidos Nº. 6.368.831 divulga un procedimiento de tratamiento de un trastorno hiperproliferativo (incluyendo tumores, cánceres y tejido neoplásico, junto con trastornos hiperproliferativos premalignos y no neoplásicos o no malignos) en un sujeto que necesita dicho tratamiento usando un retinoide generador de ceramida, tal como un inhibidor de la degradación de ceramida y fenretinida. Esta patente explica que los trastornos hiperproliferativos premalignos y no neoplásicos o no malignos incluyen, a título enunciativo, trastornos mielodisplásicos; carcinoma de cuello uterino in situ; poliposis intestinal familiar tal como síndrome de Gardner; leucoplasias orales; histiocitosis; queloides; hemangiomas; estenosis arterial hiperproliferativa, artritis inflamatoria; hiperqueratosis y erupciones papuloescamosas incluyendo artritis.

La patente de Estados Unidos Nº. 6.610.835 explica que los esfingolípidos biológicamente importantes se pueden administrar como profármacos (por ejemplo, ceramida H-glucuronida) lo que incrementa el nivel de compuesto activo que se libera en el sitio activo de interés. El profármaco se escinde in vivo mediante una enzima apropiada para liberar un resto esfingolipídico parental para el tratamiento deseado. Esta referencia explica que los profármacos divulgados son útiles en el tratamiento de trastornos del tracto intestinal inferior, incluyendo, a título enunciativo, cáncer de colon, pólipos intestinales, tumores intestinales, enfermedades inflamatorias intestinales, incluyendo colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn, enterocolitis necrosante, ileocecitis, y otras inflamaciones del intestino inferior.

Breve descripción de la invención La presente invención proporciona un composición que comprende una cantidad eficaz de fenretinida para su uso para la prevención de inflamación aguda de las vías respiratorias o para su uso para prevenir o reducir una infección de las vías respiratorias en un sujeto con fibrosis quística, y el uso de una cantidad eficaz de fenretinida en la fabricación de un medicamento para la prevención de inflamación aguda de las vías respiratorias o para la prevención o reducción de una infección de las vías respiratorias en un sujeto con fibrosis quística.

Breve descripción de los dibujos La figura 1 muestra el efecto del pretratamiento con fenretinida (1, 25 !M, 2, 5 !M y 5 !M) sobre la liberación de IL-8 por células deficientes en CFTR (CFTE29º-) estimuladas con TNF-a recombinante humano. Los resultados son medias ± E.E. de 4-7 experimentos independientes. *Significativamente diferente (P < 0, 05) en comparación con el control de TNF-a.

La figura 2 muestra el efecto del pretratamiento con fenretinida (1, 25 !M, 2, 5 !M y 5 !M) sobre la liberación de IL-8 por células normales (9HTEo-) estimuladas con TNF-a recombinante humano. Los resultados son medias ± E.E. de 4-6 experimentos independientes. *Significativamente diferente (P < 0, 05) en comparación con el control de TNF-a.

La figura 3 muestra el efecto de la fenretinida (1, 25 !M, 2, 5 !M y 5 !M) sobre la liberación de IL-8 por células deficientes en CFTR (CFTE29º-) en condiciones no inflamatorias. Los controles incluyeron medio esencial mínimo (MEM) y controles con vehículo que contenían etanol (EtOH) en concentraciones equivalentes a las usadas con tratamientos con fenretinida. Los resultados son medias ± E.E. de 3-7 experimentos independientes. *Significativamente diferente (P < 0, 05) en comparación con el control de MEM.

La figura 4 muestra el efecto de la fenretinida (1, 25 !M, 2, 5 !M y 5 !M) sobre la liberación de IL-8 por células normales (9HTEo-) en condiciones no inflamatorias. Los controles incluyeron MEM y controles con vehículo que contenían EtOH en concentraciones equivalentes a las usadas con tratamientos con fenretinida. Los resultados son medias ± E.E. de 4-6 experimentos independientes. *Significativamente diferente (P < 0, 05) en comparación con el control de MEM.

La figura 5 muestra el efecto de la fenretinida sobre la cantidad de Pseudomonas aeruginosa hallada en los pulmones de ratones genéticamente intactos y deficientes en CFTR 3 días después de la infección.

La figura 6 muestra el número de células inflamatorias reclutadas en los pulmones de ratones genéticamente intactos y deficientes en CFTR pretratados con fenretinida y expuestos a P. aeruginosa.

La figura 7 muestra el efecto de la fenretinida sobre la proliferación de células epiteliales humanas deficientes en CFTR (CFTE29º-) . Se incubaron células CFTE29º- (0, 6 x 106/pocillo en una placa de 24 pocillos) con 1, 25 !M, 2, 5 !M o 5 !M de fenretinida durante 24 horas en un MEM que contenía FBS al 10%. Los pocillos de control con vehículo contenían etanol (EtOH) a concentraciones equivalentes a las usadas con tratamientos con fenretinida. Después de 24 horas, el medio se reemplazó por MEM con FBS al 2%, se incubaron... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende una cantidad eficaz de fenretinida para su uso para la prevención de inflamación aguda de las vías respiratorias o para su uso para prevenir o reducir una infección de las vías respiratorias en un sujeto con fibrosis quística.

2. El uso de una cantidad eficaz de fenretinida en la fabricación de un medicamento para la prevención de inflamación aguda de las vías respiratorias o para prevenir o reducir una infección de las vías respiratorias en un sujeto con fibrosis quística.