Un virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (SRRP) que comprende una secuencia representada porSEC ID Nº:

1 o por una secuencia que tiene al menos el 95 % de identidad de secuencia con SEC ID Nº:1.

Vacuna contra el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino basada en aislado JA-142 aislada

Antecedentes de la invención

Campo de la Invención

La presente invención se refiere, en general, al virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (SRRP) atípico avirulento atenuado (VSRRP) y a las vacunas de virus vivo correspondientes para su administración a ganado porcino para conferir una inmunidad eficaz en el ganado porcino frente a VSRRP.

Descripción de la técnica anterior

El SRRP surgió a finales de los años 80 como una enfermedad vírica importante del ganado porcino. El VSRRP causa insuficiencia reproductiva grave en cerdas gestantes, manifestada en forma de partos prematuros, aumento del número de mortinatos, cerdos momificados y nacidos débiles, tasa de partos disminuida y retraso en la vuelta al estro. Además, el sistema respiratorio del ganado porcino infectado con VSRRP se ve afectado desfavorablemente, lo que se demuestra por lesiones que aparecen en los pulmones del ganado porcino infectado. Para combatir los problemas asociados con la infección por VSRRP, se han desarrollado vacunas que conferían inmunidad a las cepas de VSRRP existentes entonces.

Las epidemias de una forma excepcionalmente grave de SRRP, denominado en lo sucesivo en el presente documento “SRRP atípico”, se reconoció por primera vez en Norteamérica en la última parte de 1996. Se diferenciaban de las epidemias de “SRRP típico” en que: 1) los signos clínicos eran más prolongados así como más graves; 2) la incidencia de abortos era superior, especialmente durante la primera parte y la mitad de la gestación; 3) existía una mayor incidencia de mortalidad de cerdas nulíparas y mutíparas; 4) el VSRRP se aislaba menos frecuentemente de fetos abortados, cerdos mortinatos y cerdos nacidos vivos —quizá porque los abortos eran más frecuentemente el resultado de una enfermedad maternal aguda más que de una infección transplacentaria; 5) las lesiones pulmonares de los cerdos jóvenes afectados eran más amplias; y 6) las vacunas disponibles en el mercado proporcionaban escasa o ninguna protección. En su conjunto, estas observaciones indicaban la emergencia de cepas más virulentas y antigénicamente diferentes de VSRRP y la necesidad de una nueva generación de vacunas contra SRRP.

El procedimiento usado más frecuentemente para producir vacunas de virus vivo atenuado es realizar pases en serie del virus en un sustrato (habitualmente un cultivo celular) distinto del huésped natural (S) hasta que se atenúe lo suficiente (es decir, se reduzca su virulencia o capacidad para producir enfermedades) para usarlo como vacuna. Para el primer pase, se infecta un cultivo celular con el inóculo seleccionado. Después de obtener pruebas claras de replicación de virus (por ejemplo, efectos citopáticos inducidos por virus [ECP] en las células infectadas) , se usa una alícuota del medio de cultivo celular, o células infectadas, o ambas, del primer pase para infectar un segundo cultivo celular. El procedimiento se repite hasta que una o más mutaciones críticas en el genoma viral causan una atenuación suficiente de modo que el virus pueda usarse con seguridad como vacuna. El grado de atenuación se determina habitualmente empíricamente exponiendo al huésped natural (S) a niveles de pase progresivamente mayores del virus.

El procedimiento anterior es básicamente válido y se ha usado con éxito para el desarrollo de numerosas vacunas para uso humano y veterinario. Sin embargo, es relativamente ineficaz porque la fase logarítmica de la replicación de virus, durante la que es más probable que se produzcan mutaciones, se completa con frecuencia mucho antes de que se hagan visiblemente evidentes pruebas de la replicación viral.

Murtaugh y col. (1995) Archives Virol. 40, 1451-1460 compara las secuencias que codifican proteínas estructurales de las cepas víricas VR-2332 y Lelystad del virus de SRRP. El análisis comparativo de secuencias indica que había grados de identidad de aminoácidos con los marcos de lectura abiertos del virus Lelystad que variaban del 55 % en ORF5 al 79 % en ORF6.

Mengelin y col. (1999) A. J. V. 60 (3) , 334-340 describe la identificación y evaluación clínica de cepas silvestres relacionadas con vacuna sospechosas de virus del syndrome respiratorio y reproductivo porcino. Se concluyó que en piaras de ganado porcino, la cepa de la vacuna puede haber persistido y mutado a una forma menos atenuada.

El documento EP 0835929 A1 describe una nueva cepa atenuada (CNCM Institut Pasteur 1-1642) de virus del SRRP, junto con un procedimiento de replicación de atenuación de la misma usando un clon obtenido a partir de células de hígado de mono MA-104 (CNCM Institut Pasteur 1-1643) .

El documento US 5.476.778 desvela un procedimiento de atenuación de virus del síndrome respiratorio y de infertilidad porcino que comprende pasar el virus por una línea celular de simio en condiciones bien definidas.

El documento US 5.587.164 divulga un procedimiento para cultivar virus del SRRP en un cultivo hístico que es susceptible a la infección para replicar el virus en una cantidad suficiente para proteger animales contra el SRRP o puede usarse para diagnosticar SRRP o identificar la estructura molecular de virus del SRRP para desarrollar productos recombinantes, comprendiendo dicho procedimiento inocular los virus en el tejido hístico y recolectar el virus replicado

Por lo tanto, existe la necesidad indudable en la técnica de una vacuna que confiera una inmunidad eficaz contra cepas de VSRRP, incluyendo cepas de VSRRP atípicas recientemente descubiertas. También existe la necesidad en la técnica de un procedimiento de preparación de dicha vacuna. Por último, lo que se necesita es un procedimiento de pase de un virus que atenúe el virus más eficazmente de lo que hasta ahora se creía posible, con el virus atenuado resultante generando anticuerpos específicos de VSRRP en ganado porcino, confiriendo de este modo una inmunidad eficaz frente a una infección posterior por VSRRP.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a las realizaciones (1) a (21) siguientes:

(1) Un virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (SRRP) que comprende una secuencia representada por SEC ID Nº:1 o por una secuencia que tiene al menos el 95 % de identidad de secuencia con SEC ID Nº:1.

(2) El virus de la realización (1) , comprendiendo el virus la secuencia representada por SEC ID Nº:1.

(3) Un virus del SRRP que tiene el número de acceso ATCC VR-2638.

(4) El virus de la realización (1) , comprendiendo el virus la secuencia representada por SEC ID Nº:2.

(5) El virus de una cualquiera de las realizaciones (1) a (3) , atenuado por un procedimiento para atenuar un virus que incluye las etapas de replicar sucesivamente dicho virus mediante inoculación y replicación del virus en cultivos celulares individuales respectivos hasta lograr la atenuación, retirar las muestras que contienen virus de al menos determinados de dichos cultivos celulares mientras el virus se está replicando a una velocidad logarítmica y antes de la inducción de efectos citopáticos en dichos determinados cultivos celulares e inocular el siguiente pase de cultivo celular respectivo con dichas muestras.

(6) El virus de la realización (5) , produciéndose dicha etapa de retirada aproximadamente 24 horas después de la inoculación de dichos cultivos celulares.

(7) El virus de la realización (5) , comprendiendo dicho cultivo celular una monocapa de células que tiene una confluencia superior a aproximadamente el 70 %.

(8) El virus de la realización (5) , que además comprende la etapa de analizar periódicamente dicho virus progenie para evaluar la atenuación.

(9) El virus de la realización (5) , que además comprende las etapas de conservar dichos determinados cultivos celulares después de dicha etapa de retirada y observar si la inducción de efectos citopáticos tiene lugar en dichos cultivos celulares conservados.

(10) El virus de la realización (5) , comprendiendo dicha inoculación el número más pequeño de virus que da como resultado en última instancia ECP.

(11) El virus de una cualquiera de... [Seguir leyendo]

1. Un virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (SRRP) que comprende una secuencia representada por SEC ID Nº:1 o por una secuencia que tiene al menos el 95 % de identidad de secuencia con SEC ID Nº:1.

2. El virus de la reivindicación 1, comprendiendo el virus la secuencia representada por SEC ID Nº:1.

3. Un virus del SRRP que tiene el número de acceso ATCC VR-2638.

4. El virus de la reivindicación 1, comprendiendo el virus la secuencia representada por SEC ID Nº:2.

5. El virus de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, atenuado por un procedimiento para atenuar un virus que incluye las etapas de replicar sucesivamente dicho virus mediante inoculación y replicación del virus en cultivos celulares individuales respectivos hasta lograr la atenuación, retirar las muestras que contienen virus de al menos determinados de dichos cultivos celulares mientras el virus se está replicando a una velocidad logarítmica y antes de la inducción de efectos citopáticos en dichos determinados cultivos celulares e inocular el siguiente pase de cultivo celular respectivo con dichas muestras.

6. El virus de la reivindicación 5, produciéndose dicha etapa de retirada aproximadamente 24 horas después de la inoculación de dichos cultivos celulares.

7. El virus de la reivindicación 5, comprendiendo dicho cultivo celular una monocapa de células que tiene una confluencia superior a aproximadamente el 70 %.

8. El virus de la reivindicación 5, que además comprende la etapa de analizar periódicamente dicho virus progenie para evaluar la atenuación.

9. El virus de la reivindicación 5, que además comprende las etapas de conservar dichos determinados cultivos celulares después de dicha etapa de retirada y observar si la inducción de efectos citopáticos tiene lugar en dichos cultivos celulares conservados.

10. El virus de la reivindicación 5, comprendiendo dicha inoculación el número más pequeño de virus que da como resultado en última instancia ECP.

11. El virus de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, habiéndose pasado dicho virus un mínimo de 200 veces en cultivo celular.

12. El virus de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, estando dicho virus atenuado.

13. El virus de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, siendo dicho virus avirulento.

14. El virus de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, siendo dicho virus capaz de generar respuestas de anticuerpos en ganado porcino.

15. El virus de la reivindicación 14, siendo dicha respuesta de anticuerpos específica para cepas de virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino.

16. El virus del SRRP atenuado de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, obtenido mediante atenuación de un virus que tiene una secuencia de ácido nucleido representada por SEC ID Nº:2.

17. Una vacuna que comprende el virus según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

18. La vacuna de la reivindicación 17, que además comprende un agente vehículo farmacológicamente compatible.

19. Una secuencia de ácido nucleico aislada que comprende al menos el 95 % de identidad de secuencia con SEC ID Nº:1.

20. Una secuencia de ácido nucleico aislada que comprende la secuencia tal como se muestra en SEC ID Nº:1.

21. La vacuna tal como se define en la reivindicación 17 ó 18 para su uso en la inmunización de ganado porcino contra el síndrome respiratorio y reproductivo porcino, en la que dicha inmunización comprende administrar dicha vacuna a dicho ganado porcino.