Composición farmacéutica que comprende extractos de Bupleurum krylovianum para su uso en el tratamiento de artritis y artritis reumatoide.

Uso de un extracto de B. krylovianum en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de artritis o artritisreumatoide,

en el que el extracto de B. krylovianum se obtiene moliendo Bupleurum krylovianum, añadir Bupleurumkrylovianum molido a una disolución acuosa de etanol y aislando el extracto del disolvente

Composición farmacéutica que comprende extractos de Bupleurum kr y lovianum para su uso en el tratamiento de artritis y artritis reumatoide.

Antecedentes

Campo técnico

La presente memoria descriptiva se refiere a una composición farmacéutica con una función inmunomoduladora, y en particular se refiere a un extracto de Bupleurum con una función inmunomoduladora.

Descripción de la técnica relacionada El mecanismo para los trastornos inmunitarios se ha informado en varios estudios. Muchos estudios indican que el factor de necrosis tumoral (TNF-α) expresado en exceso está relacionado con enfermedades inmunoinflamatorias tales como artritis reumatoide (AR) , enfermedad de Crohn, artritis psoriásica o espondilitis anquilosante.

El TNF-α funciona como citocinas, modula el reclutamiento de células, proliferación celular, muerte celular y regulación inmune. A bajas concentraciones en tejidos, el TNF-α puede aumentar los mecanismos de defensa del huésped contra infección. A altas concentraciones, el TNF-α produce inflamación en exceso conduciendo a lesiones a los órganos. Así, Brennan y col. informaron de que la eliminación de TNF en exceso de los sitios de inflamación puede tratar los trastornos inmunitarios producidos por respuestas inflamatorias (Brennan y col., 1989, Inhibitor y effect of TNF-α antibodies on synovial cell interleukin-1 production in rheumatoid arthritis. Lancet 2, 244-247) .

Feldmann y col. informaron de que TNF desempeña una función particularmente importante en la regulación de una cascada de eventos patógenos en AR, enfermedad de Crohn, psoriasis y otras enfermedades, ejemplificado por la rápida inducción de citocinas, tales como IL-1β y IL-6 (Feldmann y col., 2002, Discover y of TNF-α as a therapeutic target in rheumatoid arthritis: preclinical and clinical studies. Joint Bone Spine 69, 12-18) . TNF se expresa en exceso particularmente en modelos animales de AR (Keffer y col., 1991, Transgenic mice expressing human tumor necrosis factor: a predictive genetic model of arthritis. EMBO J 10, 4025-4031) . Se ha sugerido que una espectacular reducción en las concentraciones de IL-6 en suero producida en el plazo de 1 día de terapia de infliximab fue un efecto directo de la neutralización de TNF (Charles y col., 1999, Regulation of cytokines, cytokine inhibitors, and acute-phase proteins following anti-TNF-α therapy in rheumatoid arthritis. J Immunol 163, 1521-1528) .

Se han producido muchos agentes biológicos con inhibición de TNF-α, tales como adalimumab, etanercept, infliximab, DMARD (por ejemplo, metotrexato) o AINE. Debido a la rápida eficacia del fármaco, espectaculares efectos y buena tolerancia inmune, estos agentes biológicos se han convertido en productos comerciales convencionales. Sin embargo, los agentes biológicos son caros, requiriendo administración intravenosa y tienen efectos adversos, tales como riesgos de inducir respuestas inmunitarias no deseadas o infección. Es desafiante el desarrollo de un fármaco que es seguro para el sistema inmunitario.

Bupleurum es un género de plantas usado en la medicina china para reducir fiebre, aliviar dolor, eliminar toxinas y reducir inflamación. En la medicina china, Bupleurum trata principalmente saciedad y malestar en el pecho, amargor en la boca, sequedad en la garganta, crisis alternas de escalofrío y fiebre, ictericia, hepatitis, enterogastritis y colecistitis. La raíz de Bupleurum se usa normalmente. Se ha informado que saikosaponina, longispinogenina, esteroles, aceite de lípidos, isoflavonas y azúcares se aislaron de la raíz de una planta de Bupleurum, y se determinó la saikosaponina como el principal componente. Se ha demostrado que la saikosaponina a y d tienen efectos medicinales (Liu S.U., y col., Development Diversity of Bupleurum, Journal of Agricultural Research of China,

v. 53, nº 2 (junio de 2004) ) .

Bupleurum se ha estudiado entusiásticamente para la hepatitis. Sin embargo, no hay estudio o revista publicada que implemente la aplicación de Bupleurum a la inmunomodulación. Los inventores han estudiado la extracción de Bupleurum, en el que se identificó el principio activo del extracto, y se determinó la relación entre el principio activo y TNF-α o IL-6 in vivo. Finalmente, se ha desarrollado una novedosa composición farmacéutica con inmunomodulación.

Resumen Se facilita una descripción detallada con referencia a los dibujos adjuntos.

La presente descripción proporciona una composición farmacéutica con una función inmunomoduladora que comprende un extracto de Bupleurum obtenido moliendo Bupleurum, añadiendo Bupleurum molido a un disolvente y aislando el extracto del disolvente, en el que Bupleurum comprende Bupleurum kr y lovianum, Bupleurum longiradiatum, Bupleurum smithii, Bupleurum pusillum, Bupleurum longicaule, Bupleurum salicifolium, Bupleurum scorzonerifolium y Bupleurum con al menos una de las secuencias de nucleótidos seleccionadas de un grupo que consiste en SEC ID Nº 1-6 y una secuencia de nucleótidos con no más del 1 % de las divergencias de la secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº 1-6, o combinaciones de las mismas.

También se proporciona una composición farmacéutica con una función inmunomoduladora que comprende cariofilina o isómero cis como principio activo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La presente divulgación puede entenderse más completamente por la lectura de la posterior descripción detallada y ejemplos con referencias hechas a los dibujos adjuntos, en los que:

La Fig. 1 es un cromatograma de HPLC de los extractos de Bupleurum por una disolución acuosa al 95 % de etanol.

La Fig. 2 es un cromatograma de HPLC del extracto de Bupleurum kr y lovianum por una disolución acuosa al 95 % de etanol.

La Fig. 3a es un espectro de RMN 1H del cristal (1) en el Ejemplo 3, y la Fig. 3b muestra un espectro de RMN 1H del cristal (2) en el Ejemplo 3.

La Fig. 4a es un cromatograma de HPLC de cariofilina, y la Fig. 4b muestra un cromatograma de HPLC de isocariofilina.

La Fig. 5 es la inhibición de TNF-α en un modelo animal inflamatorio inducido por LPS por diferentes cantidades del extracto de etanol de Bupleurum.

La Fig. 6 es la inhibición de IL-6 en un modelo animal inflamatorio inducido por LPS por las cantidades del extracto de etanol de Bupleurum.

La Fig. 7 es la inhibición de TNF-α en un modelo animal inflamatorio inducido por LPS por el extracto de etanol de Bupleurum con el tiempo.

La Fig. 8 es la inhibición de IL-6 en un modelo animal inflamatorio inducido por LPS por el extracto de etanol de Bupleurum con el tiempo.

La Fig. 9 es la inhibición de edema de la pata trasera en un modelo animal de edema de la pata trasera inducido por carragenina por el extracto de etanol de Bupleurum.

La Fig. 10 es la inhibición de artritis en un modelo animal de artritis inducida por adyuvante por el extracto de etanol de Bupleurum.

La Fig. 11 es la inhibición de artritis en un modelo animal de artritis inducida por colágeno por el extracto de etanol de Bupleurum.

La Fig. 12 es la inhibición de TNF-α en una línea celular U937 por cariofilina.

La Fig. 13 es la inhibición de TNF-α en una línea celular U937 por isocariofilina.

La Fig. 14 es la inhibición de IL-6 en una línea celular U937 por cariofilina.

La Fig. 15 es la inhibición de IL-6 en una línea celular U937 por isocariofilina.

Descripción detallada La invención proporciona el uso de un extracto de B. kr y lovianum en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de artritis o artritis reumatoide, en el que el extracto de B. kr y lovianum se obtiene moliendo Bupleurum kr y lovianum, añadiendo el Bupleurum kr y lovianum molido a una disolución acuosa de etanol y aislando el extracto del disolvente.

Específicamente, Bupleurum comprende Bupleurum kr y lovianum.

Mientras que algunas plantas medicinales son abundantes, otras no. Las plantas medicinales con morfología o nombres similares algunas veces producen confusión, intercambiándose. La identificación tradicional de plantas medicinales requiere de un experto que considere la morfología de la planta, y sabor, y que realice examen microscópico. Una vez las plantas muestran morfología similar o pierden su sabor original, normalmente son indistinguibles, pudiendo conducir a baja eficacia medicinal o envenenar. Por tanto, Bupleurum se identifica por polimorfismo de ADN cromosómico y divergencia de secuencias de nucleótidos del espaciador transcrito interno (ITS) de ARN ribosómico (ARNr) . Así, Bupleurum comprende Bupleurum con una secuencia de nucleótidos seleccionada... [Seguir leyendo]

1. Uso de un extracto de B. kr y lovianum en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de artritis o artritis reumatoide, en el que el extracto de B. kr y lovianum se obtiene moliendo Bupleurum kr y lovianum, añadir Bupleurum kr y lovianum molido a una disolución acuosa de etanol y aislando el extracto del disolvente.

2. El uso según la reivindicación 1, en el que el volumen del disolvente es 5 10 veces el de B. kr y lovianum.

3. El uso según la reivindicación 1, en el que el tiempo para la extracción es 2 a 24 horas.

4. El uso según la reivindicación 1, en el que el extracto se calienta adicionalmente a reflujo.

5. El uso según la reivindicación 1, en el que la extracción es bajo temperatura ambiente a una temperatura de ebullición de la disolución acuosa de etanol.

6. El uso según la reivindicación 1, en el que el extracto comprende cariofilina o isómero cis como principio activo.