Una vacuna que comprende un antígeno conjugado con anticuerpos anti-CD40 de valencia baja.

Una composición de vacuna que comprende un conjugado aislado de un anticuerpo CD40 y al menos unantígeno específico de tumor o asociado a un tumor,

en la que dicho conjugado consiste en un complejo en el que elanticuerpo CD40 y el antígeno tumoral se reticulan con un agente de reticulación y la valencia del anticuerpo delcomplejo consiste en una o dos moléculas de anticuerpo CD40.

Una vacuna que comprende un antígeno conjugado con anticuerpos anti-CD40 de valencia baja La invención se refiere a un conjugado que comprende un anticuerpo y un antígeno, en el que dicho conjugado tiene una baja valencia de anticuerpo, y incluye métodos para preparar dicho conjugado.

El sistema inmunológico está formado por linfocitos que son capaces de reconocer antígenos específicos. Los linfocitos B reconocen antígenos en su conformación nativa a través de receptores de inmunoglobulina de la superficie, y los linfocitos T reconocen los antígenos de las proteínas que se presentan como péptidos junto con moléculas del propio organismo conocidas como antígenos de histocompatibilidad mayor (MHC) , o antígenos de leucocitos humanos (HLA) en los seres humanos, presentes sobre la superficie de las células presentadoras de antígenos. Las células presentadoras de antígenos aparecen en diferentes formas y pueden distinguirse en células presentadoras de antígenos "clásicas", ejemplificadas por macrófagos y células dendríticas, y células presentadoras de antígeno "no clásicas", que incluyen linfocitos B. Los linfocitos T pueden también subdividirse en "linfocitos T citotóxicos", que son capaces de matar a las células diana infectadas por virus, y linfocitos "T auxiliares". Los linfocitos T auxiliares tienen una función reguladora y son capaces de ayudar a los linfocitos B para que produzcan anticuerpos específicos, o ayudan a los macrófagos a matar patógenos intracelulares.

Los anticuerpos pueden existir en varias formas, por ejemplo, existen las clases principales IgM, IgG, IgA, IgD e IgE, cada una de las cuales se diferencia en las funciones "efectoras", con las que se determina el efecto del anticuerpo. Las funciones efectoras incluyen la fijación del complemento (que produce la estimulación de respuestas inflamatorias) que puede activarse tras la formación de complejos inmunológicos de antígeno y anticuerpo por IgM, 20 IgA e IgG. Otro ejemplo de una función efectora es la activación de células cebadas por un antígeno, que se realiza mediante reticulación de IgE de la superficie con las células cebadas, anclado mediante la ocupación del receptor de alta afinidad FcR-épsilon-I de IgE (un receptor para la región Fc de IgE) . Para algunas de las clases de anticuerpos existen subclases (por ejemplo, IgG en el ser humano está compuesto por cuatro subclases diferentes, conocidas como IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) . Las subclases de IgG se diferencian notablemente en su abundancia y sus funciones efectoras.

Uno de los avances más importantes en la historia de la medicina es la aparición de las vacunas, que se emplean para proteger frente a una amplia variedad de enfermedades infecciosas. También existen vacunas en desarrollo para el tratamiento de diversas enfermedades no infecciosas, tales como enfermedades autoinmunológicas y neurodegenerativas y diversos cánceres. Muchas vacunas se preparan con patógenos inactivados o atenuados que 30 se inyectan en un individuo. El individuo inmunizado responde produciendo una respuesta humoral (anticuerpo) y celular (células T citolíticas, CTL) . Por ejemplo, algunas vacunas de la gripe se preparan inactivando el virus mediante un tratamiento químico con formaldehído; de forma parecida, la vacuna de la polio de Salk comprende virus completos inactivados con propionolactona. Para muchos patógenos (en particular, bacterias) , una inactivación química o con calor, aunque puede producir inmunógenos de vacuna que confieren inmunidad protectora, también 35 provocan efectos secundarios, tales como fiebre y reacciones en el sitio de la inyección. En el caso de las bacterias, los organismos inactivados tienden a ser tan tóxicos que los efectos secundarios han limitado la aplicación de estos inmunógenos de vacuna brutos (por ejemplo, la vacuna de pertussis celular) . Por tanto, muchas vacunas modernas se preparan a partir de antígenos protectores del patógeno, separados mediante purificación o clonación molecular a partir de materiales que producen efectos secundarios. Estas últimas vacunas se conocen como "vacunas de subunidades".

El desarrollo de vacunas de subunidades (por ejemplo, vacunas en las que el inmunógeno es una proteína purificada) ha sido el centro de investigaciones importantes en los últimos años. La aparición de nuevos patógenos (tales como VIH y estreptococos del grupo B) y el crecimiento de la resistencia a antibióticos han creado la necesidad de desarrollar nuevas vacunas y de identificar más moléculas candidatas útiles para el desarrollo de 45 vacunas de subunidades. De forma similar, el descubrimiento de nuevos antígenos de vacunas a partir de estudios genómicos y proteómicos está permitiendo el desarrollo de nuevos candidatos a vacunas de subunidades, en particular contra patógenos bacterianos y cánceres. Sin embargo, aunque las vacunas de subunidades tienden a evitar los efectos secundarios de las vacunas de patógenos muertos o atenuados, su estado "puro" las ha separado de las "señales de peligro" que a menudo están asociadas a las vacunas de organismos completos, y las vacunas 50 de subunidades no siempre tienen la inmunogenicidad adecuada. Muchos candidatos a vacunas de subunidades han fallado en ensayos clínicos en los últimos años, que en otra circunstancia podrían haber tenido éxito si hubiera estado disponible un adyuvante adecuado que potenciase la respuesta inmunológica frente al antígeno purificado. Un adyuvante es una sustancia o un procedimiento que potencia las respuestas inmunológicas específicas frente a antígenos modulando la actividad de las células inmunológicas.

Los inventores describen un adyuvante con mayor eficacia. Un adyuvante es una sustancia o un procedimiento que potencia las respuestas inmunológicas específicas frente a antígenos modulando la actividad de las células inmunológicas. Los ejemplos de adyuvantes incluyen, solo como ejemplo, adyuvante de Freund, dipéptidos de muramilo, y liposomas. Los documentos WO97/38711, US02/0136722 y US 02/0086026 describen, entre otras cosas, conjugados de CD28:antígeno y CD40:antígeno, que actúan como adyuvantes y producen respuestas 60 inmunológicas potenciadas dirigidas a la parte del antígeno del conjugado.

Los conjugados de CD28/CD40:antígeno pueden producirse mediante una serie de formas, y utilizan una serie de posibles agentes de reticulación. En los catálogos de Pierce Chemical Company Inc. y Molecular Probes Inc se describe una serie de agentes de reticulación y métodos de reticulación. Los métodos de conjugación preferidos emplean los denominados agentes de reticulación heterobifuncionales, que tienen cada uno diferentes grupos funcionales en cada extremo de la molécula, y así su uso puede evitar una reticulación directo entre antígenoantígeno, o una reticulación entre anticuerpo-anticuerpo. Sin embargo, a pesar de las ventajas de estos agentes de reticulación, en muchos casos siguen pudiéndose formar conjugados que contienen más de una molécula de anticuerpo, y más de una molécula de antígeno.

Por ejemplo, si se emplean sulfo-SMCC y SATA como agentes de reticulación, uno de los componentes del conjugado primero se maleimida utilizando sulfo-SMCC, y el otro tiene grupos sulfhidrilo unidos utilizando SATA. Tanto la maleimidación como la modificación de sulfhidrilo se producen sobre aminas primarias, de las cuales puede haber varias sobre el anticuerpo y el antígeno (restos amino-terminales (4 en cada molécula de Ig) , y cualquier resto lisina) . Por tanto, es posible que cualquier antígeno se una a más de una molécula de anticuerpo, y que cualquier molécula de anticuerpo se una a más de una molécula de antígeno. De esta manera pueden formarse grandes complejos de anticuerpo y antígeno unidos covalentemente. Los complejos formados durante la conjugación pueden caracterizarse utilizando una serie de parámetros diferentes:

i) tamaño global del conjugado (peso molecular) ;

ii) proporción de anticuerpo a antígeno (peso:peso) ;

iii) proporción de anticuerpo a antígeno (mol:mol) ;

iv) número medio de moléculas de anticuerpo en el conjugado; y

v) número medio de moléculas de antígeno en el conjugado.

Para cualquier antígeno de peso molecular conocido, todos estos parámetros pueden derivarse de (iv) y (v) . Sin embargo, puesto que los antígenos varían en tamaño, las relaciones entre estos valores variarán, y así las formas óptimas de conjugados variarán entre antígenos pequeños (péptidos) , intermedios (proteínas) y grandes (polisacáridos) .

A partir de experimentos in vitro se sabe que la señalización a través de CD40 y CD28 se potencia aumentando la valencia de la interacción. Así, para lograr una proliferación óptima... [Seguir leyendo]

1. Una composición de vacuna que comprende un conjugado aislado de un anticuerpo CD40 y al menos un antígeno específico de tumor o asociado a un tumor, en la que dicho conjugado consiste en un complejo en el que el anticuerpo CD40 y el antígeno tumoral se reticulan con un agente de reticulación y la valencia del anticuerpo del

complejo consiste en una o dos moléculas de anticuerpo CD40.

2. . Una composición según la reivindicación 1, en la que dicha composición comprende además un vehículo.

3. . Una composición según la reivindicación 2, en la que dicha composición comprende además un segundo adyuvante.

4. . Una composición según la reivindicación 1, en la que dicho antígeno es un antígeno de gangliósido.

5. . Una composición según la reivindicación 1, en la que dicho antígeno es una hormona o un receptor de hormona.

6. . Una composición según la reivindicación 5, en la que dicho antígeno es el receptor de N-metil-D-aspartato, o parte del mismo.