Inhibición mediada por ARNi de estados relacionados con factor de necrosis tumoral-alfa.

Un ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleotides,

en donde el ARN de interferenciatiene como diana un ARNm que corresponde a una cualquiera de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 14- SEQ IDNO: 58, y SEQ ID NO: 155- SEQ ID NO: 201, para su uso en el tratamiento o la prevencion de un estadoocular relacionado con TNFa en un sujeto que lo necesita, en donde dicho estado es ojo seco, conjuntivitisalergica o inflamed& ocular.

InhibiciOn mediada por ARNi de estados relacionados con factor de necrosis tumoral-a Campo de la invention La presente invenciOn se refiere al campo de composiciones de ARN de interferencia para silenciar el factor de 5 necrosis tumoral-a (TNFa) silenciando el ARNm del receptor de TNF de superficie celular 1 de TNFa. (TNFR1) , o el ARNm de la enzima convertidora de TNFa (TACE/ADAM17) . El silenciamiento de tales dianas de TNFa es ntil para el tratamiento de pacientes que tienen un estado relacionado con TNFa o corren el riesgo de desarrollar un estado de este tipo. Antecedentes de la invencion 10 La inflamación se trata generalmente con un regimen antiinflamatorio convendonal que incluye esteroides y/o farmacos anfiinflamatorios no esteroideos (AINE) . La conjuntivitis alergica, inflamacion ocular, dermatitis, rinitis y asma se han tratado histOricamente con un regimen de antihistaminicos orates, intranasales o tOpicos ademas de o esteroides orales o intranasales. Normalmente, un tratamiento sistemico requiere que se administren concentraciones superiores del compuesto farmacologico para proporcionar una concentración eficaz para alcanzar 15 elsifio de tratamiento necesario Se sabe que los compuestos antihistaminicos tienen actividad en el sistema nervioso central; la somnolencia y el secado de las membranas mucosas son un efecto secundario corn& del uso de antihistaminicos. Los AINE y esteroides tienen posibles efectos secundarios incluyendo aumento de la presion intraocular, catarata, glaucoma o queratitis ulcerativa peritonea. El ojo seco, tambien conocido como conjunfivitis seca o queratoconjunfivitis seca, es un trastorno oftalmoldgico 20 comOn que implica descomposición de la pelicula de lagnmas preocular, dando como resultado la deshidrataciOn de superficie externa expuesta del ojo. Hasta la fecha, el ojo seco se ha tratado con administración t6pica de disoluciones de lagrimas adificiales. Algunas de estas disoluciones contienen sustancias mucomimeticas para reemplazar o reponer temporalmente la capa de mucina en pacientes deficientes en mucina. Se ha propuesto el uso de metilprednisolona en un tratamiento de "pulso" a corto plazo para tratar empeoramientos del ojo seco. Se 25 requiere que la terapia de "pulso" propuesta evite complicaciones asociadas con la terapia con esteroides tradicional para estados inflamatorios tales como presiOn intraocular aumentada y formacion de cataratas. La citocina TNFa es una diana para la terapia antiinflamatoria de ojo seco y uveitis. En un modelo de conejo de ojo seco inducido por inflamacion de las glandulas lagrimales, se han logrado a inhibición de la pigmentación de la cornea y la restauracion de tiempo de ruptura lagrimal mediante la modulacion especifica de los niveles de TNFa. de 30 lasuperficial ocular. La terapia de ojo seco resulto inhibiendo la sintesis de TNFa (RDP58) o neutralizando especificamente TNFa usando un anticuerpo monoclonal (REMICADEO) o un receptor soluble (ENBREL®) . Cada uno de estos tratamientos dirigidos a TNFa dio como resultado niveles de eficacia obtenidos con esteroides antiinflamatorios oculares tOpicos. La publicacion de patente estadounidense 2005/0227935, publicada el 13 de octubre de 2005, concedida a 35 McSwiggen eta/. se refiere a inhibition mediada por ARN de interferencia de TNF y la expresiOn genica del receptor de TNF. Sin embargo, dicha publicaciOn no ensena ninguna de las secuencias diana particulares para la interferencia de ARN tal como se proporciona en el presente documento. Lindstedt etal.2005 (The British Journal of Ophtalmology 89 (5) :533-536) describen la inhibition de TNFa mediante anticuerpos y el uso de tales anticuerpos en el tratamiento de inflamacion ocular 40 Las realizaciones de la presente invencidin abordan la necesidad en la tecnica de tratamientos adicionales para el ojo seco y la inflamación y proporcionan terapias alternativas para los mismos. Sumario de la invencion La presente invención proporciona intervenciOn, prevencion o tratamiento altamente potente y eficaz de un estado ocular relacionado con TNFa sin efectos secundarios asociados a AINE o esteroides, en el que dicho estado ocular 45 relacionado con TNFa es ojo seco, conjuntivitis alergica o inflamaciOn ocular. En un aspecto, la invencien incluye tratar a un sujeto que tiene un estado ocular relacionado con TNFa o que corre el riesgo de desarrollar un estado ocular relacionado con TNFa administrando ARN de interferencia que silencia la expresion del ARtstrn de TACE o ARNm de TNFR1, interfiriendo asi con el procesamiento proteolitico del precursor para TNFa, o interfiriendo con la union de TNFa a su receptor de superficie celular, respectivamente, atenuando de ese modo la actividad de TNFa e 50 impidiendo una cascada de acontecimientos relacionados con apoptosis e inflamacidn, en el que dicho estado ocular relacionado con TNFa es ojo seco, conjuntivitis alergica o inflamaciOn ocular. Tal como se describe en el presente documento, estado relacionado con TNFa incluye estados tales como ojo seco y estados infiamatorios relacionados con TNFa. Tal como se describe adicionalmente en el presente documento, estado inflamatorio relacionado con TNFa incluye estados tales como inflamacien ocular, conjuntivitis alergica, 2

dermatitis, rinitis y asma, por ejemplo, e incluye los cambios celulares que resultan de la actividad de TNFa que conduce directa o indirectamente al estado inflamatorio relacionado con TNFa. Un estado relacionado con TNFa incluye particularmente estados oculares relacionados con TNFa tales como ojo seco, conjuntivitis alérgica e inflamación ocular. El ARN de interferencia descrito en el presente documento proporciona el silenciamiento de las dianas de TNFa ARNm de TACE o ARNm de TNFRl mientras que se evitan efectos secundarios no deseados debidos a agentes no específicos.

En el presente documento se describe un método de atenuación de la expresión del ARNm de TACE de un sujeto. El método comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad eficaz de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable,

comprendiendo el ARN de interferencia una región de al menos 13 nucleótidos contiguos que tiene una complementariedad de secuencia de al menos el 90% con, o una identidad de secuencia de al menos el 90% con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de un ARNm que corresponde a una cualquiera de SEO ID NO: 3, SEO ID NO: 14 -SEO ID NO: 58 y SEO ID NO: 155 -SEO ID NO: 201. La expresión de ARNm de TACE se atenúa de ese modo.

En el presente documento se describe también el tratamiento de un estado relacionado con TNFa en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad eficaz de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos, y un portador farmacéuticamente aceptable, en el que el ARN de interferencia comprende una región de al menos 13 nucleótidos contiguos que tiene una complementariedad de secuencia de al menos el 90% con, o una identidad de secuencia de al menos el 90% con,

los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de un ARNm que corresponde a una cualquiera de SEO ID NO: 3, SEO ID NO: 14 -SEO ID NO: 58 y SEO ID NO: 155 -SEO ID NO: 201. El estado relacionado con TNFa se trata de ese modo.

En el presente documento se describe además un método de atenuación de la actividad de TNFa de un sujeto atenuando la expresión de ARNm de TACE o ARNm de TNFRl del sujeto, que comprende administrar al sujeto una 25 composición que comprende una cantidad eficaz de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéutica mente aceptable y el ARN de interferencia comprende una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido y una región de complementariedad contigua al menos casi perfecta de al menos 19 nucleótidos en el que la hebra antisentido se hibrida en condiciones fisiológicas con una parte del ARNm que corresponde a SEO ID NO: 1 que comprende el nucleótido 297, 333, 334, 335, 434, 470,

493, 547, 570, 573, 618, 649, 689, 755, 842, 844, 846, 860, 878, 894, 900, 909, 910, 913, 942, 970, 984, 1002, 1010, 1053, 1064, 1137, 1162, 1215, 1330, 1334, 1340, 1386, 1393, 1428, 1505, 1508, 1541, 1553, 1557, 1591, 1592, 1593, 1597, 1604, 1605, 1626, 1632, 1658, 1661, 1691 , 1794, 1856, 1945, 1946, 1947, 1958, 2022, 2094, 2100, 2121, 2263, 2277, 2347, 2349, 2549, 2578, 2595, 2606, 2608, 2629, 2639, 2764, 2766, 2767, 2769, 3027, 3028, 3261, 3264, 3284, 3313, 3317, 3332 ó 3337 o en el que la hebra antisentido se hibrida en condiciones fisiológicas con una parte del ARNm que corresponde a SEO ID NO: 2 que comienza en el nucleótido 124, 328, 387, 391, 393, 395, 406, 421, 423, 444, 447, 455, 459, 460, 467, 469, 470, 471, 475, 479, 513, 517, 531, 543,... [Seguir leyendo]

1. Un ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos, en donde el ARN de interferencia

tiene como diana un ARNm que corresponde a una cualquiera de SEO ID NO: 3, SEO ID NO.

14. SEO ID

NO: 58, y SEO ID NO: 155 -SEO ID NO: 201, para su uso en el tratamiento o la prevención de un estado

5 ocular relacionado con TNFa en un sujeto que lo necesita, en donde dicho estado es ojo seco, conjuntivitis

alérgica o inflamación ocular.

2. Un ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos, comprendiendo el ARN de

interferencia: una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido y una región de

complementariedad contigua al menos casi perfecta de al menos 19 nucleótidos; en donde la hebra

antisentido hibrida en condiciones fisiológicas con una parte del ARNm que corresponde a SEO ID NO: 1

que comprende el nucleótido 297, 333, 334, 335, 434, 470, 493, 547, 570, 573, 618, 649, 689, 755, 842,

844, 846, 860, 878, 894, 900, 909, 910, 913, 942, 970, 984, 1002, 1010, 1053, 1064, 1137, 1162, 1215,

1330, 1334, 1340, 1386, 1393, 1428, 1505, 1508, 1541, 1553, 1557, 1591, 1592, 1593, 1597, 1604, 1605,

1626, 1632, 1658, 1661, 1691, 1794, 1856, 1945, 1946, 1947, 1958, 2022, 2094, 2100, 2121, 2263, 2277,

15 2347, 2349, 2549, 2578, 2595, 2606, 2608, 2629, 2639, 2764, 2766, 2767, 2769, 3027, 3028, 3261, 3264,

3284, 3313, 3317, 3332 ó 3337; para su uso en el tratamiento o la prevención de un estado ocular

relacionado con TNFa en un sujeto que lo necesita, en donde dicho estado es ojo seco, conjuntivitis

alérgica o inflamación ocular.

3. Un ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos, comprendiendo el ARN de

interferencia: una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido y una región de

complementariedad contigua al menos casi perfecta de al menos 19 nucleótidos; en donde la hebra

antisentido hibrida en condiciones fisiológicas con una parte del ARNm que corresponde a SEO ID NO: 2

que comienza en el nucleótido 124, 328, 387, 391, 393, 395, 406, 421, 423, 444, 447, 455, 459, 460, 467,

469, 470, 471, 475, 479, 513, 517, 531, 543, 556, 576, 587, 588, 589, 595, 601, 602, 611, 612, 651, 664,

El ARN de interferencia para su uso según la reivindicación 2, que comprende además un segundo ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y que comprende: una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido y una región de complementariedad al menos casi perfecta de al menos 19 nucleótidos; en donde la hebra antisentido del segundo ARN de interferencia hibrida en condiciones fisiológicas con una parte del ARNm que corresponde a SEO ID NO: 2 que comprende el

nucleótido 124, 328, 387, 391, 393, 395, 406, 421, 423, 444, 447, 455, 459, 460, 467, 469, 470, 471, 475, 479, 513, 517, 531, 543, 556, 576, 587, 588, 589, 595, 601, 602, 611, 612, 651, 664, 667, 668, 669, 677, 678, 785, 786, 788, 791, 792, 804, 813, 824, 838, 843, 877, 884, 929, 959, 960, 961, 963, 964, 965, 970, 973, 974, 1000, 1002, 1013, 1026, 1053, 1056, 1057, 1058, 1161, 1315, 1318, 1324, 1357, 1360, 1383, 1393, 1420, 1471, 1573, 1671, 2044, 2045, 2046, 2047, 2048, 2089, 2090, 2091 62092.

5. El ARN de interferencia para su uso según la reivindicación 3, que comprende además un segundo ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y que comprende: una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido y una región de complementariedad al menos casi perfecta de al menos 19 nucleótidos; en donde la hebra antisentido del segundo ARN de interferencia hibrida en condiciones fisiológicas con una parte del ARNm que corresponde a SEO ID NO: 2 que comprende el

nucleótido 297, 333, 334, 335, 434, 470, 493, 547, 570, 573, 618, 649, 689, 755, 842, 844, 846, 860, 878, 894, 900, 909, 910, 913, 942, 970, 984, 1002, 1010, 1053, 1064, 1137, 1162, 1215, 1330, 1334, 1340, 1386, 1393, 1428, 1505, 1508, 1541, 1553, 1557, 1591, 1592, 1593, 1597, 1604, 1605, 1626, 1632, 1658, 1661, 1691, 1794, 1856, 1945, 1946, 1947, 1958, 2022, 2094, 2100, 2121, 2263, 2277, 2347, 2349, 2549, 2578, 2595, 2606, 2608, 2629, 2639, 2764, 2766, 2767, 2769, 3027, 3028, 3261, 3264, 3284, 3313, 3317, 3332 ó 3337, en donde el ARN de interferencia es para su administración al ojo del sujeto.

6. El ARN de interferencia para su uso según la reivindicación 2 ó 3, en donde la hebra de nucleótidos sentido y la hebra de nucleótidos antisentido están conectadas por una hebra de nucleótidos en bucle.

Una molécula de ARNip bicatenario que regula por disminución la expresión de un gen de TACE mediante interferencia de ARN, en donde: cada hebra de la molécula de ARNip tiene independientemente de aproximadamente 19 a aproximadamente 27 nucleótidos de longitud; y una hebra de la molécula de ARNip comprende una secuencia de nucleótidos que tiene complementariedad sustancial con un ARNm correspondiente al gen de TACE de manera que la molécula de ARNip dirige la escisión del ARNm mediante interferencia de ARN para su uso en el tratamiento o la prevención de un estado ocular relacionado con TNFa en un sujeto que lo necesita, en donde dicho estado es ojo seco, conjuntivitis alérgica o inflamación ocular.

8. Una molécula de ARNip bicatenario que regula por disminución la expresión de un gen de TNFR1 mediante interferencia de ARN, en la que: cada hebra de la molécula de ARNip tiene independientemente de aproximadamente 19 a aproximadamente 27 nucleótidos de longitud; y una hebra de la molécula de ARNip comprende una secuencia de nucleótidos que tiene complementariedad sustancial con un ARNm correspondiente al gen de TNFR1 de manera que la molécula de ARNip dirige la escisión del ARNm mediante interferencia de ARN, para su uso en el tratamiento o la prevención de un estado ocular

relacionado con TNFa en un sujeto que lo necesita, en donde dicho estado es ojo seco, conjuntivitis alérgica o inflamación ocular.

9. Un ARN de interferencia monocatenario que tiene una longitud de 19 a 49 nUcleótidos, en donde el ARN de interferencia monocatenario híbrida en condiciones fisiológicas con una parte del ARNm que corresponde a SEO ID NO: 1 que comprende el nucleótido 297, 333, 334, 335, 434, 470, 493, 547, 570, 573, 618, 649, 689, 755, 842, 844, 846, 860, 878, 894, 900, 909, 910, 913, 942, 970, 984, 1002, 1010, 1053, 1064, 1137, 1162, 1215, 1330, 1334, 1340, 1386, 1393, 1428, 1505, 1508, 1541, 1553, 1557, 1591, 1592, 1593, 1597, 1604, 1605, 1626, 1632, 1658, 1661, 1691, 1794, 1856, 1945, 1946, 1947, 1958, 2022, 2094, 2100, 2121, 2263, 2277, 2347, 2349, 2549, 2578, 2595, 2606, 2608, 2629, 2639, 2764, 2766, 2767, 2769, 3027, 3028, 3261, 3264, 3284, 3313, 3317, 3332 ó 3337, y el ARN de interferencia tiene una región de complementariedad contigua al menos casi perfecta con la parte hibridante del ARNm correspondiente a SEO ID NO: 1, para su uso en el tratamiento o la prevención de un estado ocular relacionado con TNFa en un sujeto que lo necesita, en donde dicho estado es ojo seco, conjuntivitis alérgica o inflamación ocular.

10. El ARN de interferencia para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el ARN de interferencia se administra mediante expresión in vivo desde un vector de expresión que puede expresar el ARN de interferencia.

11. El ARN de interferencia para su uso según la reivindicación 3, en donde el ARN de interferencia se administra mediante un vector de expresión que puede expresar el ARN de interferencia in vivo, yen donde cada hebra de la molécula de ARNip tiene independientemente de aproximadamente 19 nucleótidos a aproximadamente 25 nucleótidos de longitud, o de aproximadamente 19 nucleótidos a aproximadamente 21 nucleótidos de longitud.

12. El ARN de interferencia para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, 10 Y 11, en donde el ARN de interferencia es un ARNhp o un ARNip.

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TNFR1ip n.o 3

TNFR1ip n.o 4