Composiciones de lectina y procedimientos para modular una respuesta inmunitaria a un antígeno.

Una composición que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de fusión,

comprendiendo dicho polipéptido de fusión

una lectina que comprende al menos aproximadamente aminoácidos contiguos de una hemaglutinina del virusde la gripe y puede unirse a una diana que lleva antígeno; y

al menos aproximadamente 5 aminoácidos contiguos de una molécula de GM-CSF que puede unirse a unaproteína de la superficie celula.

Composiciones de lectina y procedimientos para modular una respuesta inmunitaria a un antígeno

Antecedentes de la invención Normalmente, la modulación específica de una respuesta inmunitaria a un antígeno en un sujeto requiere la administración de otra sustancia, por ejemplo, un adyuvante, en mezcla con el antígeno con el fin de iniciar y/o dirigir la modulación. Aunque los adyuvantes tradicionales tienen varias debilidades. Por ejemplo, muchos son preparaciones heterogéneas en bruto. Además, muchos son inmunomoduladores relativamente débiles, y algunos producen inflamación local grave que es inaceptable en seres humanos. Los polipéptidos solubles purificados, tales como citocinas, tienen algunas ventajas con respecto a los adyuvantes en bruto, pero su valor está limitado debido a que difunden del antígeno tras la administración. Aunque ciertas moléculas de la superficie celular pueden ser posibles inmunomoduladores como componentes de vacunas basadas en células, su aplicación generalmente implica transferencia génica en las células, que es frecuentemente problemático.

Por tanto, la invención satisface las necesidades sin cumplir hasta la fecha, proporcionando moléculas que pueden unirse a antígeno que llevan dianas, tales como células, virus y antígenos aislados, y que pueden servir de inmunomoduladores cuando se administran con una diana que lleva antígeno. Además, la invención proporciona composiciones que comprenden estas moléculas y procedimientos relacionados. Las composiciones y procedimientos de la invención también son útiles para otras aplicaciones, por ejemplo, cualquier aplicación en la que se desea unir un efector biológico, tal como un ligando de polipéptido para un receptor de la superficie celular, a una estructura diana, tal como un virus o una célula.

Operschall y col., (2000) Intervirology 43, 4-6 p322-330 describen una vacuna de ADN que codifica hemaglutinina del virus de la gripe coadministrada con un plásmido que codifica GM-CSF.

Descripción resumida de la invención Los aspectos y realizaciones de la presente invención se exponen en las reivindicaciones adjuntas.

Se describe una molécula multifuncional, por ejemplo, un polipéptido de fusión, que comprende una primera parte que puede unirse a una diana que lleva antígeno y una segunda parte que puede unirse a una célula. La primera parte puede ser un primer resto de unión a la superficie celular y la segunda parte puede ser un segundo resto de unión a superficie celular. El primer resto de unión a la superficie celular puede unirse a un virus o célula, por ejemplo, una célula tumoral, que comprende un antígeno. El segundo resto de unión a la superficie celular puede unirse a un polipéptido de la superficie celular, por ejemplo, un polipéptido de no inmunoglobulina, de una célula presentadora de antígeno (APC) . Así, la molécula multifuncional puede servir de puente o enlace entre una diana que lleva antígeno y una APC.

Como se usa en la presente memoria, una “diana que lleva antígeno” es una entidad que comprende un antígeno. Como se usa en la presente memoria, una “diana que lleva antígeno” incluye, por ejemplo, una célula completa que expresa un antígeno, una fracción de célula que comprende un antígeno, una fracción de membrana que comprende un antígeno, un virus que comprende un antígeno, una partícula viral que comprende un antígeno, o un antígeno, por ejemplo, un antígeno de polipéptido, que puede estar libre de cualquier otro material derivado de célula o derivado de virus. Las fracciones celulares pueden prepararse usando procedimientos conocidos para aquellos expertos en la materia tales como aquellos enseñados en Cell Biology A Laborator y Handbook (Academic Press 1994 Editor J. E. Celis ISBN 15-3) .

El término “antígeno” como se usa en la presente memoria se refiere a una molécula contra la que un sujeto puede iniciar una respuesta inmunitaria humoral y/o celular. Los antígenos pueden ser cualquier tipo de molécula biológica que incluye, por ejemplo, metabolitos intermedios simples, azúcares, lípidos y hormonas, además de macromoléculas tales como hidratos de carbono complejos, fosfolípidos, ácidos nucleicos y proteínas. Categorías comunes de antígenos incluyen, pero no se limitan a, antígenos virales, antígenos bacterianos, antígenos fúngicos,

protozoos y otros antígenos parasíticos, antígenos de tumor, antígenos que participan en enfermedad autoinmunitaria, alergia y rechazo de injerto, y otros diversos antígenos. En las composiciones de la invención se prefiere que el antígeno sea un polipéptido, por ejemplo, uno que comprende al menos siete aminoácidos.

Como se usa en la presente memoria, “célula presentadora de antígeno” o “APC” se refiere a células que ingieren y presentan antígeno a linfocitos T. Estas células incluyen leucocitos fagocíticos, macrófagos y células dendríticas,

linfocitos B y células endoteliales. Una “APC profesional” es una APC que puede activar constitutivamente un linfocito T. Las APC profesionales normalmente expresan constitutivamente moléculas de histocompatibilidad mayor de clase II y moléculas coestimulantes tales como B7-1 y/o B7-2.

Se describe una molécula multifuncional, la primera parte de la cual es una lectina. Así, la molécula multifuncional puede unirse a uno o más hidratos de carbono de una diana que lleva antígeno. La primera parte de la molécula 55 multifuncional puede ser una lectina y la segunda porción puede ser un ligando para una proteína de la superficie celular (por ejemplo, un ligando para un receptor de la superficie celular) . Preferentemente, la proteína de la superficie celular es un receptor de la superficie celular de una APC. Ligandos para un receptor de la superficie celular incluyen cualquier ligando que se unirá a una proteína de la superficie celular, y preferentemente incluyen, pero no se limitan a, una opsonina, citocina, molécula de adhesión, contrarreceptor de una molécula coestimulante de linfocitos T, una defensina, un ligando para una molécula de CD40, o una proteína de choque térmico, o una porción de cualquiera de estos ligandos, que incluye aproximadamente (o al menos aproximadamente) 5, 8, 10, 12, 15, 20, 25, 35, 50, 60, 70, 80, 100 ó 120 aminoácidos contiguos de un ligando tal. Preferentemente, la molécula multifuncional que comprende la primera y segunda partes comprende una secuencia de aminoácidos que puede unirse a una proteína de la superficie celular (por ejemplo, un receptor de la superficie celular) que incluye, pero no se limita a, una molécula de adhesión, una molécula coestimulante para un linfocito T, o un receptor para al menos uno de los siguientes tipos de moléculas: una citocina, una defensina, una proteína de choque térmico, una molécula de CD40 o una opsonina.

Una proteína de la superficie celular (por ejemplo, un receptor de la superficie celular) puede ser cualquier molécula de la superficie celular que pueda unirse a la porción de ligando de una molécula multifuncional de la invención. El receptor de la superficie celular puede ser una molécula de CD40, una molécula coestimulante de linfocitos T, una molécula de adhesión, o un receptor para una citocina, una defensina, una proteína de choque térmico, una opsonina o una molécula de adhesión. Proteínas de la superficie celular incluyen, pero no se limitan a, las moléculas de la superficie celular identificadas por el número de acceso de GenBank en el Apéndice I y II del documento WO2004/018698, o aquellas moléculas de la superficie celular que están codificadas por una molécula de ácido nucleico identificada por el número de acceso de GenBank en el Apéndice I o II del documento WO2004/018698.

El término “citocina” como se usa en la presente memoria se refiere a una molécula de polipéptido que es naturalmente secretada por células de mamífero y que se une a una proteína de la superficie celular sobre un leucocito, induciendo un cambio (por ejemplo, un cambio en el estado proliferativo, un cambio en el perfil transcripcional o un cambio en la propensión a migrar) en el leucocito (distinto de la mera ocupación de los receptores de leucocitos para la citocina) . “Cambio” se refiere a un aumento o disminución de al menos aproximadamente el 5% con respecto a en ausencia de una citocina. El término “citocina” también se refiere en la presente memoria a una molécula de polipéptido que es un ligando para un receptor para una citocina que se produce naturalmente.

Ejemplos de citocinas incluyen las siguientes: GM-CSF, II-2, IL-4, IL-6, IL-12, ligandos para receptores de hematopoyetina, ligandos para... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de fusión, comprendiendo dicho polipéptido de fusión una lectina que comprende al menos aproximadamente 10 aminoácidos contiguos de una hemaglutinina del virus de la gripe y puede unirse a una diana que lleva antígeno; y

al menos aproximadamente 5 aminoácidos contiguos de una molécula de GM-CSF que puede unirse a una proteína de la superficie celular.

2. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 1.

3. Una célula huésped que comprende la molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 1.

4. Una composición que comprende un polipéptido de fusión, comprendiendo dicho polipéptido de fusión

una lectina que comprende al menos aproximadamente 10 aminoácidos contiguos de una hemaglutinina del virus de la gripe y puede unirse a una diana que lleva antígeno; y

al menos aproximadamente 5 aminoácidos contiguos de una molécula de GM-CSF que puede unirse a una proteína de la superficie celular.

5. La composición según la reivindicación 4, que comprende además un antígeno.

6. La composición según la reivindicación 5, en la cual el antígeno es una célula completa que expresa un antígeno, una fracción de célula que comprende un antígeno, una fracción de membrana que comprende un antígeno, un virus que comprende un antígeno o una partícula viral que comprende un antígeno.

7. La composición según la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en la cual el antígeno es un antígeno viral, un antígeno bacteriano, un antígeno fúngico, un protozoo y otro antígeno parasítico o un antígeno de tumor.

8. Una composición que comprende un antígeno y que comprende además una molécula multifuncional que comprende una lectina que comprende al menos aproximadamente 10 aminoácidos contiguos de una hemaglutinina del virus

de la gripe y puede unirse a una diana que lleva antígeno; y al menos aproximadamente 5 aminoácidos contiguos de una molécula de GM-CSF que puede unirse a una proteína de la superficie celular. para modular una respuesta inmunitaria en un animal.

9. Una composición que comprende

un virus o una célula y que comprende además una molécula multifuncional, comprendiendo dicha molécula multifuncional una lectina que comprende al menos aproximadamente 10 aminoácidos contiguos de una hemaglutinina del virus de la gripe y puede unirse a una diana que lleva antígeno; y

al menos aproximadamente 5 aminoácidos contiguos de una molécula de GM-CSF que puede unirse a una proteína de la superficie celular. en la cual dicha composición comprende dicha molécula multifuncional unida a dicho virus o dicha célula y

comprende además alguno de dicha molécula multifuncional que no está unida a dicho virus o dicho célula para modular una respuesta inmunitaria en un animal.

10. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la cual la hemaglutinina del virus de la gripe está seleccionada del grupo que consiste en H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14 y H15.

11. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la cual GM-CSF es tanto GM-CSF de ratón como humano.