Polinucleótidos que codifican epítopos hTERT restringidos a HLA-B7 para su uso en la prevención y/o tratamiento de cáncer.

Un polinucleótido que codifica un epítopo hTERT (telomerasa transcriptasa inversa humana) restringido a HLA-B7elegido entre el grupo que consiste en:

a. MPRAPRCRA (p1),

b. APRCRAVRSL (p4),

c. APSFRQVSCL (p68),

d. RPAEEATSL (p277),

e. RPSFLLSSL (p342),

f. RPSLTGARRL (p351),

g. DPRRLVQLL (p444),

h. APRRLVQLL (p444*),

i. FVRACLRRL (p464),

j. LPGTTLTAL (p1107), y

k. LPSPKFTIL (p1123)

para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida aHLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

Polinucleótidos que codifican epítopos hTERT restringidos a HLA-B7 para su uso en la prevención y/o tratamiento de cáncer

Esta invención se refiere al campo de terapia antineoplásica, y a la identificación de péptidos inmunogénicos derivados de la telomerasa transcriptasa inversa humana (hTERT) . La presente invención se refiere a polinucleótidos que codifican epítopos hTERT restringidos a la molécula MHC clase I, análogos de los mismos y poliepítopos que contienen dichos epítopos y/o análogos para su uso en el tratamiento y/o prevención del cáncer. También se incluyen en la presente invención vectores y células que comprenden dichos polinucleótidos para su uso en el tratamiento y/o prevención del cáncer. La presente invención también se refiere a composiciones que comprenden polipéptidos hTERT, polinucleótidos correspondientes, vectores y células, para su uso en el tratamiento y/o prevención del cáncer.

A la luz de las deficiencias en los actuales enfoques terapéuticos antineoplásicos, la terapia antitumoral ha disfrutado de un interés renovado. Los recientes estudios han potenciado nuestra comprensión de las respuestas inmunes antimelanoma asociadas con la regresión tumoral. Colectivamente, estos datos sugieren que las CTL CD8 específicas de tumor activadas son un arma inmunológica de elección para una potente terapia antitumoral. La investigación de proteínas sobreexpresadas que permiten activar linfocitos T citotóxicos contra tumores de diferentes orígenes también está progresando.

La telomerasa es un complejo ribonucleoproteico, que consta de un componente proteico, TERT, y un componente de ARN (TR) que contiene el molde para la síntesis de la unidad repetirá (T2AG3) añadida a los extremos de los cromosomas, que estabiliza a los cromosomas durante la replicación y evita la fusión extremo a extremo. El

mantenimiento de una longitud constante del telómero evita que las células envejezcan, y confiere inmortalidad (Hahn et al. Nat Med 1999;5:1164-70) . Se halló una elevada actividad hTERT en más del 85% de cánceres humanos, mientras que la mayoría de los tejidos humanos adultos normales muestran ninguna o poca actividad telomerasa (Counter et al. Blood 1995;85:2315-20) .

La expresión propagada de telomerasa en tumores indica que fragmentos peptídicos de hTERT podrían servir como antígeno o antígenos específicos de tumor y esto se ha confirmado en varios informes (Vonderheide et al. Immunity 1999;10:673-9) . Los datos recientes de ensayos clínicos en Fase I demuestran la viabilidad de una vacuna contra hTERT en pacientes HLA-A2+, abriendo el camino para el uso de hTERT para vacunación terapéutica (Vonderheide et al. Clin Cancer Res 2004;10:828-39 ; Parkhurst et al. Clin Cancer Res 2004;10:4688

98) . No obstante, los péptidos hTERT inmunogénicos identificados hasta la fecha están restringidos a un alelo MHC HLA-A2.1, con solamente dos informes iniciales sobre dos supertipos HLA, HLA-A3 y HLA-A24, representados respectivamente en el 44, 2% y el 40% de la población.

Por tanto, las siguientes publicaciones informaron de la identificación de péptidos hTERT:

-El péptido hTERT ILAKFLHWL, restringido a HLA-A2 (Vonderheide et al. Immunity 1999; 10: 673-9) ,

-Los péptidos hTERT MPRAPRCRA, RPAEEATSL, RPSFLLSSL y APRCRAVRS identificados por predicción informática dentro del contexto HLA-A (documento WO 00/02581) . Sin embargo, nunca se han confirmado por resultados experimentales que estos péptidos sean epítopos eficaces, ni en un contexto HLA-B7 ni en

cualquier contexto HLA. -El péptido hTERT KLFGVLRLK (K973) , restringido a HLA-A3 (Vonderheide et al. Clin Cancer Res 2001; 7: 3343-8) , y -Los péptidos hTERT VYAETKHFL (TEL324) y VYGFVRACL (TEL 461) , restringidos a HLA-A24 (Arai et al. Blood 2001;9:2903-7)

Por consiguiente, los péptidos hTERT identificados hasta ahora no cubren toda la población, excluyendo de este modo un gran segmento de pacientes.

Para superar este fallo, al menos en parte y por tanto para cubrir mejor la diversidad genética de la población 55 humana, la presente invención identifica nuevos epítopos derivados de hTERT, restringidos a un HLA particular que es diferente de HLA-A3 y HLA-A24. Entre los muchos alelos diferentes, la presente solicitud está interesada en el supertipo HLA-B7 que se expresa en aproximadamente el 25% de la población, y particularmente en el segundo alelo más expresado en la población humana HLA-B: el HLA-*B0702 (alelo presente en el 15-20% de los individuos en la población humana) .

El gen de la isoforma-1 de la telomerasa es de 4015 pares de bases (pb) de longitud (número de acceso a NCBI AF015950) y codifica una proteína de 1132 aminoácidos (número de acceso a NCBI AAC51672.1) (Figura 1) .

La invención se refiere a un polinucleótido que codifica un péptido de telomerasa transcriptasa inversa humana 65 (hTERT) para su uso en el tratamiento y/o prevención del cáncer. En una realización particular, los péptidos codificados son de 9 aminoácidos de longitud (nonámero) o de 10 aminoácidos de longitud (decámero) , y el polinucleótido por tanto tiene 27 ó 30 nucleótidos. En general, el péptido codificado es de menos de 15 aminoácidos y el polinucleótido tiene menos de 45 nucleótidos.

La invención también se refiere a un polinucleótido que codifica péptidos hTERT que son epítopos, restringidos a la molécula MHC clase I, especialmente epítopos adecuados para inducir una respuesta inmune restringida a HLA-B7, para su uso en el tratamiento y/o prevención del cáncer. La secuencia de nucleótidos del polinucleótido para su uso en la invención está, en una realización particular, limitado a la secuencia que codifica el péptido hTERT. Dichos péptidos pueden elegirse entre el grupo que consiste en MPRAPRCRA (p1; restos aminoacídicos 1 a 9) , APRCRAVRSL (p4; restos aminoacídicos 4 a 13) , APSFRQVSCL (p68; restos aminoacídicos 68 a 77) , RPAEEATSL (p277; restos aminoacídicos 277 a 285) , RPSFLLSSL (p342; restos aminoacídicos 342 a 350) , RPSLTGARRL (p351; restos aminoacídicos 351 a 360) , DPRRLVQLL (p444, restos aminoacídicos 444 a 452) , FVRACLRRL (p464, restos aminoacídicos 464 a 472) , AGRNMRRKL (p966, restos aminoacídicos 966 a 974) , LPGTTLTAL (p1107, restos aminoacídicos 1107 a 1115) y LPSPKFTIL (p1123, restos aminoacídicos 1123 a 1131) . Todos estos polinucleótidos pueden usarse para inducir una respuesta inmune restringida a HLA-B7. En una realización particular, la invención se refiere especialmente a un polinucleótido que codifica un epítopo hTERT restringido a HLA-B7, elegido entre el grupo que consiste en RPSLTGARRL (p351) , APSFRQVSCL (p68) , APRCRAVRSL (p4) , DPRRLVQLL (p444) , FVRACLRRL (p464) , AGRNMRRKL (p966) , LPGTTLTAL (p1107) y h LPSPKFTIL (p1123) para su uso en el tratamiento y/o prevención del cáncer.

Como se define en este documento, un "epítopo" es un determinante antigénico, es decir, el sitio peptídico reconocido por células del sistema inmune (células inmunes) y especialmente el sitio necesario para provocar una respuesta inmune. El término epítopo abarca tanto un epítopo lineal para el cual los aminoácidos consecutivos (especialmente, 9 ó 10) se reconocen por células inmunes, así como un epítopo conformacional para el cual las células inmunes reconocen aminoácidos en la medida que adoptan una configuración o conformación apropiada.

Por consiguiente, en algunos epítopos, la conformación (estructura tridimensional) es tan importante como la secuencia de aminoácidos (estructura primaria) .

La expresión "restringido a MHC clase I" se refiere a la capacidad de un péptido o epítopo particular de obtener una afinidad por una molécula MHC (complejo principal de histocompatibilidad) de clase I. Así mismo, la expresión "restringido a HLA-B7" se refiere a la capacidad de un péptido o epítopo particular de obtener una afinidad por este tipo de molécula HLA.

En resumen, los genes MHC codifican todas las moléculas polimórficas de superficie celular que no se unen solamente a péptidos foráneos sino también que pueden unirse a auto-péptidos o auto-péptidos mutados sobreexpresados o no, para presentarlos en la superficie celular de la célula que posibilita su reconocimiento por células inmunes apropiadas, especialmente células T. Dichas moléculas MHC, mencionadas como H-2 en ratones y HLA (Antígeno de Leucocitos Humanos) en seres humanos, se clasifican como moléculas de clase I (designadas HLA-A, B, o C) o moléculas de clase II (designadas DP, DQ, o DR) .

Por consiguiente, las moléculas MHC clase I se unen específicamente a moléculas CD8 expresadas en linfocitos T citotóxicos (también llamados TCD8+) , mientras que las moléculas... [Seguir leyendo]

1. Un polinucleótido que codifica un epítopo hTERT (telomerasa transcriptasa inversa humana) restringido a HLA-B7 elegido entre el grupo que consiste en:

a. MPRAPRCRA (p1) ,

b. APRCRAVRSL (p4) ,

c. APSFRQVSCL (p68) ,

d. RPAEEATSL (p277) ,

e. RPSFLLSSL (p342) ,

f. RPSLTGARRL (p351) ,

g. DPRRLVQLL (p444) ,

h. APRRLVQLL (p444*) ,

i. FVRACLRRL (p464) ,

j. LPGTTLTAL (p1107) , y

k. LPSPKFTIL (p1123)

para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

2. Un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 que consta de una unidad polinucleotídica seleccionada entre el grupo que consiste en:

a. ATGCCGCGCGCTCCCCGCTGCCGAGCC (n1) ,

b. GCTCCCCGCTGCCGAGCCGTGCGCTCCCTG (n4) ,

c. GCCCCCTCCTTCCGCCAGGTGTCCTGCCTG (n68) ,

d. AGACCCGCCGAAGAAGCCACCTCTTTG (n277) ,

e. CGGCCCTCCTTCCTACTCAGCTCTCTG (n342) ,

f. AGGCCCAGCCTGACTGGCGCTCGGAGGCTC (n351) ,

g. GACCCCCGTCGCCTGGTGCAGCTGCTC (n444) ,

h. GCCCCCCGTCGCCTGGTGCAGCTGCTC (n444*) ,

i. TTCGTGCGGGCCTGCCTGCGCCGGCTG (n464) ,

j. CTCCCGGGGACGACGCTGACTGCCCTG (n1107) , y

k. CTGCCCTCAGACTTCAAGACCATCCTG (n1123) ,

para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

3. Un vector de expresión que comprende un polinucleótido definido en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

4. Un vector de expresión, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 3, que es el vector pTRIP-CMV-#hTERT depositado en la CNCM con el número CNCM I-3660 el 28 de julio de 2006, en que la secuencia hTERT delecionada se ha sustituido por un polinucleótido definido en la reivindicación 1 ó 2.

5. Una célula hospedadora que comprende un vector de acuerdo con la reivindicación 3 ó 4, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

6. Una célula hospedadora genéticamente transformada con un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

7. Una célula hospedadora, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 5 ó 6, que se una célula presentadora de antígeno (APC) .

8. Una célula hospedadora, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 7 que es una célula dendrítica (DC) .

9. Una célula hospedadora, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 8 que es una DC madurada completamente ex vivo.

10. Una célula hospedadora, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, que es una célula de mamífero no humana.

11. Una célula hospedadora, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, que es una célula humana aislada.

12. Un polipéptido codificado por un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

13. Un epítopo hTERT elegido entre el grupo que consiste en:

a. MPRAPRCRA (p1) ,

b. APRCRAVRSL (p4) ,

c. APSFRQVSCL (p68) ,

d. RPAEEATSL (p277) ,

e. RPSFLLSSL (p342) ,

f. RPSLTGARRL (p351) ,

g. DPRRLVQLL (p444) ,

h. APRRLVQLL (p444*) ,

i. FVRACLRRL (p464) ,

j. LPGTTLTAL (p1107) , y

k. LPSPKFTIL (p1123) ,

para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

14. Una composición que comprende al menos un componente elegido entre el grupo que consiste en:

a. un polinucleótido definido en la reivindicación 1 ó 2,

b. un vector definido en la reivindicación 3 ó 4,

c. una célula hospedadora definida en una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, y

d. un polipéptido o péptido definido en la reivindicación 12 ó 13,

para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer mediante la inducción de una respuesta inmune restringida a HLA-B7 contra la telomerasa humana hTERT.

15. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 14, que es adecuada para administración in vivo.

16. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 14, donde dicho polinucleótido codifica adicionalmente al menos un epítopo hTERT o poliepítopo, restringido a un alelo de MHC clase I diferente del de HLA-B7.

17. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 14, que comprende adicionalmente otras moléculas de ácido nucleico que codifican al menos un epítopo hTERT o poliepítopo, restringido a un alelo de MHC clase I diferente del de HLA-B7.

18. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 16 ó 17, donde dicho alelo de MHC clase I diferente es HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3 o HLA-A24.

19. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, donde dicho polinucleótido codifica al menos un epítopo hTERT restringido a MHC clase II.

20. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, que comprende adicionalmente otras moléculas de ácido nucleico que codifican al menos un epítopo hTERT restringido a MHC clase II.

21. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 20, donde dicho polinucleótido codifica adicionalmente al menos un antígeno específico de tumor (TSA) .

22. Una composición, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 20, donde dicho polinucleótido codifica adicionalmente al menos un antígeno asociado a tumor (TAA) .

23. Una composición terapéutica, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 22, que comprende adicionalmente adyuvantes, un vehículo y/o un medio farmacéutico aceptable.

24. Una composición terapéutica, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, de acuerdo con la reivindicación 23, que comprende adicionalmente al menos un componente que facilita la captación de dicho polinucleótido o polinucleótidos por las células.

25. Un polinucleótido definido en la reivindicación 1 ó 2, un vector definido en la reivindicación 3 ó 4, una célula hospedadora definida en una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, un polipéptido o péptido definido en la reivindicación 12 ó 13 o una composición definida en una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 24, para su uso en la prevención y/o tratamiento del cáncer, en pacientes que tienen al menos un alelo HLA-B0702.