Composiciones para tratar una afección auto-inmune inflamatoria.

Medicamento que comprende esencialmente al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano.

Composiciones para tratar una afección auto-inmune inflamatoria

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de tratamiento de una afección autoinmune inflamatoria. La presente invención se refiere en particular a métodos para tratar una afección autoinmune inflamatoria y enfermedades inmunes relacionadas, usando un medicamento que comprende las células humanas Tr1 dirigidas contra la proteína humana de choque térmico.

Antecedentes

Las enfermedades inflamatorias autoinmunes afectan a millones de personas en todo el mundo y pueden tener efectos devastadores en la duración y la calidad de vida.

Las terapias convencionales para tratar las enfermedades inflamatorias autoinmunes en los seres humanos se basan en la inmunosupresión no específica, tales como, por ejemplo, aquellas mediadas por esteroides o agentes citotóxicos. Las estrategias más recientes incluyen el bloqueo de varias rutas de citocinas pro-inflamatorias, tales como las que involucran a TNF e IL-1. Sin embargo, ninguna de estas estrategias invierte el proceso pro-inflamatorio o cura la enfermedad. Cuando se suspende el tratamiento, se produce una reactivación de la inflamación por meses, provocando de ese modo un tratamiento de por vida con agentes inmunosupresores. Esto inevitablemente conduce a serios efectos secundarios.

Por lo tanto, existe una necesidad de nuevos tratamientos para las enfermedades autoinmunes inflamatorias.

Diversos estudios demostraron que las proteínas de choque térmico (HSPs) y, en particular, HSP60 y HSP70, constituyen un grupo de autoantígenos involucrados en la regulación de enfermedades autoinmunes inflamatorias.

Por lo tanto, se han propuesto terapias dirigidas a las HSPs para tratar enfermedades autoinmunes inflamatorias tales como la inmunización con lisado de E. coli o vacunas de ADN que comprenden una secuencia de ácido nucleico que codifica HSP60, HSP70 o HSP90 o su fragmento.

En la presente invención, el solicitante pretende proporcionar una alternativa de tratamiento para una enfermedad autoinmune inflamatoria basada en el uso de células Tr1 dirigidas a un HSP humano.

Zanin-Zhorov y otros J. Clin Invest. 116 : 2022-2032 (2006) describe que la proteína de choque térmico 60 mejora la función de la célula T reguladora cd4+ cd25+ a través de la señalización de TLh2 innato.

Sumario de la invención

Un objetivo de la invención es un medicamento que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano. Otro objetivo de la invención es una composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

Otro objetivo de la invención es el uso de una composición que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar una afección autoinmune inflamatoria.

De acuerdo con una modalidad de la invención, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección de artritis, preferentemente artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante y artritis idiopática juvenil. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección de esclerosis múltiple. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección inflamatoria intestinal, preferentemente enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una vasculitis, preferentemente enfermedad de Wegener y aterosclerosis. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es el asma. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es el rechazo de trasplantes o enfermedad de injerto contra huésped. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección inflamatoria del conducto biliar, preferentemente cirrosis biliar primaria y

Colangitis esclerosante primaria.

De acuerdo con otra modalidad, la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos usados para tratar una afección autoinmune inflamatoria.

De acuerdo con otra modalidad, la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigida contra un antígeno conocido que está involucrado en la afección autoinmune inflamatoria.

Otro objetivo de la invención es un proceso para tratar una afección autoinmune inflamatoria en un sujeto que lo necesita, dicho proceso comprende las etapas de:

obtener las células Tr1 dirigidas a un HSP humano, dichas células Tr1 se obtienen de una muestra de sangre de dicho sujeto,

clonar dichas células Tr1 dirigidas a un HSP humano,

expandir aún más los clones Tr1 obtenidos en la etapa anterior,

inyectar los clones Tr1 así obtenidos en dicho sujeto, preferentemente por vía intravenosa.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: producción IL-10 específica de clones Tr1 después de la activación de HSP60

La Figura 1 describe el incremento específico de la producción de IL-10 por los clones de células Tr1 en la presencia del antígeno específico HSP60. Los clones se activaron con o sin HSP60 en presencia de las células presentadoras de antígenos autólogas irradiadas. Después de 48 horas, la producción de IL-10 se midió por ELISA.

Figura 2: Perfil de secreción de citocinas de clones Tr1 específicos a HSP60

La secreción de IL-10, IL-4 e IFN de los clones de células Tr1 específicas a HSP60 se midieron en sobrenadantes de 48 horas de células activadas por anticuerpos monoclonales anti-CD3 + anti-CD28.

Figura 3: Actividad supresora in vitro de clones Tr1 HSP60

La actividad supresora de los clones Tr1 HSP60 se valoró evaluando la acción inhibidora de sus sobrenadantes en la proliferación de linfocitos T CD4+ autólogos. Los linfocitos T CD4+ se activaron usando anticuerpos monoclonales anti-CD3 + anti-CD28 e

Interleucina-2 en presencia o ausencia de los sobrenadantes de los clones Tr1 activados. La proliferación celular de las células T CD4+ autólogas se midió después de cinco días. Los resultados muestran que la adición de los sobrenadantes de células Tr1 a linfocitos T CD4+ inhibe la proliferación de células T.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Definición

El término "células Tr1" como se utiliza en la presente se refiere a las células que tienen en reposo el siguiente fenotipo CD4+CD25-FoxP3 y la capacidad de secretar altos niveles de IL-10 y niveles significativos de TGF-º en activación. Las células Tr1 se caracterizan, en parte, por su único perfil de citocinas: producen altos niveles de IL-10, niveles significativos de TGF-º y niveles intermedios de IFN-y, pero poco o nada de IL-4 o IL-2. La producción de citocinas típicamente se evalúa en cultivos de células después de la activación con activadores policlonales de linfocitos T tales como anticuerpos anti-CD3+ anti-CD28-o interleucina-2, PMA + ionomicina. Como alternativa, la producción de citocinas se evalúa en los cultivos de células después de la activación con el antígeno específico de células T presentado por las células presentadoras de antígeno. Los altos niveles de IL-10 corresponden con al menos aproximadamente 500 pg/ml, típicamente mayor de aproximadamente 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, ó 20 000 pg/ml o más. Los niveles significativos de TGF-º corresponden con al menos aproximadamente 100 pg/ml, típicamente mayor de aproximadamente 200, 300, 400, 600, 800, ó 1000 pg/ml o más.

Los niveles intermedios de IFN-y corresponden a concentraciones comprendidas entre 0 pg/ml y al menos 400 pg/ml, típicamente mayor de aproximadamente 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800, ó 2000 pg/ml o más. Poco o ningún IL-4 ó IL-2 corresponden con menos de aproximadamente 500 pg/ml, preferentemente menos de aproximadamente 250, 100, 75, ó 50 pg/ml, o menos.

El término "antígeno", como se utiliza en la presente se refiere a una proteína o péptido para el cual las células de esta invención se usan para modular, o para usar en cualquiera de los métodos de esta invención. En una modalidad, el término "antígeno" puede referirse a una molécula de un derivado sintético, o una molécula de origen natural, que comparte homología... [Seguir leyendo]

1. Medicamento que comprende esencialmente al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano.

2. Composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humana dirigida contra un HSP humano en conjunto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

3. Un medicamento de acuerdo con la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicha población de células Tr1 humanas es una población del clon Tr1 humano.

4. Un medicamento o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicha población de células Tr1 humanas se dirige contra HSP60, HSP70, HSP90 y mezclas de estos.

5. Un medicamento o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para usar en el tratamiento de una afección autoinmune inflamatoria.

6. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la enfermedad autoinmune inflamatoria es una afección de la artritis, preferentemente artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante y artritis idiopática juvenil.

7. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha enfermedad autoinmune inflamatoria es una esclerosis múltiple.

8. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección intestinal inflamatoria , preferentemente la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa.

9. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es una vasculitis, preferentemente la enfermedad de Wegener y la aterosclerosis.

10. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha enfermedad autoinmune inflamatoria es el asma.

11. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es el rechazo de trasplante o enfermedad del injerto contra el huésped.

12. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección inflamatoria del coducto biliar, preferentemente cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria.

13. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de la reivindicaciones 5 a 12, en donde el medicamento o composición farmacéutica que se administra a un sujeto que lo necesita comprende células humanas Tr1 autólogas a las células de dicho sujeto.

14. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 13, en donde se administran 104/kg a 109/kg de células Tr1 al sujeto que lo necesita.

15. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 14, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos usados para tratar una afección autoinmune inflamatoria .

16. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar una afección artrítica, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de corticoides, agentes de bloqueo del TNF, anti-interleucinas, anti-linfocitos B, moléculas anti-coestimuladoras, agentes tolerogénicos, proteínas anti-complemento, inhibidores de moléculas de señalización de células T, inhibidores de la migración celular, leflunomida, sulfasalazina, hidroxicloroquina, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, minociclina, D-penicilamina.

17. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15para tratar una afección de esclerosis múltiple, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la

composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de interferón-beta, acetato de glatiramer, mitoxantrona, ciclofosfamida, metotrexato, azatioprina o natalizumab.

18. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15para tratar una afección intestinal inflamatoria, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados del grupo de agentes de bloqueo del TNF, natalizumab, anti-ILI, anti-IL-6, anti-IL-12, anti-IL-17 y anti-IL-23; análogos de antagonista de receptor IL-1 (anakinra) ; 5 ácido aminosalicílico y análogos tales como mesalazina, sulfazalina, olsalazina, balsalazida; corticoides tales como prednisona, budesonida, hidrocortisona, prednisolona, metilprednisolona, betametasona, bedometasona, tixocortol.

19. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar la vasculitis, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de estatinas, aspirina, coagulantes de sangre, cumadina y corticoides, azatioprina, metotrexato, ciclofosfamida, anticuerpos antilinfocitos B, anticuerpos anti-TNF alfa y globulina anti-timocito.

20. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar el Asma, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de acción corta, agonistas selectivos de adrenoceptor beta2 , levalbuterol, terbutalina y bitolterol y otros agonistas adrenérgicos, medicamentos anticolinérgicos y glucocorticoides inhalados.

21. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar la enfermedad del injerto contra huésped y rechazo al trasplante, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de inhibidores de calcineurinas, inhibidores mTOR, agentes antiproliferativos, anticuerpos monoclonales dirigidos a CD25 o preparaciones de globulina anti-timocito y antilinfocito.

22. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15para tratar la inflamación autoinmune del conducto biliar o del hígado tal como la cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de los ácidos ursodeoxicólicos.

23. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 14, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno conocido que se involucra en la afección autoinmune inflamatoria.

24. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 23 para tratar una afección artrítica, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno de unión asociado, preferentemente contra colágeno de tipo II, HCgp39, variantes y mezclas de estos.

25. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 23para tratar una afección de esclerosis múltiple, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno asociado a esclerosis múltiple, preferentemente contra la proteína básica de mielina, proteína de proteolípido, proteína mielina de oligodendrocitos, variantes y mezclas de estos.

26. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 23 para tratar una afección intestinal inflamatoria, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno alimenticio de la dieta humana común, preferentemente contra ovoalbúmina, caseína, beta-lactoglobulina, proteína de soya, gliadina, cacahuetes, variantes y mezclas de estos.

Figura 1 Figura 2 Figura 3