Amilasas y glucoamilasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para formarlas y utilizarlas.

Un ácido nucleico aislado, sintético o recombinante que codifica un polipéptido que tiene actividad glucoamilasa,

que comprende

(a) una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 25;

(b) un fragmento del ácido nucleico de SEQ ID No. 25 en el que el fragmento codifica un polipéptido que tiene actividad de glucoamilasa;

(c) el ácido nucleico de (a) o (b) que codifica un polipéptido que tiene una actividad de glucoamilasa en donde el polipéptido carece de una secuencia señal o un módulo de enlazamiento a un carbohidrato;

(d) el ácido nucleico de (a) o (b), o (c), que codifica un polipéptido que tiene una actividad glucoamilasa y, además que comprende una o más secuencias heterólogas,

(e) la secuencia de ácido nucleico de (d), en donde las una o más secuencias heterólogas comprenden la secuencia que codifica una secuencia señal heteróloga, un módulo de enlazamiento a un carbohidrato, un dominio catalítico (CD), o una combinación de los mismo, en donde la secuencia señal heteróloga, el módulo de enlazamiento a un carbohidrato o un dominio catalítico (CD) se deriva opcionalmente de otra enzima amilasa, o una enzima no amilasa; o

(f) una secuencia de ácido nucleico completamente complementaria a (a), (b), (c), (d) o (e).

Amilasas y glucoamilasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para formarlas y utilizarlas Campo técnico

Esta invención se relaciona con biología molecular y celular y bioquímica. En un aspecto, la invención está dirigida a polipéptidos que tienen actividad de glucoamilasa, polinucleótidos que codifican los polipéptidos, y métodos para elaborar y usar estos polinucleótidos y polipéptidos. En un aspecto, los polipéptidos de la invención se pueden usar como las glucoamilasas que actúan en forma exo, por ejemplo, para catalizar la hidrólisis de los polisacáridos que comprenden monómeros de glucosa, tales como almidón (un polímero de monómeros de glucosa unidos por enlaces 1,4-alfa o 1,6-alfa), en azúcares. En un aspecto, la invención está dirigida a polipéptidos que tienen actividad termoestable de glucoamilasa, incluyendo actividad de 1,4-alfa-D-glucano glucohidrolasa. En un aspecto, los polipéptidos de la invención se pueden usar como glucoamilasas para catalizar la hidrólisis de los polisacáridos tales como almidón en azúcares, tales como glucosa. La invención también está dirigida a constructos de ácido nucleico, vectores y células huésped que comprenden las secuencias de ácido nucleico de la invención así como también métodos recombinantes para la producción de los polipéptidos de la invención. La invención también está dirigida al uso de glucoamilasas de la invención en procesos de conversión de polisacáridos (por ejemplo, almidón), incluyendo la producción de jarabe de maíz con alto contenido de fructosa (HFCS), etanol, dextrosa y jarabes de dextrosa.

Antecedentes

El almidón es un carbohidrato complejo usualmente encontrado en la dieta humana. La estructura del almidón es de polímeros de glucosa enlazados mediante enlaces glucosídicos a-1,4 y (3-1,6. A nivel comercial, se usan las glucoamilasas para hidrolizar adicionalmente el almidón de maíz, que ya ha sido parcialmente hldrollzado con una alfa-amilasa. La glucoamilasa más ampliamente utilizada es producida a partir el hongo Aspergillus niger, uno de los problemas con el uso comercial de esta enzima es su termoestabilidad relativamente baja.

En general, el procesamiento del almidón hasta fructosa consiste de cuatro etapas: licuefacción del almidón granulado, sacarificación del almidón licuado en dextrosa, purificación e isomerización hasta fructosa. El objetivo de un proceso de licuefacción del almidón es convertir una suspensión concentrada de gránulos de polímero de almidón en una solución de dextrinas solubles con longitud de cadena más corta de baja viscosidad. Esta etapa es esencial para el manejo conveniente con equipamiento estándar y para la conversión eficiente hasta glucosa u otros azúcares. Para licuar el almidón granulado, es necesario gelatinizar los gránulos elevando la temperatura del almidón granulado aproximadamente por encima de 72°C. El proceso de calentamiento rompe instantáneamente los gránulos de almidón insolubles para producir una solución de almidón soluble en agua. La solución de almidón solubilizada es luego licuada por la amilasa. Un gránulo de almidón está compuesto de: 69-74% de amilopectina, 26- 31% de amilosa, 11-14% de agua, ,2-,4% de proteína, ,5-,9% de lípido, ,5-,1% de ceniza..2-,3% de fósforo, ,1% de pentosano. Aproximadamente el 7% de un gránulo es amorfo y el 3% es cristalino.

El enranciamiento de los productos horneados (tales como pan) ha sido reconocido como un problema que se torna más serio a medida que transcurre más tiempo entre el momento de la preparación del producto panificado y el momento de consumo. El término enranciamiento se utiliza para describir cambios indeseables para el consumidor en las propiedades del producto panificado después de salir del horno, tales como incremento en la firmeza de la miga, una reducción de la elasticidad de la miga y cambios en la corteza, que se torna dura y curtida. La firmeza de la miga del pan se incrementa de manera adicional durante el almacenamiento hasta alcanzar un nivel que se considera negativo. El incremento en la firmeza de la miga, que es considerado el aspecto más importante del enranciamiento, es reconocido por el consumidor mucho antes de que el producto panificado se haya tornado inadecuado para el consumo.

Existe la necesidad en la industria de nuevas amilasas, por ejemplo, amilasas ácidas, útiles para varios usos incluyendo procesos comerciales de licuefacción de almidón de maíz o fabricación mejorada que tenga características nuevas o mejoradas de desempeño con respecto a las enzimas estándar de la industria, por ejemplo, de Bacillus licheniformis. También existe la necesidad en la industria de identificar las amilasas y glucoamilasas capaces de hidrolizar de manera eficiente el almidón granulado (por ejemplo almidón granulado sin purificar) a bajas temperaturas sin la necesidad de un etapa de gelatinización del almidón a alta temperatura; la enzimas de la invención, por ejemplo, glucoamilasas, se pueden utilizar para satisfacer esta necesidad.

También existe la necesidad de nuevas amilasas que tengan utilidad en productos para lavadoras automáticas de vajillas (ADW) y detergente para lavandería. En los productos para ADW, la amilasa actuará a pH 1-11 y a 45-6 °C en presencia de agentes quelantes de calcio y condiciones oxidativas. Para lavandería, se requerirá actividad a pH 9-1 y 4°C en la matriz apropiada de detergente. Las amilasas también son útiles en el desencolado textil, procesos de elaboración de cerveza, modificación de almidón en la industria de pulpa y papel y otros procesos descritos en el arte.

El documento WO 3/1271 A2 describe la Identificación de diferentes tipos de enzimas, es decir, tanasas, celulasa, glucosa oxidasas, glucoamilasas, fitasa, p-galactosidasas, sacarasa o invertasa, lipasa, a-amilasas, lacasa, poligalacturonasas y xilanasas de Aspergillus fumigatus, cuyas enzimas pueden ser utilizadas en procesos industriales.

La solicitud de patente de los Estados Unidos No. 23/13885 A1 divulga plantas transgénicas, en particular plantas de maíz, que expresan enzimas tales como a-amilasa, pululanasa, a-glucosidasa, glucosa isomerasa y glucoamilasa, de modo que las plantas son capaces de procesar por sí mismas un sustrato tal como el almidón.

El número de Acceso de UniProt Q4WIT7 muestra la secuencia de aminoácidos de un glucano 1,4-alfa-glucosidasa putativo, es decir, una glucoamilasa, de Aspergillus fumigatus.

Resumen

La invención provee ácidos nucleicos aislados, sintéticos o recomblnantes que comprenden una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 8%, 81%, 82%, 83%, 84%. 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 9%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más, o identidad completa de secuencia (1%) con un ácido nucleico de la invención, por ejemplo, un ejemplo de ácido nucleico de la invención. En un aspecto, el ácido nucleico codifica al menos un pollpéptido que tiene actividad de glucoamilasa y las Identidades de secuencia se determinan mediante análisis con un algoritmo de comparación de secuencias o por inspección visual. En otro aspecto, la divulgación provee ácidos nucleicos para uso como sondas, moléculas inhibidoras (por ejemplo, ARNi antisentido, tales como siARN, microARN o miARN), regulación de transcripción o de traducción y similares.

Los ejemplos de ácidos nucleicos de la invención incluyen ácidos nucleicos aislados, sintéticos o recomblnantes, que comprenden una secuencia de ácido nucleico como la expuesta en la SEQ ID NO: 25.

Los ejemplos de ácidos nucleicos de la invención también incluyen ácidos nucleicos aislados, sintéticos o recombinantes, que codifican un polipéptido de la invención, por ejemplo, un ejemplo de pollpéptido que tiene una secuencia como la expuesta en la SEQ ID NO: 26.

En un aspecto, el polipéptido de la Invención tiene actividad de glucoamilasa que actúa en forma exo. En una realización, los polipéptidos de la Invención pueden catalizar la hidrólisis de polisacáridos y/o oligosacáridos que comprenden monómeros de glucosa, tales como almidón (un polímero de monómeros de glucosa unido por enlaces 1,4-alfa o 1,6-alfa).

Las glucoamilasas de la invención se pueden usar a nivel comercial en las etapas ¡nidales (licuefacción) del procesamiento de polisacárido, oligosacárido o almidón; en la molienda húmeda de maíz; en la producción de alcohol; como agentes de limpieza en matrices de detergentes; en la industria textil para desencolado del almidón; en aplicaciones de panadería y pastelería; en la Industria de las bebidas; en yacimientos petrolíferos en procesos de perforación; en el entintado de papel reciclado y en alimentación animal. Las glucoamilasas de la invención se pueden usar... [Seguir leyendo]

1. Un ácido nucleico aislado, sintético o recombinante que codifica un polipéptido que tiene actividad glucoamilasa, que comprende

(a) una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 8% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 25;

(b) un fragmento del ácido nucleico de SEQ ID No. 25 en el que el fragmento codifica un polipéptido que tiene actividad de glucoamilasa;

(c) el ácido nucleico de (a) o (b) que codifica un polipéptido que tiene una actividad de glucoamilasa en donde el polipéptido carece de una secuencia señal o un módulo de enlazamiento a un carbohidrato;

(d) el ácido nucleico de (a) o (b), o (c), que codifica un polipéptido que tiene una actividad glucoamilasa y, además que comprende una o más secuencias heterólogas,

(e) la secuencia de ácido nucleico de (d), en donde las una o más secuencias heterólogas comprenden la secuencia que codifica una secuencia señal heteróloga, un módulo de enlazamiento a un carbohidrato, un dominio catalítico (CD), o una combinación de los mismo, en donde la secuencia señal heteróloga, el módulo de enlazamiento a un carbohidrato o un dominio catalítico (CD) se deriva opcionalmente de otra enzima amilasa, o una enzima no amilasa; o

(f) una secuencia de ácido nucleico completamente complementaria a (a), (b), (c), (d) o (e).

2. El ácido nucleico aislado, sintético o recombinante de la reivindicación 1 que codifica un polipéptido que tiene actividad de glucoamilasa, en donde la actividad de la glucoamilasa comprende hidrolizar enlaces glucosídicos, u opcionalmente hidrolizar enlaces glucosídico en un polisacárido, un oligosacárido, o un almidón, u opcionalmente los enlaces glucosídicos comprenden un enlace a-1,4-glucosídico o un enlace a-1,6-glucosídlco, o en donde la actividad de glucoamilasa comprende escindir un maltosa o una unidad de D-glucosa de un extremo no reductor de un polisacárido, un oligosacárido, o un almidón.

3. Un vector, un casete de expresión o un vehículo de clonación que comprende:

(a) un ácido nucleico que comprende la secuencia de ácido nucleico de la reivindicación 1;

(b) el vector, casete de expresión, o vehículo de clonación de (a), en donde el ácido nucleico está enlazado operativamente a una promotor;

(c) el vector, casete de expresión, o vehículo de clonación de (b), en donde el promotor es un promotor de una planta o un promotor viral;

(d) el vector, casete de expresión, o vehículo de clonación de (c), en donde el promotor es un promotor ¡nduclble o un promotor específico de tejido; o

(e) el vector, casete de expresión, o vehículo de clonación de (d), en donde el promotor específico de tejido es opclonalmente específico de la semilla, específico del endospermo, específico de la hoja, específico de la raíz, específico del tallo o un promotor inducido por absición.

4. Una célula transformada que comprende un ácido nucleico que comprende la secuencia de ácido nucleico de la reivindicación 1, o un vector, casete de expresión, o vehículo de clonación de la reivindicación 3 en donde la célula es una célula bacteriana, una célula de mamífero, una célula de levadura, una célula de insecto, o una célula de una planta, en donde la célula de la planta es opcionalmente una célula de patata, arroz, maíz, trigo, tabaco, o cebada.

5. Una planta transgénica, o célula de una planta, semilla, producto de una planta, tejido de una planta, o parte de una planta, que comprende

la secuencia de ácido nucleico de la reivindicación 1, o vector, casete de expresión, o vehículo de clonación de la reivindicación 3; en donde la planta, o célula de una planta, semilla, producto de una planta, tejido de una planta o parte de una planta es o se deriva de Anacardium, Andropogoneae, Arachis, Asparagus, Atropa, Avena, Beta, Brassica, Ceiba, Citrus, Citrullus, Capsicum, Carthamus, Chenopodíaceae, Cocos, Coffea, Cucumis, Cucúrbita, Daucus, Elaeis, Fragaria, Glycine, Gossypium, Grainier, Helianthus, Heterocallis, Hordeum, Hyoscyamus, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Malus, Manihot, Majorana, Medicago, Nicotiana, Olea, Oryza, Panieum,

Pannisetum, Persea, Phaseolus, Pistachia, Pisum, Ponceau, Pyrus, Prunus, Raphanus, Ricinus, Secale, Senecio, Sinapis, Solanum, Sorgo, Theobromus, Trigonella, Triticum, Vicia, Vitis, Vigna o Zea, en donde la planta es opcionalmente

(a) una planta dicotiledónea (una dicot) o una planta monocotiledónea (una monocot);

(b) maíz, soja, caña de azúcar, remolacha azucarera, pasto varilla, Miscanthus, trigo, Brassica, mandioca, algodón, y

cebada;

(c) una planta de sorgo, palma, girasol, arroz, cebada, una planta de cacahuete, sésamo, una planta de patata, una planta de tomate, una planta oleaginosa, una planta de colza, una planta de soja, un pasto, o una planta de tabaco; o

(d) una especies de la familia o del género Anacardium, Andropogoneae, Arachis, Asparagus, Atropa, Avena, Beta,

Brassica, Ceiba, Citrus, Citrullus, Capsicum, Carthamus, Chenopodiaceae, Cocos, Coffea, Cucumis, Cucúrbita, Daucus, Elaeis, Fragaria, Glycine, Gossypium, Grainier, Helianthus, Heterocallis, Hordeum, Hyoscyamus, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Malus, Manihot, Majorana, Medicago, Nicotiana, Olea, Oryza, Panieum, Pannisetum, Persea, Phaseolus, Pistachia, Pisum, Ponceau, Pyrus, Prunus, Raphanus, Ricinus, Secale, Senecio, 15 Sinapis, Solanum, Sorgo, Theobromus, Trigonella, Triticum, Vicia, Vitis, Vigna y/o Zea, en donde la semilla transgénica es opcionalmente una semilla de maíz, un grano de trigo, una semilla oleaginosa, una semilla de colza, una semilla de soja, una semilla de palma, una semilla de girasol, una semilla de sésamo, una semilla de una planta de arroz, cebada, cacahuete o de tabaco, que comprende la secuencia de ácido nucleico de la reivindicación 1, o vector, casete de expresión, o vehículo de clonación de la reivindicación 3.

6. Un polipéptido aislado, sintético o recombinante que tiene actividad de glucoamilasa, que comprende

(i) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 85% de identidad de secuencia con la secuencia de la SEQ ID

NO: 26;

(ii) una secuencia de aminoácidos codificada por el ácido nucleico de la reivindicación 1;

(iii) un fragmento de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No. 26 en donde el fragmento tiene actividad de 25 glucoamilasa;

(iv) el polipéptido de (i), (ii) o (iii) que carece de una secuencia señal o un módulo de enlazamiento a un carbohidrato;

(v) el polipéptido de (i), (ii), (iii) o (iv) que comprende además una o más secuencias heterólogas;

(vi) el polipéptido de (v), en donde las una o más secuencias heterólogas comprenden una secuencia señal 3 heteróloga, un módulo de enlazamiento a un carbohidrato, un dominio catalítico (CD), o una combinación de los

mismos, o la secuencia heteróloga comprende un epítopo heterólogo, una etiqueta o rótulo de purificación;

(vii) el polipéptido de (vi), en donde el polipéptido comprende al menos un sitio de glicosilación, en donde la glicosilación es opcionalmente una glicosilación enlazada a N, en donde el polipéptido es opcionalmente glicosilado después de ser expresado en una P. pastoris o una S. pombe\ o

(viii) el polipéptido de (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) o (vii), en donde el polipéptido puede ser utilizado para generar anticuerpos que se enlazan específicamente al polipéptido de la SEQ ID NO: 26.

7. El polipéptido aislado, sintético o recombinante de la reivindicación 6 en donde el polipéptido tiene una actividad de glucoamilasa y en donde la actividad de glucoamilasa comprende hidrolizar enlaces glucosídicos, y opcionalmente los enlaces glucosídicos comprenden un enlace a-1,4-glucosídico o un enlace a-1,6-glucosídico, y/o

en donde opcionalmente la actividad de glucoamilasa comprende hidrolizar enlaces glucosídicos en un polisacárido, oligosacárido o almidón, y/o la actividad de glucoamilasa comprende la escisión de un maltosa o una unidad de D- glucosa de extremo no reductor de un polisacárido, oligosacárido, o almidón.

8. Un método para hidrolizar, licuar o remover un polisacárido, oligosacárido o almidón que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la

reivindicación 1;

(b) proporcionar una composición que comprende un polisacárido, oligosacárido, o almidón; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) con la composición de la etapa (b) bajo condiciones en donde el polipéptido hidroliza, licúa o remueve el polisacárido, oligosacárido, o almidón.

9. Un método para el lavado de un objeto que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar una composición que comprende el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1;

(b) proporcionar un objeto; y

(c) poner en contacto la composición de la etapa (a) y el objeto de la etapa (b) bajo condiciones en donde la composición puede lavar el objeto.

1. Un método para hidrolizar un polisacárido, oligosacárido o almidón en un pienso o un alimento antes del consumo por un animal que comprende las siguientes etapas:

(a) la obtención de un material alimenticio que comprende un almidón, en donde un polisacárido, oligosacárido o almidón en el polisacárido, oligosacárido o almidón puede ser hldrollzado por el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1; y

(b) la adición del polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1 al material del pienso o alimento en cantidades suficientes y durante un periodo de tiempo suficiente para causar la hidrólisis del polisacárido, oligosacárido o almidón y la formación de un alimento o pienso tratado, hldrollzando de ese modo el polisacárido, oligosacárido o almidón en el alimento o el pienso antes del consumo por el animal, en donde el alimento o el pienso opcionalmente comprende arroz, maíz, cebada, trigo, legumbres, o patata.

11. Un método para el desencolado textil que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la

reivindicación 1;

(b) proporcionar un tela; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y la tela de la etapa (b) bajo condiciones en las que la glucoamilasa puede desencolar la tela.

12. Un método para el tratamiento de fibras lignocelulósicas que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la

reivindicación 1;

(b) proporcionar una fibra llgnocelulósica; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y la fibra de la etapa (b) bajo condiciones en las que el polipéptido puede tratar la fibra mejorando así las propiedades de la fibra.

13. Un método para producir un jarabe con alto contenido de maltosa o con alto contenido de glucosa que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1;

(b) proporcionar una composición que comprende un polisacárido, oligosacárido o almidón; opcionalmente en donde el polisacárido, oligosacárido, o almidón es de arroz, maíz, cebada, trigo, legumbres, patata o batata y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y la tela de la etapa (b) bajo condiciones en las que el polipéptido de la etapa (a) puede hidrolizar la composición de la etapa (b), produciendo de este modo un jarabe con alto contenido de maltosa o alto contenido de glucosa.

14. Un método para mejorar el flujo de los fluidos de producción que contienen al polisacárido, oligosacárido, o almidón, que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1;

(b) proporcionar la producción del fluido que comprende un polisacárido, oligosacárido, o almidón; opcionalmente en donde el fluido de producción es de una formación subterránea; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y el fluido de producción de la etapa (b) bajo condiciones en las que la glucoamilasa puede hidrolizar el polisacárido, oligosacárido o almidón en el fluido de producción, mejorando así su flujo por la disminución de su densidad.

15. Un método para cambiar la viscosidad de una composición, que comprende:

(¡)

(a) proporcionar la composición y el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1; y

(b) tratar la composición con el polipéptido de la reivindicación 6, o el polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1; o

(ii) el método de (i), en el que la composición comprende un suelo o un lodo de perforación.

16. Un método para el uso de una glucoamilasa en la elaboración de cerveza o en la producción de alcohol que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1;

(b) proporcionar una composición utilizada para la elaboración de cerveza o en la producción de alcohol que comprende un polisacárido, oligosacárido, o almidón; en donde la composición que comprende un polisacárido, oligosacárido, o almidón es opcionalmente una cerveza;

(c) combinar el polipéptido de la etapa (a) con la composición de la etapa (b) bajo condiciones en las que el polipéptido puede hidrolizar el polisacárido, oligosacárido, o almidón en la composición utilizada para la elaboración de cerveza o la producción de alcohol.

17. Un método para el destintado de papel o fibras que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1;

(b) proporcionar una composición que comprende papel o fibra; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y la composición de la etapa (b) bajo condiciones en donde el polipéptido puede destintar el papel o la fibra.

18. Un método para bioblanquear una composición que comprende:

(¡)

(a) proporcionar la composición y el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1; y

(b) tratar la composición con el polipéptido de la reivindicación 6, o el polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1; o

(ii) el método de (i), en el que la composición es un papel o un producto de pulpa.

19. Un método para la fabricación de un combustible que comprende:

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(¡)

(a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o el polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1;

(b) proporcionar una composición que comprende un polisacárido, oligosacárido, o almidón; y

(c) poner en contacto el polipéptido de (a) con la composición de (b) bajo condiciones en donde el polipéptido hidroliza el polisacárido, oligosacárido, o almidón; o

(¡i) el método de (i) en el que el polipéptido es una enzima termoestable;

(i¡¡) el método de (i) en el que el combustible es a base de etanol.

2. Un método para procesar un material de biomasa que comprende llgnocelulosa que comprende que comprende

(¡)

(a) proporcionar una composición que comprende el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1, y, proporcionando un material de biomasa; y

(b) poner en contacto la composición que comprende el polipéptido de la reivindicación 6, o el polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1, con el material de biomasa;

(ii) el método de (i), en el que el material de biomasa comprende o se deriva de un cultivo agrícola, o es una subproducto de un alimento o una producción de piensos, o es un producto de desecho lignocelulósico, o es un residuo de una planta o un residuo de papel o un producto de residuo de papel, y opcionalmente el material de biomasa comprende patatas, soja, cebada, centeno, maíz, avena, trigo, remolacha, o caña de azúcar;

(iii) el método de (i) o (ii), en el que el polipéptido tiene la actividad que comprende una actividad de glucoamilasa;

(iv) el método de cualquiera de (ii), en el que el residuo de la planta comprende tallos, hojas, cáscaras, vainas, mazorcas, madera, astillas de madera, pulpa de madera y aserrín y, o, el residuo de papel comprende papel de fotocopiadora usado o descartado, papel de la impresora de ordenador, papel de cuaderno, papel de notas, papel de máquina de escribir, periódicos, revistas, cartón y materiales de embalaje a base de papel; o

(v) el método de (i) a (iv), en el que el procesamiento del material de biomasa genera un bioetanol, biopropanol, biobutanol, o un biodiesel;

(vi) el método de (i) a (v), en el que el material de biomasa comprende un lignocelulosa.

21. Un método para producir un azúcar, comprendiendo el método:

(i) (a) proporcionar el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1; (b) proporcionar una composición que comprende un polisacárido o un oligosacárido; y (c) poner en contacto la composición de la etapa (b) con el polipéptido de la etapa (a), generando así azúcares;

(ii) el método de (i), en el que la composición que comprende un polisacárido comprende un almidón;

(iii) el método de cualquiera de (i) o (ii), en el que el azúcar es un azúcar fermentable;

(iv) el método de (i), (ii) o (iii), que comprende además la fermentación del azúcar para producir un alcohol; o

(v) el método de (iv), en el que el alcohol es un etanol, propanol, o butanol.

22. Una composición detergente, un pienso o un alimento, un material textil o tela, un papel o un producto de papel o pulpa de papel, un líquido o jarabe con alto contenido de maltosa o con alto contenido de glucosa, una composición antienranciamiento, una bebida alcohólica, una cerveza, una composición farmacéutica, un producto para el cuidado oral, en el que opcionalmente el producto para el cuidado oral comprende una pasta de dientes, una crema dental, un gel o un polvo de dientes, un odontic, un enjuague bucal, una formulación de enjuague para antes o después del cepillado, una goma de mascar, una pastilla o un caramelo, un aceite fluido para perforación de pozos, una solución de bioblanqueamiento, un desinfectante, un biodefensa o un agente biodesintoxicante, un producto lácteo, o un material de biomasa que comprende el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1.

23. Una composición de liberación controlada o liberación retrasada que comprende el polipéptido de la reivindicación 6, o un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 1, que comprende

(a) un ingrediente deseado recubierto por un revestimiento de polímero de látex;

(b) la composición de liberación controlada o liberación retardada de (a), en la que el ingrediente deseado comprende una enzima;

(c) la composición de liberación controlada o liberación retardada de (a) o (b), en la que el ingrediente deseado comprende una molécula pequeña, un fármaco, un polisacárido, un lípido, un ácido nucleico, una vitamina, un antibiótico, o un insecticida;

(d) la composición de liberación controlada o liberación retardada de (a), (b), o (c), en la que el ingrediente deseado comprende una pella o una matriz;

(e) la composición de liberación controlada o liberación retardada de cualquiera de (a) a (d), en la que la pella o matriz comprende material comestible;

(f) la composición de liberación controlada o liberación retardada de cualquiera de (a) a (e), en la que el revestimiento de polímero de látex comprende una pintura de látex; o

(g) la composición de liberación controlada o liberación retardada de cualquiera de (a) a (f), en la que el revestimiento de polímero de látex comprende un (met)acrilato, un acetato de vinilo, un estireno, un etileno, un cloruro de vinilo, un butadieno, un cloruro de vinilideno, un versatato de vinilo, un propionato de vinilo, un acrilato de t-butilo, un acrilonitrilo, un neopreno, un maleato, un fumarato o una combinación de los mismos o un derivado de los mismos; o

(h) la composición de liberación controlada o liberación retardada de cualquiera de (a) a (g).