Detección del virus de la gripe en tiempo real.

Sistema para la detección de una pluralidad de analitos que comprende una hemaglutinina y una neuraminidasa ambas presentes en un virus de la gripe que son indicadores de una infección por este virus de la gripe en un fluido corporal de un paciente,

que comprende:

a) un dispositivo fluídico, comprendiendo dicho dispositivo fluídico una unidad de toma de muestras y un cartucho, en el que dicho cartucho comprende un conjunto de inmunoanálisis y un identificador, en el que dicha unidad de toma de muestras permite que una muestra de fluido corporal que se sospecha que contiene dicho analito reaccione con un primer reactivo de inmunoanálisis y un segundo reactivo de inmunoanálisis, estando ambos contenidos dentro de dicho conjunto de inmunoanálisis, en el que uno de dichos reactivos de inmunoanálisis se une a dicha hemaglutinina y el otro de dichos reactivos de inmunoanálisis se une a dicha neuraminidasa para producir una o más señales detectables indicadoras de la presencia tanto de dicha hemaglutinina como de dicha neuraminidasa en dicho virus de la gripe;

b) un conjunto lector que comprende un conjunto de detección para detectar dicha señal detectable; y

c) un conjunto de comunicación para transmitir dicha señal detectada a un dispositivo externo, y en el que el dispositivo externo está configurado para transmitir un protocolo en respuesta a dicho identificador en dicho cartucho, en el que dicho protocolo, a su vez, produce una reacción en dicho conjunto de inmunoanálisis para generar dicha señal detectable.

Detección del virus de la gripe en tiempo real.

Antecedentes de la invención La gripe es una enfermedad infecciosa capaz de infligir a una amplia variedad de anfitriones, incluyendo aves y mamíferos. La gripe es producida por un virus con ARN de la familia Orthomyxoviridae (que comprende en general los virus de la gripe tipo A, B y C) . La gripe aviar es producida por un virus de esta familia adaptado a las aves, por lo que también se denomina gripe de las aves. Una amenaza de pandemia actual se origina a partir de un brote sin precedentes de la cepa H5N1 del virus A de la gripe en Asia y Europa. Esta cepa tiene la capacidad de mutar y adaptarse a una amplia gama de anfitriones, incluidas las aves y los seres humanos. El Homeland Security Council emitió la "National Strategy for Pandemic Influenza" ("La estrategia") en noviembre de 2005 en respuesta a la amenaza de pandemia actual. Una parte fundamental de esta iniciativa se centra en la identificación rápida de la gripe aviar en pacientes y pájaros. La estrategia busca mejorar la vigilancia y la detección de la gripe aviar.

A partir de noviembre de 2005, el virus causante de la amenaza de pandemia la gripe aviar era conocido por haber infectado a 121 pacientes en cuatro países, produciendo 62 muertes en los últimos dos años. Los pacientes infectados con el virus H5N1 tenían, en casi todos los casos, mucho contacto físico con aves infectadas. Aunque el virus todavía no ha demostrado una capacidad para transmitirse de manera eficiente entre los seres humanos, como se ve con la epidemia anual del virus de la gripe humana, se plantea un problema grave que va a adquirir esta capacidad por mutación genética o intercambio de material genético con un virus de la gripe humana.

La gripe causa aproximadamente 36.000 muertes y más de 200.000 hospitalizaciones cada año en los EE.UU. solo y cuesta en los EE.UU. más de 10 mil millones de $ al año. Además, las tres últimas pandemias, en 1918, 1957 y 1968, murieron unos 40 millones, 2 millones y 1 millón de pacientes en todo el mundo, respectivamente.

Sigue habiendo una necesidad urgente de proporcionar dispositivos y procedimientos que pueden detectar con precisión y rapidez la presencia de la gripe aviar para proporcionar una alerta temprana de pandemia a fin de contener la propagación de la enfermedad. Un sistema ideal sería (1) permitir la recuperación, la transmisión y el análisis de los datos de dichos dispositivos, y (2) proporcionar un sistema de alerta en tiempo real a los funcionarios de sanidad y del gobierno. La presente invención satisface esta necesidad y proporciona ventajas relacionadas.

Yan et al., 2005, Anal. Chem., 77 (23) , 7673-7678 dan a conocer cartuchos microfluidos. Ello no implica que éstos no puedan utilizarse junto con un identificador o un dispositivo externo que comunica con el cartucho para permitir su utilización. Ello no implica la utilización para detectar una hemaglutinina y una neuraminidasa o un virus de la gripe.

La solicitud de patente de EE.UU. nº 2005/0100937 da a conocer un dispositivo microfluido para el seguimiento de analitos. Ello no implica la utilización de un dispositivo externo que comunica con el cartucho para permitir su utilización. Ello no implica la utilización para detectar una hemaglutinina y una neuraminidasa o un virus de la gripe.

Sumario de la invención La presente invención proporciona un sistema para la detección de analitos indicadores de una infección por virus de la gripe en un fluido corporal de un paciente como se describe en la reivindicación 1. El sistema normalmente comprende a) un dispositivo fluídico, comprendiendo dicho dispositivo fluídico una unidad de toma de muestras y un conjunto de ensayo, en el que dicha unidad de toma de muestras permite que una muestra de fluido corporal que se sospecha que contiene dicho analito para reaccionar con los reactivos contenidos dentro de dicho conjunto de ensayo para producir una señal detectable indicadora de la presencia de dicho analito; b) un conjunto lector que comprende un conjunto de detección para detectar dicha señal detectable; y c) un conjunto de comunicación para transmitir dicha señal detectada a dicho dispositivo externo. El sistema es capaz de detectar una infección por virus de la gripe tipo A, B y/o C. En general, los analitos comprenden glucoproteína de superficie de un virus de la gripe, que puede ser hemaglutinina (p. ej., H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 y H16) y una neuraminidasa (p. ej., N1, N2, N3, N4 y N5) . El fluido corporal puede extraerse de un paciente seleccionado de entre el grupo que consiste en seres humanos, aves de corral y aves silvestres.

La presente invención también proporciona un sistema para detectar una pluralidad de analitos, por lo menos dos de los cuales indican una infección por virus de la gripe en un fluido corporal de un paciente. El sistema comprende normalmente, a) un dispositivo fluídico, comprendiendo dicho dispositivo fluídico una unidad de toma de muestras y un conjunto de ensayo, en el que dicha unidad de toma de muestras permite que una muestra de fluido corporal que se sospecha que contiene dicha variedad de analitos para reaccionar con los reactivos contenidos dentro de dicho conjunto de ensayo para producir una o más señales detectables indicadoras de la presencia de dichos por lo menos dos analitos; b) un conjunto lector que comprende un conjunto de detección para detectar dichas una o más señales detectables; y c) un conjunto de comunicación para transmitir dicha señal detectada a dicho dispositivo externo.

La presente invención proporciona además un procedimiento de utilización de los sistemas del asunto. Se describe un procedimiento para detectar un indicador de analitos de una infección de la gripe en un fluido corporal de un paciente. El procedimiento implica las etapas siguientes a) proporcionar un sistema del asunto; b) permitir que una muestra de fluido corporal reaccione con los reactivos contenidos dentro de dicho conjunto de ensayo para dar un indicador con señal detectable de la presencia de dicho analito; y c) detectar dicha señal detectable. En otro aspecto, el procedimiento comprende las etapas siguientes a) proporcionar un dispositivo fluídico que comprende al menos una unidad de toma de muestras, un conjunto de inmunoanálisis que contiene reactivos de inmunoanálisis, una pluralidad de canales en comunicación fluídica con dicha unidad de toma de muestras y/o dicho conjunto de inmunoanálisis; b) accionar dicho dispositivo fluídico y dirigir dichos reactivos de inmunoanálisis dentro de dicho dispositivo fluídico; c) permitir que una muestra de fluido corporal que se sospecha que contiene dicho analito reaccione con dichos reactivos de inmunoanálisis contenidos dentro de dicho conjunto de inmunoanálisis de ensayo para producir un indicador con señal detectable de la presencia de dicho analito indicador de una infección vírica de la gripe en dicha muestra; y d) detectar dicha señal detectable genera a partir de dicho analito en dicha toma de muestras de fluido corporal. Cuando se desee, la muestra de fluido corporal utilizado para dicha detección es inferior a aproximadamente 500 microlitros. Se puede detectar una variedad de infecciones víricas de la gripe. Ellas incluyen, pero no se limitan a la infección vírica tipo A, B, C de la gripe.

La presente invención proporciona además un procedimiento para detectar una pluralidad de analitos, por lo menos dos de los cuales son indicadores de una infección vírica de la gripe en un fluido corporal de un paciente. El procedimiento comprende las etapas que consisten en a) proporcionar un dispositivo fluídico que comprende por lo menos una unidad de toma de muestras, un conjunto de inmunoanálisis que contiene reactivos de inmunoanálisis, una pluralidad de canales en comunicación fluídica con dicha unidad de toma de muestras y/o dicho conjunto de inmunoanálisis; b) accionar dicho dispositivo fluídico y dirigir dichos reactivos de inmunoanálisis dentro de dicho dispositivo fluídico; c) permitir que una muestra de fluido corporal que se sospecha que contiene dicha pluralidad de analitos reaccione con dichos reactivos de inmunoanálisis contenidos dentro de dicho conjunto analítico de inmunoanálisis para producir una o más señales detectables indicadoras de la presencia de por lo menos dichos dos analitos en dicha muestra; y d) detectar una o más de dichas señales detectables generadas a partir de dicha pluralidad de analitos recogidos en dicha muestra de fluido corporal.

También se proporciona en la presente invención un dispositivo fluídico para la detección de un tipo de infección vírica de la gripe. Los dispositivos fluídicos comprenden un cartucho que comprende una pluralidad... [Seguir leyendo]

1. Sistema para la detección de una pluralidad de analitos que comprende una hemaglutinina y una neuraminidasa ambas presentes en un virus de la gripe que son indicadores de una infección por este virus de la gripe en un fluido corporal de un paciente, que comprende:

a) un dispositivo fluídico, comprendiendo dicho dispositivo fluídico una unidad de toma de muestras y un cartucho, en el que dicho cartucho comprende un conjunto de inmunoanálisis y un identificador, en el que dicha unidad de toma de muestras permite que una muestra de fluido corporal que se sospecha que contiene dicho analito reaccione con un primer reactivo de inmunoanálisis y un segundo reactivo de inmunoanálisis, estando ambos contenidos dentro de dicho conjunto de inmunoanálisis, en el que uno de dichos reactivos de inmunoanálisis se une a dicha hemaglutinina y el otro de dichos reactivos de inmunoanálisis se une a dicha neuraminidasa para producir una o más señales detectables indicadoras de la presencia tanto de dicha hemaglutinina como de dicha neuraminidasa en dicho virus de la gripe;

b) un conjunto lector que comprende un conjunto de detección para detectar dicha señal detectable; y

c) un conjunto de comunicación para transmitir dicha señal detectada a un dispositivo externo, y en el que el dispositivo externo está configurado para transmitir un protocolo en respuesta a dicho identificador en dicho cartucho, en el que dicho protocolo, a su vez, produce una reacción en dicho conjunto de inmunoanálisis para generar dicha señal detectable.

2. Sistema según la reivindicación 1, en el que dicha pluralidad de analitos indica una infección por virus tipo A de la gripe o de una infección por virus tipo B de la gripe o de una infección por virus tipo C de la gripe.

3. Sistema según la reivindicación 1 para detectar una pluralidad de analitos que comprende una pluralidad de glucoproteínas de superficie de un virus de la gripe, en el que por lo menos un analito comprende una hemaglutinina seleccionada de entre H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 y H16 y por lo menos otro analito comprende una neuraminidasa seleccionada de entre N1, N2, N3, N4 y N5.

4. Sistema según la reivindicación 3, en el que la pluralidad de analitos comprende H5 y N1.

5. Sistema según la reivindicación 1, en el que dichos reactivos de inmunoanálisis comprenden una pluralidad de anticuerpos específicos para una glucoproteína de superficie de un virus de la gripe.

6. Procedimiento para detectar una combinación de analitos de glucoproteínas de superficie que están presentes simultáneamente en una partícula del virus de la gripe, en el que por lo menos un miembro de dicha combinación es una hemaglutinina y por lo menos otro miembro es una neuramidasa, en el que la combinación de dichas glucoproteínas de superficie es indicadora de una infección con dicha partícula del virus de la gripe en un fluido corporal de un paciente, que comprende:

a) proporcionar un sistema según la reivindicación 1;

b) permitir que una muestra de fluido corporal sospechosa de contener dicho analito reaccione con los reactivos de inmunoanálisis contenidos dentro de dicho conjunto de inmunoanálisis para producir una señal que es indicadora de la presencia de dicha combinación de analitos simultáneamente presentes en una partícula vírica de la gripe en dicha muestra; y

c) detectar dicha señal detectable generada a partir de dicha combinación de analitos presentes en dicha partícula del virus de la gripe.

7. Procedimiento para detectar una combinación de analitos de glucoproteínas de superficie que están presentes simultáneamente en una partícula del virus de la gripe, en el que por lo menos un miembro de dicha combinación es una hemaglutinina y por lo menos otro miembro es una neuramidasa, en el que la combinación de dichas glucoproteínas de superficie es indicadora de una infección con dicha partícula del virus de la gripe en un fluido corporal de un paciente, que comprende:

a) proporcionar un dispositivo fluídico que comprende por lo menos una unidad de toma de muestras, un conjunto de inmunoanálisis que contiene reactivos de inmunoanálisis, una pluralidad de canales en comunicación fluídica con dicha unidad de toma de muestras y/o dicho conjunto de inmunoanálisis;

b) accionar dicho dispositivo fluídico y dirigir dichos reactivos de inmunoanálisis dentro de dicho dispositivo fluídico;

c) permitir que una muestra de fluido corporal que se sospecha que contiene dichos analitos reaccione con dichos reactivos de inmunoanálisis contenidos dentro de dicho conjunto analítico de inmunoanálisis para producir una o más señales detectables que son indicadoras de la presencia de dicha combinación de analitos simultáneamente presentes en una partícula del virus de la gripe en dicha muestra; y

d) detectar dicha señal o señales detectables, generadas a partir de una combinación de analitos presentes en dicha partícula del virus de la gripe en dicha muestra de fluido corporal.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, en el que dicha muestra de fluido corporal es inferior a aproximadamente 500 microlitros.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, en el que los analito (s) , glucoproteína (s) , hemaglutinina (s) , neuramidasa (s) y anticuerpo (s) de tipo (s) vírico (s) se describen en las reivindicaciones 3 o 5.

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, que comprende además detectar por lo menos un analito que es un biomarcador en la muestra de fluido corporal, indicador del estrés impuesto en el cuerpo humano

por la infección vírica, en el que el biomarcador comprende CRP, FNTα o una interleucina.

11. Dispositivo fluídico para detectar un tipo de infección por virus de la gripe, que comprende:

un cartucho que comprende una pluralidad de reactivos, uniendo al menos dos de ellos diferentes analitos presentes en una partícula del virus de la gripe en un fluido corporal de un paciente, en el que dichos analitos diferentes son indicadores del subtipo de infección por gripe, siendo por lo menos un miembro de dichos analitos diferentes una hemaglutinina seleccionada de entre H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 y H16 y siendo por lo menos otro miembro de dichos analitos diferentes una neuraminidasa seleccionada de entre N1, N2, N3, N4 y N5, y estando dicho cartucho adaptado para permitir que dicho fluido corporal reaccione con dicha pluralidad de reactivos para producir una o más señales detectables que son indicadoras de la presencia de dichos analitos diferentes simultáneamente presentes en una partícula del virus de la gripe en dicho fluido corporal.

12. Dispositivo fluídico según la reivindicación 11, en el que dicho cartucho comprende además una unidad de toma de muestras y un conjunto analítico que comprende dichos reactivos y en el que dicho conjunto analítico comprende un conjunto de inmunoanálisis.

13. Procedimiento según la reivindicación 6 ó 7, en el que dicho paciente es un ser humano, animal o ave de corral.

14. Dispositivo fluídico según la reivindicación 11, en el que dicho cartucho comprende un identificador.