Derivados del tamoxifeno, procedimiento de obtención y sus aplicaciones.

Derivados del tamoxifeno, procedimiento de obtención y sus aplicaciones.

La invención se refiere a derivados del tamoxifeno, y sus usos como composición farmacéutica en el tratamiento de enfermedades que cursan con activación de la señalización por estrógenos o como herramienta para la identificación dianas moleculares del tamoxifeno o como emisor laser molecular. Además, la presente invención se refiere al procedimiento de obtención de estos compuestos y a composiciones que los comprenden.

Derivados del tamoxifeno, procedimiento de obtención y sus aplicaciones.

La presente invención se refiere a unos compuestos nuevos, derivados del tamoxifeno, y sus usos como composición farmacéutica en el tratamiento de enfermedades que cursan con activación de la señalización por estrógenos o como herramienta para la identificación de dianas moleculares del tamoxifeno o como emisor láser molecular. Además, la presente invención se refiere al procedimiento de obtención de estos compuestos y a composiciones que los comprenden.

ESTADO DE LA TÉCNICA

El tamoxifeno es el fármaco más comúnmente utilizado en la quimioterapia anticancerosa en el tratamiento del cáncer de mama estrógeno-dependiente. La introducción del fármaco en la práctica clínica desde los años 70, ha permitido acumular una gran cantidad de datos epidemiológicos que demuestran su gran eficacia en el tratamiento de este tipo de tumores. El paradigma fundamental que explica los efectos beneficiosos del tamoxifeno es que éste actúa, en los tumores de mama dependientes de estrógenos, como un antiestrógeno, es decir como una molécula capaz de antagonizar la unión de los estrógenos a sus receptores intracelulares, conocidos como receptores de estrógenos. A pesar de su bien aceptada aplicabilidad, numerosas evidencias demuestran que el tamoxifeno es capaz de producir un considerable número de efectos secundarios, que van desde la endometriosis (y el cáncer de endometrio) a la generación de cataratas [MacGregor JI, Jordan VC. “Basic guide to the mechanisms of antiestrogen action”. Pharmacol Rev. (1998) 50 (2) :151-196 y en Jordan VC. “Selective estrogen receptor modulation: concept and consequences in cancer”; Cancer Cell. (2004) 5 (3) :207-213].

Una buena parte de sus efectos indeseados están relacionados con su capacidad para modular respuestas celulares independientes de los receptores de estrógenos, algunas de las cuales se inician en la membrana celular. La preparación de derivados no permeables del tamoxifeno, con grupos amonio en la cadena lateral, han permitido conocer algunas respuestas a nivel de membrana como se describe en Marrero-Alonso J., Garcia-Marrero B., Gómez T. y Díaz

M. Functional inhibition of intestinal and uterine muscles by non-permeant triphenyl ethylene derivatives, Eur. J. Pharmacol. (2006) , 532, 115-127.

Pese a estos avances, en gran medida las bases moleculares de las acciones colaterales son desconocidas, debido a la falta de herramientas moleculares que permitan identificar las dianas celulares sobre las que se producen. Dentro de las posibles herramientas se encontrarían los derivados fluorescentes del fármaco. Aunque para otros compuestos se han desarrollado distintos derivados fluorescentes [R. W. Sinkeldam, N. J. Greco, Y. Tor, “Fluorescent Analogs of Biomolecular Building Blocks: Design, Properties, and Applications”, Chemical Reviews, (2010) , 110, 2579-2619], hay muy pocos trabajos sobre derivados del tamoxifeno, y ninguno de ellos es comercial.

Recientemente se ha comunicado la síntesis y caracterización de derivados fluorescentes del 4-hidroxi-Tamoxifeno (4-OH-Tx) [Rickert EL, Oriana S, Hartman-Frey C, Long X, Webb TT, Nephew KP, Weatherman RV (2010) Synthesis and characterization of fluorescent 4-hydroxytamoxifen conjugates with unique antiestrogenic properties. Bioconjugate Chemistr y . 21:903-910]. Estas modificaciones consisten en la conjugación del 4-OH-Tx con distintos fluoróforos, a saber, BODIPY, carboxifluoresceina y AlexaFluor 546, a través de un linker de 6 átomos de carbono (el 1, 6diaminohexano) sobre la cadena lateral del tamoxifeno. Tanto la incorporación del linker (que alarga la cadena lateral) como el tamaño del fluoróforo (que es muy voluminoso) , interfieren la unión del tamoxifeno a los receptores de estrógenos.

Por tanto, existe la necesidad de sintetizar compuestos con actividad similar al tamoxifeno y que posean un efecto mínimo sobre la afinidad del derivado por el receptor de estrógenos.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Breve descripción de la invención Un primer aspecto de la presente invención se refiere al compuesto de fórmula general (I) (a partir de ahora compuesto de la invención) :

(I)

o cualquiera de sus sales, donde: 5 X representa un grupo alquilo (C1-C10) o acilo: Y representa un grupo que se selecciona de la lista que comprende amino, amonio, tiol, éter, alquilo (C1-C3) , alquenilo (C2-C3) y alquinilo (C2-C3) ; R1 representa un fluoróforo, que puede estar unido al grupo Y directamente o mediante un grupo alquilo (C1-C3) ; preferiblemente R1 está unido directamente al grupo Y. 10 R2, R3 y R4, representan de manera independiente, un grupo que se selecciona de la lista que comprende H, OH,

NH2, SH, O-alquilo, O-acilo, NH-alquilo, NH-acilo, S-alquilo, alquilo, acilo y arilo; n y m tienen, independiente, un valor de entre 1 a 5; y p tiene un valor de entre 1 a 4.

Otro aspecto de la invención se refiere al procedimiento de obtención del compuesto de la invención, cuando Y es un grupo amino, tiol o éter, que comprende la reacción de un precursor de fórmula general (IV) con R1-L:

(IV) (I) 20 donde: X, R1, R2, R3, R4, n, m y p se han descrito anteriormente; Y’ es un grupo amino, OH o SH y L es un grupo saliente.

Un tercer aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula general (I) y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Opcionalmente dicha composición puede comprender otro principio activo Un cuarto aspecto de la presente invención se refiere al uso del compuesto de fórmula general (I) , para la identificación y evaluación de dianas moleculares del tamoxifeno distintas a los receptores de estrógenos, incluyendo transportadores y canales iónicos, así como otros lugares de unión a antiestrógenos (AEBS, antiestrogen-binding sites) .

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso del compuesto de la invención, para la elaboración de una composición farmacéutica. Preferiblemente para el tratamiento y/o prevención de enfermedades que cursan a través de la actividad estrogénica.

Además, otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición que comprende al menos un compuesto de fórmula general (I) y un disolvente orgánico no polar. Y el uso de dicha composición como pigmento láser y/o para la fabricación de un dispositivo láser o como resonador óptico.

Por tanto, otro aspecto más de la presente invención se refiere a un dispositivo láser que comprende el compuesto de la invención o la composición descrita anteriormente.

Descripción detallada de la invención En la presente invención se describe un nuevo derivado fluorescente del tamoxifeno, es decir, el compuesto de la invención, además se describe el proceso químico para su obtención, y sus diferentes utilidades o aplicaciones, tanto como herramienta molecular como alternativa farmacológica al tamoxifeno. El estudio de los efectos biológicos indican, además, que el compuesto de la invención ha resultado ser tan poderoso como el propio tamoxifeno en su faceta antiestrogénica, pero desprovistos de sus efectos secundarios.

La presente invención se basa en el hecho que los inventores han identificado un nuevo derivado del tamoxifeno que sorprendentemente permite identificar además del receptor de estrógenos dianas moleculares no convencionales del tamoxifeno (Figura 1B) , es decir, distintas al receptor de estrógenos, tanto intracelulares como de superficie celular y estudiar su farmacología molecular (Figura 1) . Además, el compuesto de la invención previene el crecimiento y la proliferación celular dependiente de estrógenos en la línea celular MCF7, procedente de un carcinoma mamario humano, de forma similar al tamoxifeno (Figura 2A) , pero no presenta estrogenicidad, es decir, que carece de la capacidad para inducir la activación del receptor de estrógenos (Figura 3A) . En ratas inmaduras, donde el tamoxifeno se comporta como un antagonista parcial, el compuesto de la invención antagoniza el efecto uterotrófico del etinil-estradiol de manera similar al tamoxifeno pero sólo a las dosis más elevadas.

Por el contrario, y de gran importancia biológica y farmacéutica, el compuesto de la invención carece de los efectos uterotróficos del tamoxifeno o del estradiol (Tabla 1) , no modifica ni el número de células epiteliales, ni su talla, ni aumenta el número de glándulas endometriales (Figura 4) , no modifica el peristaltismo intestinal (Figura 5A) ni las respuestas contráctiles del útero o la aorta en el rango de concentraciones (Figura 5B) donde el tamoxifeno provoca una respuesta espasmolítica... [Seguir leyendo]

1. Compuesto de fórmula general (I) :

(I)

o cualquiera de sus sales, donde: X representa un grupo alquilo (C1-C10) o acilo: 10 Y representa un grupo que se selecciona de la lista que comprende amino, amonio, tiol, éter, alquilo (C1-C3) ,

alquenilo (C2-C3) y alquinilo (C2-C3) ; R1 representa un fluoróforo, que puede estar unido al grupo Y directamente o mediante un grupo alquilo (C1-C3) ; R2, R3 y R4, representan de manera independiente, un grupo que se selecciona de la lista que comprende H, OH,

NH2, SH, O-alquilo, O-acilo, NH-alquilo, NH-acilo, S-alquilo, alquilo, acilo y arilo; 15 n y m tienen, independiente, un valor de entre 1 a 5; y p tiene un valor de entre 1 a 4.

2. Compuesto según la reivindicación 1, donde R2 y R3 son H.

3. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, donde R4 es H o OH.

4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde n, m o p tienen el valor de 1.

5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el fluoróforo se selecciona de la lista que 25 comprende AMCA, NBD, dansilo o 4-N, N-dimetilaminoftalimido.

6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde X es un grupo alquilo (C1-C3) .

7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde X es un alquilo C2. 30

8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 donde Y es un grupo amino.

9. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde dicho compuesto es de fórmula (II) :

NO2

N O N

N

O

(II)

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde Y es un grupo amonio y se representa por la fórmula general (III) :

(III)

donde: X, R1, R2, R3, R4, n, m y p se han descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7;15 Ra y Rb representan, de manera independiente, un grupo alquilo (C1-C10) ; y A- representa un anión.

11. Compuesto según al reivindicación 10, donde el anión es un ión haluro o sulfato.

12. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11, donde Ra o Rb representan, de manera independiente, un grupo alquilo (C1-C3) .

13. Compuesto según la reivindicación anterior, donde Ra o Rb son un grupo metilo.

14. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, donde R1 es un fluoróforo unido al grupo amonio mediante un grupo alquilo (C1-C3) .

15. Procedimiento de obtención del compuesto (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende la reacción de un precursor de fórmula general (IV) con R1-L:

(IV) (I) donde: X, R1, R2, R3, R4, n, m y p se han descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14; Y es un grupo amino, tiol o éter, Y’ es un grupo NH, OH o SH y L es un grupo saliente.

16. Procedimiento según la reivindicación 15, donde L es Cl, Br u OMs.

17. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 15 o 16, caracterizado porque, cuando X es un grupo CH2-CH2, Y es un grupo amino, y R2, R3 y R4 son hidrógeno, el precursor es el N-desmetiltamoxifeno.

18. Procedimiento según la reivindicación anterior, donde el N-desmetiltamoxifeno se obtiene mediante la desmetilación del tamoxifeno por tratamiento con alquil cloroformatos.

19. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula general (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

20. Composición farmacéutica según la reivindicación 19, que además comprende otro agente antitumoral.

21. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 19 o 20, donde el compuesto de fórmula general

(I) está en una cantidad de entre 0, 01 mg/kg/día a 10 mg/kg/día.

22. Uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para la identificación y evaluación de dianas moleculares del tamoxifeno distintas a los receptores de estrógenos.

23. Uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para la elaboración de una composición farmacéutica.

24. Uso del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para la elaboración de una composición farmacéutica para el tratamiento y/o prevención de enfermedades tratables o prevenibles a través de su actividad antiestrogénica que se seleccionan de la lista que comprende: cáncer, osteoporosis, infertilidad masculina (oligospermia) , ginecomastia, infertilidad femenina, condición fibroquística de mama o hipercolesterolemia.

25. Uso según la reivindicación 24, donde el cáncer es un cáncer de mama.

26. Composición que comprende al menos un compuesto de fórmula general (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 y un disolvente orgánico no polar.

27. Composición según la reivindicación anterior, donde el disolvente orgánico es un alcohol, dimetilsulfóxido, lípido graso, cetona o cualquiera de sus combinaciones.

28. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 26 o 27, donde el compuesto de fórmula (I) se encuentra en una concentración de entre 1 !M a 50 mM con respecto a la composición final.

29. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28 o del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, como pigmento láser.

30. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28 o del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para la fabricación de un láser.

31. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28 o del compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, como resonador óptico.

32. Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para aplicaciones en optoelectrónica, optofluídica, óptica, 5 medicina u oncología.

33. Uso según cualquier de las reivindicaciones 29 a 31, para aplicaciones en metodologías basadas en FRET o fotoactivación por medios láser.

34. Dispositivo láser que comprende el compuesto descrito en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 o la composición descrita según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28.

FIGURAS

Espectro de Fluorescencia del FLTX1 (10 mM en metanol)

350 400 450 500 550 600 650 700

Longitud de onda (nm)

Figura 1A

Figura 1B

Figura 1C

ES 2 428 464 Al

Veh. -8 -7 -6 -5

E2 100 pM

Log (compuesto) (M)

% Proliferación celular

120 100 80 20 0

100 pM

Log (compuesto) (M) Figura 2 A) B)

% Respuesta a estradiol (0.1 nM)

150

Log (compuesto) (M)

Log (compuesto) (M)

Figura 3

Figura 4

A)

120

FLUTAMOX 30

TENSION RELATIVA (%)

250 500 750 1000 1250 1500 1750

Tiempo (s) Figura 5

Figura 6

Longitud de onda (nm)

Figura 7

Intensidad