Pectato liasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para su preparación y uso.

Un ácido nucleico aislado, sintético, o recombinante que comprende

(a) una secuencia de ácidos nucleicos que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 %,

91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, o superior o que es idéntica en un 100 % a la SEC ID Nº: 77, sobre una región de al menos 950, 1000, 1050, 1100, 1150 o más restos, o la longitud completa de un gen o de un transcrito, en la que el ácido nucleico codifica al menos un polipéptido que tiene una actividad de pectato liasa;

(b) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia como se establece en la SEC ID Nº: 77;

(c) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como se establece en las SEC ID Nº: 78, SEC ID Nº: 132 o SEC ID Nº: 134;

(d) una secuencia que se hibrida en condiciones rigurosas con un ácido nucleico que comprende la SEC ID Nº: 77, SEC ID Nº: 131 o SEC ID Nº: 133, en la que el ácido nucleico codifica un polipéptido que tiene una actividad de pectato liasa,

en la que las condiciones rigurosas incluyen una etapa de lavado que comprende un lavado en 0,2X SSC a una temperatura de aproximadamente 65 ºC durante aproximadamente 15 minutos;

(e) el ácido nucleico de (a), (b), (c) o (d) que codifica un pectato liasa pero que carece de una secuencia señal, un dominio prepro, o una combinación de los mismos;

(f) el ácido nucleico de (a), (b), (c), (d) o (e) que codifica un pectato liasa pero que también tiene una secuencia heteróloga; o

(g) una secuencia complementaria con (a), (b), (c), (d), (e), o (f).

Pectato liasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para su preparación y uso Campo técnico

La presente invención se refiere a biología molecular y celular, bioquímica y biotecnología. La invención se refiere a polipéptidos que tienen una actividad de pectato liasa, por ejemplo, una pectinasa, polinucleótidos que codifican los polipéptidos, y métodos para la preparación y uso de estos polinucleótidos y polipéptidos. Los polipéptidos de la invención se pueden usar como pectato liasas para catalizar la beta-eliminación o hidrólisis de pectina y/o ácido poligalacturónico, tal como ácido alfa-D-galacturónico unido en la posición 1,4. Se pueden usar en una diversidad de aplicaciones industriales, por ejemplo, para tratar paredes de células vegetales, tales como las de algodón u otras fibras naturales. En otra aplicación industrial a modo de ejemplo, dos polipéptidos de la invención se pueden usar como limpiadores textiles.

Antecedentes

La fibra de algodón consta de una pared celular primaria y una pared celular secundaria. La pared celular secundaria es prácticamente celulosa pura, mientras que la pared celular primaria es una estructura reticular compleja de pectina, proteina, ceras, pigmentos, hemicelulosa y celulosa. En la limpieza textil de materiales de celulosa (por ejemplo, tejido de algodón de punto o tejido), se necesitan condiciones alcalinas (hasta un 10 % de NaOH) y temperaturas elevadas (hasta 100 °C) para una eliminación eficaz de los componentes de la pared celular primaria. Este tratamiento químico riguroso da como resultado pérdidas de materias primas y carga ambiental sustancial. Existen varias enzimas diferentes que tienen la capacidad de degradar la pectina; estas son las pectinasas, pectina metilesterasas, pectina liases y pectato liasas.

"Apresto" es el nombre dado a la sustancia o mezcla de sustancias que se aplica al hilo de urdimbre antes de tejer. El apresto forma un revestimiento alrededor de la superficie del hilo antes de tejer. Este revestimiento proporciona lubricación y evita la rotura del hilo de urdimbre durante la operación de tejido. Algunas sustancias químicas habituales que se usan para preparar aprestos son Ácido Poliacrílico (PA), Alcohol Polivinilico (PVA), Almidón y Almidón Modificado. A las fibras celulósicas que incluyen algodón, rayón y mezcla de éstos con fibras sintéticas tales como poliéster, por lo general se les da apresto con aprestos a base de almidón. El proceso de retirar el apresto elimina el apresto antes del teñido, estampado y/o acabado. Los aprestos de almidón se pueden eliminar mediante lavado con ácido caliente, que hidrolizará el almidón. Sin embargo, la hidrólisis àcida da como resultado la pérdida de materia prima ya que la celulosa también es propensa a la hidrólisis àcida. Los aprestos de almidón también se pueden eliminar mediante el uso de peróxido de hidrógeno para degradar el almidón por oxidación. La retirada del apresto también puede ser un proceso enzimàtico. Durante muchos años se han usado amilasas en la industria textil para la eliminación de aprestos de almidón. Algunas condiciones (por ejemplo, pH y temperatura) para la retirada enzimàtica de apresto son dictadas por las condiciones de funcionamiento de la enzima. La mayoría de las amilasas usadas en la solicitud son relativamente termoestables, sin embargo, son enzimas óptimas neutras o ácidas.

La "limpieza" es un proceso en el que el tejido de algodón al que se le retira el apresto se procesa para solubiliza y extraer material no celulósico indeseado encontrado de forma natural en el algodón y también para retirar impurezas aplicadas tales como lubricantes de maquinaria. La limpieza usa agentes altamente alcalinos para retirar el material no celulósico, que tiene un grave impacto ambiental. Además, los agentes químicos degradan parcialmente la celulosa en la fibra de algodón que causa una pérdida de resistencia de la fibra y materias primas y como tal no es un proceso óptimo. La etapa final en el proceso de trata miento predio del tejido de algodón es el blanqueado en el que los pigmentos naturales y la materia presenten la fibra se blanquean. Una enzima pectinolítica alcalina termoestable que podría tener como objetivo de forma específica el material no celulósico podría reducir o eliminar el uso de agentes químicos rigurosos que disminuyen la carga en el en torno a la vez que mantienen la integridad y resistencia de la fibra de algodón.

Algunas divulgaciones mencionadas anteriormente en el examen incluyen el documento de patente WO 00/26464 que analiza pectato liasas y su termoestabilidad, así como las entradas AF279364 y Q9F7L3 en bases de datos que desvelan secuencias que tienen alguna coincidencia con las de la SEC ID N°: 77 y la SEC ID N°: 78, pero que están fuera del alcance de la presente invención.

Sumario

La invención proporciona ácidos nucleicos sintéticos o recombinantes, aislados que comprenden una secuencia de ácidos nucleicos que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, o más, o completa (100 %) con la SEC ID N°: 77, sobre una región de al menos aproximadamente 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2050, 2100, 2200, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, o más restos, que codifica al menos un polipéptido que tiene una actividad de pectato, y las identidades de las secuencias se determinan mediante análisis con un algoritmo de comparación de secuencias o mediante inspección visual.

Algunos ácidos nucleicos a modo de ejemplo de la invención también incluyen ácidos nucleicos aislados o recombinantes que codifican un polipéptido que tiene una secuencia como se establece en la SEC ID N°: 78, y ciertas subsecuencias de la misma y variantes de la misma. El polipéptido tiene una actividad de pectato liasa.

En un aspecto, la invención también proporciona dichos ácidos nucleicos que codifican pectato liasa con una novedad común por que se derivan de cultivos mixtos.

En un aspecto, la invención también proporciona dichos ácidos nucleicos que codifican pectato liasa con una novedad común por que se derivan de fuentes ambientales, por ejemplo, fuentes ambientales mixtas.

En un aspecto, el algoritmo de comparación de secuencias es un algoritmo BLAST en la versión 2.2.2 en el que una configuración de filtrado se ajusta para blastall -p blastp -d "nr pataa" -F F, y todas las otras opciones se ajustan por defecto.

La actividad de pectato liasa puede comprender catálisis de beta-eliminación (trans-eliminación) o hidrólisis de pectina o ácido poligalacturónico (pectato). La actividad de pectato liasa puede comprender la descomposición o disolución de paredes celulares vegetales. La actividad de pectato liasa puede comprender beta-eliminación (transeliminación) o hidrólisis de ácido alfa-D-galacturónico unido en la posición 1,4. La actividad de pectato liasa puede comprender catálisis de beta-eliminación (trans-eliminación) o hidrólisis de ácido galacturónico esterificado con metilo. La actividad de pectato liasa puede ser de acción exo o de acción endo. En un aspecto, la actividad de pectato liasa tiene actuación endo y actúa en sitios aleatorios dentro de una cadena del polímero para dar una mezcla de oligómeros. En un aspecto, la actividad de pectato liasa tiene actuación exo y actúa desde un extremo de una cadena de polímero y produce en monómeros o dímeros. La actividad de pectato liasa puede catalizar la escisión aleatoria de enlaces alfa-1,4-glicosíd¡cos en el ácido péctico (ácido poligalacturónico) mediante transeliminación por hidrólisis. La actividad de pectato liasa puede comprender una actividad igual o similar a la de la pectato liasa (EC 4.2.2.2), pol¡(1,4-alfa-D-galacturónido) liasa, poligalacturonato liasa (EC 4.2.2.2), pectina liasa (EC 4.2.2.10), poligalacturonasa (EC 3.2.1.15), exo-poligalacturonasa (EC 3.2.1.67), exo-poligalacturonato liasa (EC 4.2.2 9) o exo-poli-alfa-galacturonosidasa (EC 3.2.1.82). La actividad de pectato liasa puede comprender beta- eliminación (trans-eliminación) o hidrólisis de galactano en galactosa o galactooligómeros. La actividad de pectato liasa puede comprender beta-eliminación (trans-eliminación) o hidrólisis de una fibra vegetal. La fibra vegetal puede comprender fibra de algodón, fibra de cáñamo o fibra de lino.

El ácido nucleico aislado o recombinante puede codificar un polipéptido que tiene una actividad de pectato liasa que es termoestable. El polipéptido puede mantener una actividad de pectato liasa en condiciones que comprenden un intervalo de temperatura entre aproximadamente 37 °C y aproximadamente... [Seguir leyendo]

1. Un ácido nucleico aislado, sintético, o recombinante que comprende

(a) una secuencia de ácidos nucleicos que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, o superior o que es Idéntica en un 100 % a la SEC ID N°: 77, sobre una región de al menos 950, 1000, 1050, 1100, 1150 o más restos, o la longitud completa de un gen o de un transcrito, en la que el ácido nucleico codifica al menos un pollpéptldo que tiene una actividad de pectato ¡lasa;

(b) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia como se establece en la SEC ID N°: 77;

(c) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptldo que tiene una secuencia como se establece en las SEC ID N°: 78, SEC ID N°: 132 o SEC ID N°: 134;

(d) una secuencia que se híbrida en condiciones rigurosas con un ácido nucleico que comprende la SEC ID N°: 77, SEC ID N°: 131 o SEC ID N°: 133, en la que el ácido nucleico codifica un pollpéptldo que tiene una actividad de pectato liasa,

en la que las condiciones rigurosas Incluyen una etapa de lavado que comprende un lavado en 0,2X SSC a una temperatura de aproximadamente 65 °C durante aproximadamente 15 minutos;

(e) el ácido nucleico de (a), (b), (c) o (d) que codifica un pectato ¡lasa pero que carece de una secuencia señal, un dominio prepro, o una combinación de los mismos;

(f) el ácido nucleico de (a), (b), (c), (d) o (e) que codifica un pectato ¡lasa pero que también tiene una secuencia heteróloga; o

(g) una secuencia complementarla con (a), (b), (c), (d), (e), o (f).

2. Una sonda de ácido nucleico para Identificar un ácido nucleico que codifica un pollpéptldo con una actividad de pectato liasa, en el que la sonda comprende de aproximadamente 60 a 100, o de aproximadamente 60 a 150 bases consecutivas de una secuencia que comprende la SEC ID N°: 77, SEC ID N°: 131 o SEC ID N°: 133, en el que la sonda identifica al ácido nucleico mediante unión o hibridación en condiciones rigurosas,

en la que las condiciones rigurosas Incluyen una etapa de lavado que comprende un lavado en 0,1x SSC, SDS al 0,5 % a una temperatura de 68 °C durante aproximadamente 15 minutos.

3. Un ácido nucleico aislado, sintético o recomblnante

(A) que tiene una secuencia que comprende una modificación de la secuencia de la SEC ID N°: 131, en la que la modificación de la SEC ID N°: 131 comprende uno o más de los siguientes cambios:

los nucleótldos en los restos 352 a 354 son CAT o CAC,

los nucleótldos en los restos 544 a 546 son GTG, GTT, GTC, o GTA,

los nucleótldos en los restos 568 a 570 son TTG, TTA, CTT, CTC, CTA, o CTG

los nucleótldos en los restos 589 a 591 son GGT, GGC, GGA, o GGG,

los nucleótldos en los restos 622 a 624 son AAG o AAA,

los nucleótldos en los restos 655 a 657 son ATG,

los nucleótldos en los restos 667 a 669 son GAG o GAA,

los nucleótldos en los restos 763 a 765 son CGG, CGT, CGC, CGA, AGA, AGG,

los nucleótldos en los restos 787 a 789 son AAG o AAA,

los nucleótldos en los restos 823 a 825 son TAT o TAC,

los nucleótldos en los restos 925 a 927 son TGG, o

los nucleótldos en los restos 934 a 936 son GTT, GTG, GTC, o GTA; o

(B) que tiene la secuencia de la reivindicación 1(a), que comprende adicionalmente una modificación de secuencia, en el que la modificación de la secuencia comprende uno o más de los siguientes cambios:

los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 352 a 354 de la SEC ID N°: 131 se cambian a CAT o CAC,

los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 544 a 546 de la SEC ID N°: 131 se cambian a GTG, GTT, GTC, o GTA,

los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 568 a 570 de la SEC ID N°: 131 se cambian a TTG, TTA, CTT, CTC, CTA, o CTG

los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 589 a 591 de la SEC ID N°: 131 se cambian a GGT, GGC, GGA, o GGG,

los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 622 a 624 de la SEC ID N°: 131 se cambian a AAG o AAA,

los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 655 a 657 de la SEC ID N°: 131 se cambian a ATG, los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 667 a 669 de la SEC ID N°: 131 son GAG o GAA, los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 763 a 765 de la SEC ID N°: 131 se cambian a CGG, CGT, CGC, CGA, AGA, AGG,

los nucleótldos en la posición equivalente de los restos 787 a 789 de la SEC ID N°: 131 se cambian a AAG o AAA,

los nucleótidos en la posición equivalente de los restos 823 a 825 de la SEC ID N°: 131 se cambian a TAT o TAC,

los nucleótidos en la posición equivalente de los restos 925 a 927 de la SEC ID N°: 131 se cambian a TGG, o los nucleótidos en la posición equivalente de los restos 934 a 936 de la SEC ID N°: 131 se cambian a GTT, GTG, GTC, o GTA.

4. Un método para generar una variante de un ácido nucleico que codifica un pollpéptldo con una actividad de pectato ¡lasa que comprende

(A)

(a) proporcionar un ácido nucleico molde que comprende una secuencia como se establece en la SEC ID N°: 77; y

(b) modificar, suprimir o añadir, o una combinación de los mismos, uno o más nucleótidos en la secuencia molde para generar una variante del ácido nucleico molde,

en el que la variante tiene una Identidad de al menos un 90 % con la secuencia de ácidos nucleicos de la

reivindicación 1; o

(B)

(a) proporcionar un ácido nucleico que codifica un pollpéptldo con una actividad de pectato ¡lasa que comprende una secuencia como se establece en la reivindicación 1; y,

(b) Identificar un codón en el ácido nucleico de la etapa (a) y sustituirlo con un codón diferente que codifica el mismo aminoácido que el del codón sustituido, modificando de este modo los codones en un ácido nucleico que codifica una pectato liasa.

5. Un casete de expresión, un vector o un vehículo de clonación que comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia como se establece en la reivindicación 1 o 3.

6. Una célula hospedadora que comprende un casete de expresión, un vector o un vehículo de clonación como se establece en la reivindicación 5.

7. Un animal no humano transgénlco o planta transgénica o semilla transgénica que comprende una secuencia como se establece en la reivindicación 1 o 3, o que comprende un casete de expresión, un vector o un vehículo de clonación como se establece en la reivindicación 5.

8. Un método para producir un polipéptido recombinante que comprende las etapas de: (a) proporcionar un ácido nucleico, en el que el ácido nucleico comprende una secuencia como se establece en la reivindicación 1 o 3; y (b) expresar el ácido nucleico de la etapa (a) en condiciones que permiten la expresión del polipéptido, produciendo de este modo un polipéptido recombinante, en el que opcionalmente el método es para sobreexpresión del polipéptido mediante el uso de un promotor de actividad elevada, un vector dicistrónico o mediante la amplificación genética del vector.

9. Un polipéptido aislado, sintético o recombinante

(a) que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, o superior o que es idéntico en un 100 % a la SEC ID N°: 78, sobre una región de al menos 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650 o más restos, o la longitud completa y en el que el polipéptido tiene actividad de pectato liasa,

(b) codificado por un ácido nucleico que tiene una secuencia como se establece en la reivindicación 1 o 3,

(c) el polipéptido de (a) o (b), pero que carece de una secuencia señal, un dominio prepro, o una combinación de los mismos; o

(d) el polipéptido de (a), (b) o (c), pero que también tiene una secuencia heteróloga; en el que el polipéptido has actividad de pectato liasa; o

(e) el polipéptido de (a), (b), (c), o (d), en el que el polipéptido comprende al menos un sitio de glicosilación o está glicosilado.

10. Un polipéptido aislado, sintético o recombinante

(A) que tiene una secuencia que comprende una modificación de la secuencia de la SEC ID N°: 132, en el que la modificación de la SEC ID N°: 132 comprende una o más de las siguientes mutaciones: la alanina en la posición del aminoácido 118 es histidina, la alanina en la posición del aminoácido 182 es valina, la treonina en la posición del aminoácido 190 es leucina, la alanina en la posición del aminoácido 197 es glicina, la serina en la posición del aminoácido 208 es lisina, la treonina en la posición del aminoácido 219 es metionina, la treonina en la posición del aminoácido 223 es ácido glutámico, la serina en la posición del aminoácido 255 es arginina, la serina en la posición del aminoácido 263 es lisina, la asparagina en la posición del aminoácido 275 es tirosina, la

tirosina en la posición del aminoácido 309 es triptófano, o, la serina en la posición del aminoácido 312 es valina; o

(B) que tiene la secuencia de la reivindicación 9 y que comprende una modificación de la secuencia, en el que la modificación de la secuencia comprende uno o más de los siguientes cambios:

el aminoácido en la posición equivalente de la alanina en el resto 118 de la SEC ID una histidina,

el aminoácido en la posición equivalente de la alanina en el resto 182 de la SEC ID una valina,

el aminoácido en la posición equivalente de la treonina en el resto 190 de la SEC ID una leucina,

el aminoácido en la posición equivalente de la alanina en el resto 197 de la SEC ID una glicina,

el aminoácido en la posición equivalente de la serina en el resto 208 de la SEC ID N°: lisina,

el aminoácido en la posición equivalente de la treonina en el resto 219 de la SEC ID una metionina,

el aminoácido en la posición equivalente de la treonina en el resto 223 de la SEC ID una ácido glutámico,

el aminoácido en la posición equivalente de la serina en el resto 255 de la SEC ID N°: arginina,

el aminoácido en la posición equivalente de la serina en el resto 263 de la SEC ID N°: lisina,

el aminoácido en la posición equivalente de la asparagina en el resto 275 de la SEC ID N°: 132 se cambia por una tirosina,

el aminoácido en la posición equivalente de la tirosina en el resto 309 de la SEC ID N°: 132 se cambia por un triptófano, o,

el aminoácido en la posición equivalente de la serina en el resto 312 de la SEC ID N°: 132 se cambia por una valina.

11. Un heterodímero o un homodímero que comprende un polipéptido como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10.

12. Un polipéptido inmovilizado, en el que el polipéptido comprende una secuencia como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10.

13. Un anticuerpo aislado, sintético o recombinante que se une de forma específica a un polipéptido como se establece en la reivindicación 9 o 10.

14. Un método para hidrolizar, licuar, retirar, descomponer o alterar una composición que comprende pectina, pectato (ácido poligalacturónico), homogalacturonano, ramnogalacturonano o pared de célula vegetal que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar un polipéptido que tiene una actividad de pectato liasa como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10;

(b) proporcionar una composición que comprende una pectina, un pectato, homogalacturonano, ramnogalacturonano o pared de célula vegetal; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) con la composición de la etapa (b) en condiciones en las que el polipéptido se hidroliza, licúa, retira, descomponen o altera dicha composición.

15. Una composición que comprende un polipéptido como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10, o un ácido nucleico como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3.

16. Un método para lavar un objeto que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar una composición que comprende un polipéptido que tiene una actividad de pectato liasa como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10;

(b) proporcionar un objeto; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y el objeto de la etapa (b) en condiciones en las que la composición puede lavar el objeto.

17. Un método para limpieza de material de fibra, hilo, textil, tejido o celulósico que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar un polipéptido que tiene una actividad de pectato liasa como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10;

(b) proporcionar una fibra, un hilo, un textil, un tejido o un material celulósico; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y el material de fibra, hilo, textil, tejido o celulósico de la etapa (b) en condiciones en las que la pectato liasa puede limpiar el material de fibra, hilo, textil, tejido o celulósico.

18. Un método para mejorar la extracción de aceite de un material vegetal rico en aceite que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar un polipéptido que tiene una actividad de pectato ¡lasa como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10;

(b) proporcionar un material vegetal rico en aceite; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y el material vegetal rico en aceite.

19. Un método para preparar un zumo, jarabe, puré o extracto de fruta o vegetal que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar un polipéptido que tiene una actividad de pectato ¡lasa como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10;

(b) proporcionar una composición o un líquido que comprende un material de fruta o vegetal; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y la composición, preparando de este modo el zumo, jarabe, puré o extracto de fruta o vegetal.

20. Un método para tratar un papel, un producto de papel, o una pasta de madera que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar un polipéptido que tiene una actividad de pectato liasa como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10;

(b) proporcionar una composición que comprende un papel, un producto de papel, o una pasta de madera; y

(c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) y la composición de la etapa (b) en condiciones en las que la pectato liasa puede tratar el papel, producto de papel, pasta de papel, o pasta de madera.

21. Un proceso de biolimpieza que comprende las siguientes etapas:

(a) proporcionar una pectato liasa como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10;

(b) proporcionar un material que comprende pectina, ácido poligalacturónico (pectato), homogalacturonano, ramnogalacturonano o pared de célula vegetal;

(c) poner en contacto la pectato liasa de (a) con el material de (b) en condiciones alcalinas en un tampón de bicarbonato o equivalente.

22. El ácido nucleico aislado, sintético o scombinante de la reivindicación 1, en la que el ácido nucleico comprende laSEC ID N°: 133.

23. El polipéptido aislado, sintético o scombinante de la reivindicación 9, en la que el polipéptido comprende la SEC ID N°: 134.

24. El polipéptido aislado, sintético o scombinante de la reivindicación 9, en la que el polipéptido comprende la SEC ID N°: 132.

25. Una formulación para tratar un material, comprendiendo dicha formulación al menos un polipéptido de la reivindicación 9 o 10 a una dosificación seleccionada entre:

i. entre 1 y 100 g por ton de material a tratar;

¡i. entre 1 pg y 100 pg por g de material a tratar;

¡ü. entre 0,5 mg y 50 mg por 0,45 kg de material a tratar

¡v. una dosificación que comprende una potencia enzimàtica entre 100 y 40.000 unidades/ml.