Detección y modulación de la angiogénesis mediada por Slit y Roundabout (Robo), y sus usos.

El uso de un compuesto para la preparación de un medicamento para inhibir la angiogénesis tumoral mediadapor Slit2 en un sujeto,

en el que el medicamento es eficaz para reducir la interacción proteína-proteína de Slit2-receptor de Slit2 en el sujeto hasta un nivel suficiente para inhibir la angiogénesis tumoral mediada por Slit2, y en elque el tumor es un cáncer de tumor sólido seleccionado del grupo que consiste en carcinoma quístico adenoide delas glándulas salivares y carcinoma hepatocelular, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste enun anticuerpo anti-Slit2, un anticuerpo anti-receptor de Slit2 y un fragmento del receptor de Slit2 derivado deldominio extracelular del receptor de Slit2 que es capaz de unirse a Slit2.

Detección y modulación de la angiogénesis mediada por Slit y Roundabout (Robo) , y sus usos Antecedentes de la invención La angiogénesis es un proceso celular de germinación de capilares y de configuración de neovasculaturas a partir de vasos sanguíneos existentes. Contrasta con otro proceso de formación de vasos sanguíneos denominado vasculogénesis, en el cual los vasos sanguíneos se forman de novo por la coalescencia de células progenitoras endoteliales. Durante el desarrollo de los primates, por ejemplo la embriogénesis y la morfogénesis de tejidos/órganos, se producen vasos sanguíneos mediante vasculogénesis y angiogénesis. Sin embargo, en el adulto, los nuevos vasos solo se forman mediante angiogénesis. Excepto durante los ciclos reproductivos femeninos (ovulación, menstruación, implantación y embarazo) , las células endoteliales son quiescentes y, así, tienen una vida larga en los mamíferos adultos normales. Sin embargo, sufren un proceso de activación, tras estímulos apropiados, para que se desarrollen en nuevos capilares durante el crecimiento episódico y la remodelación de la red de vasos sanguíneos.

La angiogénesis es de crucial importancia en una diversidad de enfermedades y trastornos fisiológicos y patológicos, que incluyen isquemia e hipoxia, aterosclerosis, reclutamiento y tráfico de leucocitos, hemostasis, curación de heridas, síndrome de filtración vascular, retinopatía diabética, degeneración macular, glaucoma neovascular, psoriasis, artritis reumatoide, hemangioma, y metástasis y crecimiento de cánceres (Hanahan, D. y Folkman, J., Cell, 86:353-364 (1996) ; Carmeliet, P. y Jain, R. K., Nature, 407:249-257 (2000) ) . Ahora se reconoce la importancia de la angiogénesis para el crecimiento de una diversidad de cánceres. Por ejemplo, el crecimiento de tumores sólidos requiere la expansión concomitante de redes vasculares para su suministro de sangre; se sabe que un suministro de sangre insuficiente (más de 100 a 200 μm alejados de los vasos sanguíneos) conduce a la necrosis de tejidos cancerosos. Aunque el factor del crecimiento de células endoteliales vascular (VEGF) , el factor del crecimiento de fibroblastos (FGF) , las angiopoyetinas y otras moléculas son indispensables para la formación de vasos (Hanahan, D., Science, 277:48-50 (1997) ; Yancopoulos, G. D. et al., Nature, 407:242-248 (2000) ) , aún no se entienden bien los mecanismos moleculares y celulares que gobiernan la angiogénesis tumoral.

En vertebrados, el sistema vascular actúa principalmente para el transporte de materiales, mientras que el sistema nervioso actúa principalmente para la comunicación de información; de manera notable, ambos tienen las propiedades anatómicas y fisiológicas de los circuitos (Shima, D. T. y Mailhos, C., Curr. Opin. Genet. Dev., 10:536542 (2000) ) . Por ejemplo, (1) los vasos capilares están formados por células endoteliales recubiertas por pericitos, mientras que los nervios están compuestos por neuronas rodeadas de glia; (2) tanto los vasos sanguíneos como los nervios se ramifican a lo largo de casi todas las partes del cuerpo; y (3) el sistema circulatorio está dividido en arterias (que envían la sangre fuera del corazón) y venas (que envían la sangre de nuevo al corazón) , mientras que el sistema nervioso tiene nervios motores (que envían el impulso fuera del cerebro o la médula espinal) y nervios sensoriales (que vuelven a mandar el impulso hacia el cerebro o la médula espinal) . Además de compartir estas características morfológicas y funcionales, los vasos sanguíneos y los nervios tienen una relación física íntima, tal como los nervios autónomos que regulan el tono vascular.

En la actualidad se sabe que la exploración de las redes nerviosas requiere de varias familias de pistas migratorias neurológicas, tales como semaforina, efrina, netrina, Slit y varias otras. Sobresaliendo entre estas moléculas que estimulan simultáneamente la angiogénesis está la neuropilina-1, un receptor de membrana de la familia de la semaforina expresado en neuronas en desarrollo y en células endoteliales. Se une a VEGF165, una isoforma de corte y empalme del gen VEGF (Soker, S. et al., Cell, 92:735-745 (1998) ) , y desde el punto de vista funcional, sus embriones de ratón mutantes muestran defectos graves en las formaciones vasculares (Kawasaki, T. et al., Development, 126:4895-4902 (1999) ) . Las células tumorales también pueden expresar neuropilina-1, que produce una angiogénesis tumoral sustancialmente potenciada y tumores más grandes. En analogía, los ligandos unidos a las células efrina y su receptor de tirosina quinasas EpH cognado desempeñan papeles fundamentales en el desarrollo vascular. Entre estos, la efrina-B2, un ligando transmembrana expresado específicamente sobre células endoteliales arteriales y las células circundantes, interacciona con múltiples receptores de clase EphB. A la inversa, EpHB4, un receptor específico para la efrina-B2, se expresa sobre células endoteliales venosas. Se cree que las señales bidireccionales entre EphB4 y efrina-B2 son específicas para el desarrollo de las arterias y las venas (Wang,

H. U. et al., Cell, 93:741-753 (1998) ) . Además, el receptor EphA2 está sobrerregulado en células transformadas y vasculaturas tumorales, en donde es probable que contribuya a la patogénesis del cáncer (Brantley, D. M. et al., Oncogene, 21:7011-7026 (2002) ) . De forma similar, se observa ARNm del receptor Unc5h2 de netrina-1 de rata durante la formación temprana de vasos sanguíneos, lo cual indica la implicación potencial de la netrina y sus receptores en la vasculogénesis (Engelkamp, D., Mech. Dev., 118:191-197 (2002) ) .

Gordon et al. ("Phase I Safety and Pharmacokinetic Study of Recombinant Human Anti-Vascular Endothelial Growth Factor in Patients With Advanced Cancer", Journal of Clinical Oncology, vol. 19:843-850 (2001) ) describen la administración de un anticuerpo monoclonal humano recombinante dirigido contra el fector del crecimiento endotelial vascular (VSGF) en pacientes con ciertos cánceres para estudiar la aceptabilidad farmacológica del anticuerpo. Según Gordon et al., la administración del anticuerpo generado por los autores no está asociado con los efectos secundarios relacionados con la infusión, clínicamente significativos, que son comunes a otros anticuerpos.

Silt2, un miembro de otra familia de pistas migratorias "neurológicas", es expresado por células de la línea media y células endoteliales. Reacciona con una proteína transmembrana de la superficie celular, Roundabout1 (Robo 1) , y actúa como repelente en la orientación de axones (Kidd, T. et al., Cell, 92:201-215 (1998) ; Brose, K. et al., Cell, 96:795-806 (1999) ; Li, H. S. et al., Cell, 96:807-818 (1999) ) y la ramificación de axones (Wang, K. H. et al., Cell, 96:771-784 (1999) ; Whitford, K. L. et al., Neuron, 33:47-61 (2002) ) , la migración neuronal (Wu, W. et al., Nature, 400:331-336 (1999) ) , y como inhibidor endógeno para la quimiotaxis de leucocitos (Wu, J. Y. et al., Nature, 410:948952 (2001) ) . En la actualidad, existen tres genes slit, slit1, 2 y 3, y cuatro genes robo, robo1, robo2, rig-1 y robo4, conocidos en mamíferos. Se ha descubierto su expresión fuera del sistema nervioso en roedores (Holmes, G. P. et al., Mech. Dev., 79:57-72 (1998) ; Piper, M. et al., Mech. Dev., 94: 213-217 (2000) ) . Por ejemplo, se encuentran ARNm para Slit2 y Slit3, pero no para Slit1, en células endoteliales de rata, y se encuentra ARN de Robo1 en leucocitos de ratón (Wu, J. Y. et al., Nature, 410:948-952 (2001) ) . Además, las células endoteliales humanas expresan Robo4 (Huminiecki, L. et al., Genomics, 79:547-552 (2002) ) . Sin embargo, no se ha determinado si las células de cáncer humano pueden expresar estos genes, en especial a nivel de proteínas.

Breve sumario de la invención La presente invención está dirigida a composiciones farmacéuticas y a usos de compuestos para la preparación de medicamentos para inhibir la angiogénesis tumoral mediada por Slit2 en un sujeto.

En un aspecto, la presente invención se dirige a los usos de compuestos para la preparación de medicamentos para inhibir la angiogénesis tumoral mediada por Slit2 en un sujeto, según se define en la reivindicación 1. Las realizaciones de los usos son definidas por las reivindicaciones 2-10.

En otro aspecto, la presente invención se dirige a composiciones farmacéuticas par inhibir la angiogénesis asociada a tumores mediada por Slit2 en un sujeto, según se define en la reivindicación 11. Las realizaciones de las composiciones son definidas por las reivindicaciones 12 y 13.

Breve descripción de varias vistas de los dibujos La figura 1 muestra las expresiones de Slit2 en células A375 y de Robo1 en células endoteliales. a y e, se determinó... [Seguir leyendo]

1. El uso de un compuesto para la preparación de un medicamento para inhibir la angiogénesis tumoral mediada por Slit2 en un sujeto, en el que el medicamento es eficaz para reducir la interacción proteína-proteína de Slit2receptor de Slit2 en el sujeto hasta un nivel suficiente para inhibir la angiogénesis tumoral mediada por Slit2, y en el que el tumor es un cáncer de tumor sólido seleccionado del grupo que consiste en carcinoma quístico adenoide de las glándulas salivares y carcinoma hepatocelular, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo anti-Slit2, un anticuerpo anti-receptor de Slit2 y un fragmento del receptor de Slit2 derivado del dominio extracelular del receptor de Slit2 que es capaz de unirse a Slit2.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo anti-Slit2 o el anticuerpo anti-receptor de Slit2 se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un fragmento Fab y un fragmento F (ab') 2.

3. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que el receptor de Slit2 es Robo1 o Robo4.

4. El uso de la reivindicación 3, en el que el receptor de Slit2 es Robo1, y el anticuerpo es un anticuerpo anti-Slit2 o un anticuerpo anti-Robo1.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que el anticuerpo anti-Robo1 es un anticuerpo contra el primer dominio de inmunoglobulina de Robo1.

6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el medicamento se administra con un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. El uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el cáncer es metastásico.

8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el sujeto es un mamífero.

9. El uso de la reivindicación 8, en el que el mamífero es un ser humano.

10. El uso de la reivindicación 9, en el que el medicamento que se va a administrar es un anticuerpo monoclonal humanizado.

11. Una composición farmacéutica para inhibir la angiogénesis asociada a tumores mediada por Slit2 en un sujeto, en la que la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz de un compuesto que reduce la interacción de Slit2-receptor de Slit2, en la que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo anti-Slit2, un anticuerpo anti-receptor de Slit2 y un fragmento del receptor de Slit2 derivado del dominio extracelular del receptor de Slit2 que es capaz de unirse a Slit2.

12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11, en la que el receptor de Slit2 es Robo1 o Robo4.

13. La composición farmacéutica de las reivindicaciones 11 o 12, que comprende además un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptable.