Uso de N-miristoiltransferasa en tejido no tumoral para el diagnóstico de cáncer.

Un método para la detección de cáncer colorrectal que comprende la etapa de:

en una muestra de tejido notumoral obtenida de un sujeto del que se sospecha que tiene cáncer, detectar un aumento del nivel de (i)expresión de N-miristoiltransferasa (NMT) o (ii) actividad N-miristoiltransferasa (NMT), en relación con unvalor control en el que la muestra de tejido no tumoral es sangre o células de médula ósea.

Uso de N-miristoiltransferasa en tejido no tumoral para el diagnóstico de cáncer

Campo de la invención La presente invención se refiere en general a métodos de diagnóstico para la detección del cáncer.

Antecedentes de la invención El cáncer es una de las causas principales de muerte prematura a nivel mundial. Además, el cáncer colorrectal es la segunda causa principal de muerte por cáncer en el mundo occidental. El cáncer colorrectal puede curarse si se diagnostica a tiempo. Uno de los protocolos de tratamiento principales para cáncer colorrectal es la cirugía. Sin terapia adicional, la cirugía cura normalmente el cáncer de colon de Duke A que invade la submucosa y la enfermedad de Duke B1 que invade la capa muscular (Cohen et al., En: DeVita et al. (eds.) , Cancer Principles and Practice of Oncology, 5ª ed., págs. 1144-1197. Nueva York: Lippincott-Raven.) .

El enfoque de pronóstico primario para identificar diferencias entre pacientes en estadios tempranos de la enfermedad es el sistema tumor-nodo-metástasis (TNM) (Graziano et al. (2003) Ann Oncol. 14, 1026-1038) . Sin embargo, el desenlace de supervivencia varía entre pacientes con estadios de enfermedad patológicos similares. Ha habido demandas crecientes para especificar los marcadores moleculares de cáncer colorrectal más agresivo con el fin de identificar la enfermedad con mucha anticipación y prescribir una terapia apropiada para los pacientes. En respuesta, son necesarias nuevas estrategias terapéuticas para combatir el cáncer colorrectal.

Se conoce que la actividad N-miristoiltransferasa (NMT) es altamente elevada en el cáncer colorrectal (Magnuson et al. 1995, J. Natl. Cancer Inst. 87, 1630-1635) . La NMT es una enzima que cataliza la miristoilación de proteínas implicadas en diversas funciones biológicas incluyendo oncogénesis (Rajala et al. (2000) Mol. Cell. Biochem. 204, 135-155; Selvakumar et al., (2002) Int. J. Mol. Med. 10, 493-500) .

La actividad N-miristoiltransferasa está aumentada en tumores colónicos de ratas en comparación con los de mucosa colónica que parece normal (Magnuson et al. (1985) J. Natl. Cancer Inst. 87, 1630-1635.) . De manera interesante, la actividad NMT en la mucosa que parece normal de ratas que portan cáncer de colon era similar a la actividad encontrada en la mucosa colónica de ratas control, sugiriendo que la actividad NMT elevada está restringida al sitio tumoral. Se observa actividad NMT superior en tumores colónicos de ratas en comparación con la mucosa normal o que parece normal correspondiente. Además, se observó un aumento de varias veces en la actividad NMT en comparación con la mucosa que parece normal adyacente, en pólipos y tumores en estadio B1 ubicados en el colon descendente cerca del recto.

Además del modelo de rata, también se observó actividad y expresión de NMT elevadas en adenocarcinoma humano en comparación con las de mucosa que parece normal (Magnuson et al., (1995) J. Natl. Cancer Inst. 87. 1630-1635: Raju et al., (1997) Exp. Cell Res. 235, 145-154.) . La actividad NMT en mucosa que parece normal es similar a la de la enfermedad de Crohn y el vólvulo, indicando que la actividad NMT elevada es específica del cáncer y no es una respuesta no específica a condiciones inflamatorias o lesiones no cancerosas. Rajala et al. (Cancer 2000; 88 (9) :1992-1999) mostraron una expresión aumentada en NMT en tejido de vesícula de pacientes con cáncer de vesícula.

Sin embargo, el trabajo previo no ha establecido NMT como marcador para el cáncer, dada la limitación de que la expresión y actividad elevadas de NMT en la región tumoral no es accesible para fines de pronóstico/diagnóstico hasta que se realiza una colonoscopia y está disponible una muestra de tejido para el análisis de proteína.

El documento WO 2004/016758 concedido a Madden (Genzyme) da a conocer un método para el diagnóstico de glioma. El método comprende detectar la expresión de un producto, tal como N-miristoiltransferasa 1 (NMT1) , en una muestra de tejido cerebral de la que se sospecha que es neoplásica y comparar la expresión de ese producto con la expresión de dicho producto en tejido cerebral normal (control) , en el que la sobreexpresión de dicho producto en la primera muestra de tejido en comparación con el control es indicativa de que el primer tejido es neoplásico.

Existe la necesidad de tecnologías no invasivas o mínimamente invasivas que puedan usarse para detectar cáncer.

Sumario de la invención Un objeto de la presente invención es proporcionar un método para la detección del cáncer.

En un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para la detección de cáncer que comprende las etapas de obtener una muestra de tejido no tumoral de un sujeto del que se sospecha que tiene cáncer; y detectar un aumento del nivel de N-miristoiltransferasa (NMT) o actividad N-miristoiltransferasa (NMT) en relación con un valor control.

En una realización adicional, se proporciona un método para la detección de cáncer colorrectal que comprende las etapas de obtener una muestra de sangre de un sujeto del que se sospecha que tiene cáncer; separar las células mononucleares de sangre periférica de la muestra de sangre y detectar N-miristoiltransferasa o actividad Nmiristoiltransferasa en dichas células mononucleares de sangre periférica.

En un aspecto adicional, la presente descripción proporciona un kit para la detección de cáncer, que emplea el método inventivo. El kit comprende un anticuerpo anti-N-miristoiltransferasa e instrucciones para su uso. Adicionalmente, se da a conocer un uso de un anticuerpo anti-N-miristoiltransferasa (NMT) , para la detección de NMT elevada en una muestra de tejido no tumoral para el diagnóstico de cáncer.

Adicionalmente, una realización de la invención proporciona el uso de un anticuerpo anti-N-miristoiltransferasa (NMT) para la detección de NMT elevada en una muestra de tejido no tumoral para el diagnóstico de cáncer. El kit puede usarse en la detección de cánceres epiteliales, por ejemplo, cáncer colorrectal. La muestra de tejido no tumoral puede ser, por ejemplo, células mononucleares de sangre periférica.

Además, se proporciona un método para la detección de cáncer colorrectal que comprende las etapas de obtener una muestra de médula ósea de un sujeto del que se sospecha que tiene cáncer; separar las células de médula ósea de la muestra y detectar un aumento de N-miristoiltransferasa o actividad N-miristoiltransferasa en las células de médula ósea.

Otros aspectos y características de la presente invención resultarán evidentes para los expertos habituales en la técnica tras la revisión de la siguiente descripción de realizaciones específicas de la invención junto con las figuras adjuntas.

Breve descripción de los dibujos Ahora se describirán realizaciones de la presente invención, a modo de ejemplo solamente, con referencia a las figuras adjuntas.

La figura 1 ilustra la actividad NMT en células mononucleares de sangre periférica (CMSP) y células de médula ósea (CMO) de ratas normales y que portan tumor de colon.

La figura 2 muestra los resultados de análisis de inmunotransferencia de tipo Western de células mononucleares de sangre periférica y células de médula ósea.

La figura 3 ilustra el análisis inmunohistoquímico de células de sangre periférica de ratas control, que carecen de tinción de NMT.

La figura 4 ilustra el análisis inmunohistoquímico de células mononucleares de sangre periférica de ratas que portan tumor, mostrando tinción fuerte como evidencia de expresión de NMT intensa.

La figura 5 muestra el análisis inmunohistoquímico de tinción de NMT en médula ósea de rata normal.

La figura 6 muestra el análisis inmunohistoquímico de tinción de NMT en médula ósea de rata con tumor colónico.

La figura 7 muestra la tinción de NMT negativa de linfocitos.

La figura 8 muestra la tinción de NMT negativa en monocitos de frotis de sangre periférica en sujetos control.

La figura 9 muestra un frotis de sangre periférica de un paciente con cáncer de colon, que ilustra la tinción positiva de macrófagos.

La figura 10 es un frotis de sangre periférica de un paciente con cáncer de colon, que ilustra la tinción positiva de neutrófilos, linfocitos y macrófagos.

La figura 11 muestra la tinción de NMT en médula ósea de sujetos control.

La figura 12 muestra tinción nuclear intensa y algo de tinción citoplásmica para NMT en médula ósea de un paciente con cáncer de colon.

Descripción detallada En general, la presente invención proporciona un método para la detección de cáncer que... [Seguir leyendo]

1. Un método para la detección de cáncer colorrectal que comprende la etapa de: en una muestra de tejido no tumoral obtenida de un sujeto del que se sospecha que tiene cáncer, detectar un aumento del nivel de (i) expresión de N-miristoiltransferasa (NMT) o (ii) actividad N-miristoiltransferasa (NMT) , en relación con un valor control en el que la muestra de tejido no tumoral es sangre o células de médula ósea.

2. El método de la reivindicación 1, en el que la muestra de tejido no tumoral comprende células mononucleares de sangre periférica.

3. El método de la reivindicación 2, en el que la muestra de tejido no tumoral es una muestra de sangre y el

método además comprende separar las células mononucleares de sangre periférica de la muestra de 10 sangre, y en el que la detección se realiza sobre dichas células mononucleares de sangre periférica.

4. El método de la reivindicación 2, en el que la muestra de tejido no tumoral es una muestra de médula ósea y el método además comprende separar las células de médula ósea de la muestra, en el que la detección se realiza sobre dichas células de médula ósea.

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el nivel de NMT se detecta usando 15 análisis inmunohistoquímico.

6. El método de la reivindicación 5, en el que el nivel de NMT se detecta cuantificando la unión entre NMT y un anticuerpo anti-NMT.

7. El método de la reivindicación 6, en el que el anticuerpo anti-NMT es un anticuerpo policlonal.

8. El método de la reivindicación 6, en el que el anticuerpo anti-NMT es anti NMT-1.

9. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la actividad NMT se detecta usando una reacción de miristoilación de proteína con miristoil-CoA.

10. Uso de un anticuerpo anti-N-miristoiltransferasa según el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a9.