Usos de BNIPXL-beta en la canicie prematura.

Un polipeptido que comprende una secuencia que presenta al menos un 90% de identidad con toda o parte de lasecuencia SEC ID No:

1, para una utilizacion terapeutica en el tratamiento o prevencion de la canicie prematura enseres humanos, comprendiendo dicha parte al menos 30 aminoacidos.

Usos de BNIPXL-beta en la canicie prematura Anular o hacer que puedan atenuarse los efectos del envejecimiento es una preocupación en constante aumento. En este contexto, ocultar el cabello blanco, considerado poco agraciado, mediante lavados con champú con tratantes colorantes es, a partir de ahora, una actividad muy difundida. Por tanto, es obvio que, incluso si esta técnica permite anular eficazmente los efectos del fenómeno, no está destinada a anular las causas. De hecho, esta solución es temporal y debe repetirse con frecuencia.

El blanqueamiento del cabello (canicie) se debe a una desaparición progresiva de melanocitos del folículo piloso (Commo S, Gaillard, O. & Bernard, B.A, 2004) . Este proceso afecta al mismo tiempo a los melanocitos de la unidad de pigmentación situados en la base del folículo y responsables directos de la pigmentación de la fibra, así como a los melanocitos progenitores situados en parte distal de la vaina externa del folículo piloso que sirven como reservorio a partir del cual se renueva la unidad de pigmentación en cada ciclo piloso (Commo, S. & Bernard, B.A. 2000) .

Aunque esta desaparición progresiva de los melanocitos parece estar relacionada con la ausencia de la expresión de la enzima dopacromo tautomerasa (Commo S., Gaillard O., Thibaut S. & Bernard B.A., 2004, patentes FR2840530, FR2840531, FR2863484) , los autores de la invención han elegido explorar la aparición del cabello blanco, o canicie, bajo un ángulo totalmente nuevo, el de la genética, investigando la identificación, mediante una estrategia genética global, de otros genes eventualmente relacionados con la canicie prematura.

En efecto, explorar la canicie desde el punto de vista genético permite detectar con profundidad los mecanismos de la despigmentación. Esto también permite identificar los genes que están implicados en la canicie. Esta identificación abre la puerta a numerosas aplicaciones, en el campo del cuidado del cabello, tanto cosméticas como terapéuticas o de diagnóstico.

Con esta finalidad, los autores de la invención han elegido centrar sus investigaciones en primer lugar sobre la canicie prematura (CP) o aparición de cabello blanco en etapas tempranas de la vida, cuyo carácter hereditario se conoce y que está relacionado con determinadas enfermedades autoinmunitarias. Para explorar la canicie desde un punto de vista genético, se ha realizado un estudio de segregación de ADN en familias donde la canicie aparece en etapas tempranas de la vida. Para garantizar las mejores probabilidades de éxito para esta búsqueda de genes, el fenotipo CP se atribuyó a aquellos individuos que presentaban cabellos blancos antes de 25 años y en los que la mitad de su cabellera era gris a los 30 años. Para participar en un estudio de relación se incluyeron doce familias.

Los resultados de estos trabajos han permitido a los autores de la invención definir, en primer lugar, zonas cromosómicas y/o genómicas que comprenden genes implicados en la canicie con una fuerte probabilidad. De este modo se han identificado cinco loci en los cromosomas 3, 5 y 11 (solicitudes de patentes FR2842105 y

WO04/007764) y en los cromosomas 6 y 9 (solicitudes de patentes FR2842104, FR2853532, FR2865217 y WO04/007742) .

Entre los genes asociados con la canicie prematura, el gen de DDX31 (GI: 20336296; nº de acceso NM_022779) se ha propuesto como un supuesto gen relacionado con la canicie prematura, situado en 9q34 y descrito en las 45 solicitudes de patentes de L'Oréal FR2853532 y FR2865217. El gen DDX31 es una probable helicasa de ARN dependiente de ATP, que pertenece a la familia de las helicasas con motivo DEAD (“DEAD-box protein 31”) .

Para explorar más adelante la función de DDX31 en los procesos de la canicie prematura, los autores de la invención han buscado identificar, mediante una estrategia del sistema del doble híbrido de levaduras, los 50 homólogos proteicos eventuales susceptibles de interaccionar con DDX31.

De manera sorprendente e inesperada, los autores de la invención han descubierto que la BNIPXL-beta (proteína 2 que interacciona con BCI2/proteína de 19 kDa del adenovirus E1B) era una presa de DDX31, preferentemente de la forma larga de DDX31. La puntuación de confianza en la interacción es particularmente buena.

Las diferentes funciones de la BNIPXL beta aún no se conocen bien. Esta proteína se produce por empalme alternativo de KIAA0367 (alias: molécula que contiene el motivo BCH en la región C terminal 1, molécula que contiene el motivo BNIP2 en la región 1 C terminal; N º de acceso Q58A63, GI: 125987727) .

Por homología de dominios (dominio CRAL-TRIO o Sec14; el dominio se presenta en BNIP2) , se supone que la BNIPXL-beta está implicada en el transporte y metabolismo de fosfolípidos, que tiene una función pro-apoptótica relacionada con una interacción con bcl2, y que participa en la circulación celular; podría desempeñar una función en la formación de protusiones membranosas (Machida et al, 2006; Zhou et al, 2005; Shang et al 2003; Qin et a., 2003; Belcredito et al., 2001; Sirokmany et al., 2006; Mousley et al., 2007) .

Por tanto, la interacción entre DDX31 y BNIPXL-beta es aparentemente muy importante en la circulación vesicular, debido a su papel en la migración y transferencia de melanosomas y por tanto en la implicación en la canicie particularmente la canicie prematura.

En la presente solicitud, los términos que se indican a continuación tienen más particularmente el siguiente significado:

Grado de identidad: el grado de identidad entre dos secuencias (de proteínas o de ácidos nucleicos) se determina particularmente alineando las dos secuencias para maximizar los puntos de concordancia minimizando al mismo tiempo los espacios (“gap”) ; se obtiene dividiendo el número de aminoácidos o de ácidos nucleicos comunes entre la longitud de las dos secuencias más largas. ARNi (en inglés RNAi) : ARN de interferencia: una molécula de ARN que puede dirigir una secuencia particular en una molécula de ARN y conducir la escisión de este ARN a un sitio determinado dentro de la secuencia diana. La molécula de ARN que puede escindir el ARN de interferencia se denomina, por extensión, ARN

interferente o ARNi. Cuando esta reacción se produce en el interior de una célula y cuando el ARN escindido es ARN mensajero (ARNm) , la escisión de la molécula de ARNm conduce después a la degradación de la molécula, impidiendo así cualquier etapa ulterior, tal como la traducción del ARNm en proteína. Según el tipo de ARNi, la secuencia diana es la secuencia complementaria del ARN interferente (particularmente ARNip) o una secuencia casi complementaria del ARN interferente, no obstante con algunas posiciones no concordantes (particularmente ARNmi) . ARNip: ARN interferente pequeño, un anglicismo que significa ARN interferente de pequeño tamaño. Se trata de una secuencia de ARN bicatenario que comprende aproximadamente de 21 a 23 nucleótidos (Dykxhoorn et al, Nature Reviews, 2003, vol 4, p.457) . Los ARNip pueden provenir de la escisión de ARN bicatenario de tamaño más grande por una proteína denominada dicer. Después, los ARNip así producidos se integran en un complejo de inhibición multiproteico inducido por el ARN (complejo silenciador inducido por RISC-ARN) . El ARNm diana se escinde en un solo sitio en medio de la región dúplex formada entre el ARNip (que sirve de guía) y el ARNm diana, de 10 nucleótidos del extremo 5 'del ARNip.

Para obtener los ARNip, en una célula, pueden contemplarse varios métodos.

1. es posible introducir directamente en la célula los ARNip obtenidos por síntesis química; en este caso no se realiza la reacción de dicer.

2. también puede contemplarse introducir en la célula fragmentos de ARN bicatenario de gran tamaño que después escinde en ARNip la proteína dicer.

3. es posible introducir o expresar en la célula un dúplex de ARN en horquilla, por ejemplo un ARNhp (por ARN en horquilla pequeño o corto) , que a continuación escinde la proteína dicer en ARNip.

Por fragmento polinucleotídico se entiende cualquier molécula resultante del encadenamiento lineal de al menos dos nucleótidos, pudiendo ser esta molécula monocatenaria, bicatenaria o tricatenaria. También puede tratarse de una molécula de ADN bicatenaria, de un ADN monocatenario, de un ARN, de un dúplex ARN monocatenario -ADN, de un triplex ADN-ARN o de cualquier otra combinación. El fragmento polinucleotídico puede estar aislado de manera natural, recombinante o sintética. Cuando el fragmento polinucleotídico comprende hebras complementarias, la complementariedad no es necesariamente perfecta, pero la afinidad entre las diferentes... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende una secuencia que presenta al menos un 90% de identidad con toda o parte de la secuencia SEC ID Nº: 1, para una utilización terapéutica en el tratamiento o prevención de la canicie prematura en 5 seres humanos, comprendiendo dicha parte al menos 30 aminoácidos.

2. Una molécula que comprende una secuencia ARNi que tiene al menos un 90% de identidad con toda o parte de la secuencia SEC ID Nº: 2 para una utilización terapéutica en el tratamiento o prevención de canicie prematura en seres humanos, comprendiendo dicha parte al menos 18 nucleótidos.

3. Un procedimiento de selección de moléculas que modulen la expresión del gen que codifica el polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1, para identificar un agente para una utilización con fines cosméticos o terapéuticos, en el campo de la pigmentación del cabello, que comprende las siguientes etapas:

-poner la molécula a ensayar en presencia del gen que codifica BNIPXL-beta, en condiciones que permitan la expresión de dicho gen en ausencia de la molécula a ensayar; y -detectar una variación en el nivel de expresión de dicho gen, debida a la presencia de dicha molécula a ensayar.

4. Un procedimiento según la reivindicación 3, en el que dicha modulación de la expresión es una inhibición de la transcripción o de la traducción del gen que codifica el polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1.

5. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 3 a 4, en el que las moléculas a ensayar son proteínas, ARNi,

ribozimas o ARN antisentido que dirigen el gen que codifica el polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC 25 ID Nº: 1.

6. Un procedimiento de selección de moléculas que modulen la actividad del polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1, para la identificación de un agente para una utilización con fines cosméticos o terapéuticos, en el campo de la pigmentación del cabello, que comprende las siguientes etapas:

-poner la molécula a ensayar en presencia del polipéptido BNIPXL-beta, en condiciones que permitan la detección de la actividad de dicho polipéptido en ausencia de la molécula a ensayar; y -detectar una variación en la actividad de dicho polipéptido, debida a la presencia de la molécula a ensayar.

7. Un procedimiento según la reivindicación 6, en el que las moléculas a ensayar son anticuerpos dirigidos contra el polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1 o una parte del mismo.

8. La utilización del agente que module la expresión del gen que codifica el polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1, con fines cosméticos, en el campo de la pigmentación para la prevención o el tratamiento de la canicie, en el que dicho agente es una molécula según la reivindicación 2.

9. Un agente que module la expresión del gen que codifica el polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1 para una utilización terapéutica en el campo de la pigmentación del cabello, en el que dicho agente es una molécula según la reivindicación 2.

10. La utilización de al menos un fragmento polinucleotídico que comprende al menos 18 nucleótidos consecutivos cuya secuencia corresponde a todo o a parte del gen que codifica el polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1 o del transcrito BNIPXL-beta que tiene la SEC ID Nº: 2, con fines cosméticos, en el campo de la pigmentación, para la prevención o el tratamiento de la canicie.

11. Un procedimiento para el diagnóstico de una predisposición a la canicie prematura en un individuo, que comprende las siguientes etapas:

i) Dosificación del nivel de expresión del transcrito BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 2 a partir de 55 una muestra corporal procedente de dicho individuo; ii) Comparación con un nivel de referencia, en el que el nivel de referencia es el nivel de expresión del transcrito BNIPXL-beta en un individuo no afectado por canicie prematura.

12. Un procedimiento de selección de moléculas que modulen la interacción entre un polipéptido BNIPXL-beta que tiene la secuencia SEC ID Nº: 1 y un polipéptido derivado de la traducción del gen DDX31 que permita la identificación de un agente para una utilización con fines cosméticos o terapéuticos en el campo de la pigmentación del cabello.

13. Un procedimiento según la reivindicación 12, en el que dicha modulación es una modificación de la constante de 65 asociación entre los dos polipéptidos.