Uso de colagenasa G recombinante, colagenasa H recombinante y pz-peptidasa recombinante para el tratamiento de enfermedades que cursan con alteraciones del colágeno.

Uso de colagenasa G recombinante, colagenasa H recombinante y pz-peptidasa recombinante para el tratamiento de enfermedades que cursan con alteraciones del tejido conectivo. En concreto se refiere al uso de dichas enzimas, donde la proporción colagenasa G recombinante, colagenasa H recombinante es de 1:3, y a su uso secuencial, administrando primero colagenasa G y después colagenasa H.

Uso de colagenasa G recombinante, colagenasa H recombinante V pzpeptidasa recombinante para el tratamiento de enfermedades que cursan con alteraciones del colágeno.

La presente invención se encuentra dentro del campo de la de la biología molecular, la biotecnología y la medicina, y se refiere al uso de colagenasa G recombinante, colagenasa H recombinante y pz-peptidasa recombinante para el tratamiento de enfermedades que cursan con alteraciones del colágeno. En concreto se refiere al uso de dichas enzimas, donde la proporción colagenasa G recombinante, colagenasa H recombinante es de 1:3, y a su uso secuencial, administrando primero colagenasa G y después colagenasa H.

ESTADO DE LA TÉCNICA

El colágeno es el principal constituyente estructural de los mamíferos y constituye una gran proporción del contenido proteico total de la piel y otras partes del cuerpo. Numerosos traumas de la piel, como quemaduras, cirugías, infecciones, y accidentes, se caracterizan frecuentemente por la acumulación errática de tejido fibroso rico en colágeno y con un alto contenido en proteoglucanos. Además de reparar el tejido normal que ha sido destruido o dañado, se acumulan depósitos excesivos y desfigurantes de colágeno. El exceso de colágeno se ha atribuido a un mal balance entre la síntesis y la degradación de colágeno.

Numerosas enfermedades y condiciones patológicas están asociadas con el exceso de depósito y acumulación errática de tejido fibroso rico en colágeno. Tales enfermedades y condiciones patológicas se han denominado colectivamente como "enfermedades que cursan con alteraciones del colágeno". Las colagenasas se han empleado para tratar varias enfermedades que cursan con alteraciones del colágeno.

Las colagenasas son enzimas proteasas que se unen específicamente a secuencias de aminoácidos Pro-X-Gly-Pro, donde X es normalmente un aminoácido neutro. Estas secuencias son frecuentes en colágenos y raramente se dan en otro tipo de proteínas, de ahí su alta especificidad. Además, así como otros enzimas proteasas son capaces de degradar el colágeno desnaturalizado, las colagenasas G y H son las únicas capaces de atacar y degradar a triple hélice de colágeno en condiciones nativas encontradas comúnmente en tejido conectivo (Seifter y Harper, 1970. Methods Enzymol. 19, 613-635; Harper, 1980. Ann. Rev. Biochem. 49, 1063-1078; Peterkofsky 1982. Methods Enzymol. 82, 453-471)

La PZ-peptidasa se considera un enzima esencial en la degradación del colágeno en colaboración con proteasas colagenolíticas. Las propiedades de la

Actualmente, el tratamiento de las enfermedades relacionadas con colágeno se lleva a cabo mediante una combinación en relación 1:1 de colagenasa G y H procedente de la fermentación de C/ostridium histolyticum y purificadas cromatográficamente, (W02007/089851A3) . Algunas de estas enfermedades son la enfermedad de Dupuytren (US005589171A) , o enfermedades oftálmicas (US4174389) .

En todos los casos se expone el empleo de una mezcla de colagenasa (Col I y Col 11 o bien Col H y Col G) . Este hecho se ha debido a que hasta la fecha todos los procedimientos de obtención de este enzima han sido mediante la purificación del extracto total producido por la fermentación de Closfridium hisfolyticum. En el extracto total de esta fermentación se obtiene ColG y ColH conjuntamente, en proporción 1 :1. Posteriormente se procede a un proceso de purificación mediante cromatografía para alcanzar una mezcla de ColG y ColH suficiente como para ser empleada como medicamento, como es el caso del Xiaflex, el primer medicamento a base de colagenasas aprobado por la FDA para el tratamiento de la enfermedad de Dupuytren.

Xiaflex se facilita como un polvo liofilizado, que debe ser reconstituido en un diluyente antes de su uso. La dosis es de 0.58 mg por inyección en un cordón palpable metacarpofalangeal, o interfalangeal. Administrar cada 2 horas, 3 veces en intervalos de 4 semanas.

Este producto cursa con los siguientes efectos secundarios: Daño en los ligamentos, ruptura de tendones, CRPS (complex regional pain síndrome) , edema periférico, contusión, dolor.

Xiaflex contiene colagenasa AUX-I y colagenasa AUX-II, aislados y purificadas' de la fermentación de las bacterias Closfridium hisfolyticum.

La colagenasa AUX-I es una cadena simple de polipéptidos que consiste aproximadamente en 1000 aminoácidos de secuencia conocida. Se observa un peso molecular de 114 kiloDaltons (kDa) . Pertenece a la clase I de Colagenasas de Closfridium hysfoliticum.

La colagenasa AUX-II es una cadena simple de polipéptidos que consiste aproximadamente en 1000 aminoácidos de secuencia conocida. Se observa un peso molecular de 113 kiloDaltons (kDa) . Pertenece a la clase 11 de Colagenasas de Closridium hysfoliticum.

No obstante, estos tratamientos poseen limitaciones derivadas de la fuente de origen y de la combinación de las colagenasas G y H en proporción 1: 1 que hacen del medicamento, un producto difícil de controlar en su dosificación y tratamiento. Los efectos secundarios más llamativos son:

1. Ruptura de tendón y daños serios en las extremidades tratadas

2. Reacciones alérgicas

3. Problemas de coagulación

Es necesario, por tanto, encontrar un tratamiento alternativo que permita alcanzar un mayor efecto sin los efectos secundarios de los medicamentos actuales.

DESCRIPCiÓN DE LA INVENCiÓN

Los autores de la presente invención han identificado el efecto terapéutico superior del empleo de la colagenasa G (CoIG ó AUX-I) y H (CoIH ó AUX-II) recombinantes (rCoIG y rCoIH) , de forma separada o combinada, y más específicamente en relación 1:3, para alcanzar efectos farmacológicos que actualmente no se pueden alcanzar con los medicamentos actuales que tienen como principio activo colagenasa, y que además permite evitar los efectos laterales negativos derivados del empleo de colagenasas obtenidas por fermentación, y en proporciones 1: 1. Asimismo, los tratamientos farmacológicos promovidos por la PZ-peptidasa pueden ser complementarios a los de la ColG y ColH al actuar sobre sustratos más pequeños (oligopéptidos) y no sobre colágeno completo.

Por tanto, un primer aspecto de la invención se refiere a una composición, de ahora en adelante composición de la invención, que comprende colagenasa G Y colagenasa H en una proporción 1 :3.

En una realización preferida de este aspecto, la composición de la invención además comprende PZ-Peptidasa. En otra realización preferida, la composición además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra realización más preferida, la composición de la invención comprende otro principio activo.

Otro aspecto de la invención se refiere a la composición de la invención para su uso como medicamento, o alternativamente, al uso de la composición de la invención para la elaboración de un medicamento.

Otro aspecto se refiere al uso de la composición de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedades que cursen con desórdenes del tejido conectivo, o alternativamente a la composición de la invención para el tratamiento de enfermedades que cursen con desórdenes del tejido conectivo.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, la enfermedad que cursa con desórdenes del tejido conectivo es una fibromatosis. En una realización preferida de este aspecto de la invención, la fibromatosis S6 selecciona de la lista que comprende: contractura palmar de Dupuytren enfermedad de La Peyronie, enfermedad de Ledderhose o fibromatosis de la aponeurosis plantar, o la existencia de tejido fibroso en el lóbulo de la oreja En esta memoria se entiende por desórdenes del tejido conectivo a enfermedades que cursan con acumulaciones de placas subdérmicas de dicha tejido.

El término fibromatosis refiere a un grupo de benigno tejido fino suave tumores cuáles tienen ciertas características en campo común, incluyendo la ausencia de características citológicas y clínicas malignas, a un cuadro histológico constante con la proliferación de fibroblastos bien distinguidos, una estructura de crecimiento infiltrativa, y un comportamiento clínico agresivo con la repetición local frecuente. Incluye... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende colagenasa G recombinante y colagenasa H recombinante en una proporción 1 :3.

2. La composición según la reivindicación anterior, que además comprende PZ-Peptidasa recombinante.

3. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

4. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que además comprende otro principio activo.

5. El uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para la elaboración de un medicamento.

6. Una preparación combinada que comprende colagenasa G recombinante y colagenasa H recombinante en una proporción 1 :3.

7. La preparación combinada según la reivindicación anterior, que además comprende PZ-Peptidasa recombinante.

8. La preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 6-7, que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. La preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 6-8, que además comprende otro principio activo.

10. El uso de una preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 6-9, para su uso por separado, simultáneo o secuencial como medicamento.

11. El uso de una preparación combinada que comprende colagenasa G recombinante y colagenasa H recombinante en una proporción 1 :3, para la elaboración de un medicamento, caracterizado porque se administra primero la colagenasa G recombinante, y después la colagenasa H recombinante.

12. El uso de una preparación combinada que comprende colagenasa G recombinante y colagenasa H recombinante en una proporción 1:3, y además PZ-peptidasa recombinante, para la elaboración de un medicamento, caracterizado porque se administra primero la colagenasa G recombinante, después la colagenasa H recombinante, y por último la PZPeptidasa recombinante.

13. Forma farmacéutica que comprende la composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, o una preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 6-9.

14. Forma farmacéutica según la reivindicación anterior que se selecciona de la lista que comprende: emplasto, pomada, pasta, crema, solución, suspensión, emulsión, loción, linimento, jalea, gel, espuma, polvo, o cualquiera de sus combinaciones.

15. Forma farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 13-14, donde la forma farmacéutica es una solución.

16. Forma farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 13-14, donde la forma farmacéutica es una crema.

17. Forma farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 13-14, donde la forma farmacéutica es un gel.

18. El uso de la composición según cualquiera de las composiciones 1-4, de

una preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 6-9, o de una forma farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 13-17, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedades que cursen con alteraciones del tejido conectivo.

19. El uso de la composición, de una preparación combinada o de una forma farmacéutica según la reivindicación 18, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la fibromatosis.

20. El uso de la composición, de una preparación combinada o de una forma farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 18-19, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad que se selecciona de la lista que comprende: contractura palmar de Dupuytren, enfermedad de La Peyronie, enfermedad de Ledderhose o fibromatosis de la aponeurosis plantar.

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Fig.1

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"j......., . ........ .., .., .

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Fig.2

A B

kDa Fig.4

<110> zurko Research

<120> Uso de colagenasa G recombinatante, cola~enasa H recombinante y pz-peptidasa recombinante para el tratamlento de enfermedades que cursan con alteraciones del colágeno.

<130> zurko 2281

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1008

<212> PRT

<213> Artificial sequence <220>

<223> colagenasa G

<400> 1

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100 105 110

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Ile Asn Glu Leu Lys Ala Leu Gly Leu Tyr Gly Asn Ile Thr Ser Ala 210 215 220

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Tyr Lys phe Asn Thr Asn Ile Asn Gly val Ser Thr ASp Asn Gly Gly 370 375 380

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450 455 460

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610 615 620

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Ile Ala Lys val Thr Gly Pro Ser Thr Gly Ala Val Gly Arg Asn Ile 690 695 700

Glu phe Ser Gly Lys Asp Ser Lys ASp Glu ASp Gly Lys rle val Ser 705 710 715 720 Tyr ASp Trp ASp phe Gly ASp Gly Ala Thr Ser Arg Gly Lys Asn Ser 725 730 735

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Ser Thr Lys Gly Arg His Tyr val Phe rle Tyr Lys Hi s ASp Ser Ala 865 870 875 880

Ser Asn rle Ser Tyr Ser Leu Asn rle Lys Gly Leu Gly Asn Glu Lys885 890 895

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<212> DNA

<213> Arti fi cial sequence <220>

<223> colagenasa G y péptido señal <400> 3

atgaaaaaaa atattttaaa gattcttatg gatagttatt ctaaagaatc taaaattcaa 60

actgtacgta gggttacgag tgtatcactt ttagcggtat atcttactat gaatacttca 120 agtttagttt tagcaaaacc aatagaaaat actaatgata ctagtataaa aaatgtggag 180 aaattaagaa atgctccaaa tgaagagaat agtaaaaagg tagaagatag taaaaatgat 240 aaggtagaac atgtgaaaaa tatagaagag gcaaaggttg agcaagttgc acccgaagta 300 aaatctaaat caactttaag aagtgcttct atagcgaata ctaattctga gaaatatgat 360 tttgagtatt taaatggttt gagctatact gaacttacaa atttaattaa aaatataaag 420 tggaatcaaa ttaatggttt atttaattat agtacaggtt ctcaaaagtt ctttggagat 480 aaaaatcgtg tacaagctat aattaatgct ttacaagaaa gtggaagaac ttacactgca 540 aatgatatga agggtataga aactttcact gaggttttaa gagctggttt ttatttaggg 600 tactataatg atggtttatc ttatttaaat gatagaaact tccaagataa atgtatacct 660 gcaatgattg caattcaaaa aaatcctaac tttaagctag gaactgcagt tcaagatgaa 720 gttataactt ctttaggaaa actaatagga aatgcttctg ctaatgctga agtagttaat 780 aattgtgtac cagttctaaa acaatttaga gaaaacttaa atcaatatgc tcctgattac 840 gttaaaggaa cagctgtaaa tgaattaatt aaaggtattg aattcgattt ttctggtgct 900 gcatatgaaa aagatgttaa gacaatgcct tggtatggaa aaattgatcc atttataaat 960 gaacttaagg ccttaggtct atatggaaat ataacaagtg caactgagtg ggcatctgat 1020 gttggaatat actatttaag taaattcggt ctttactcaa ctaaccgaaa tgacatagta 1080 cagtcacttg aaaaggctgt agatatgtat aagtatggta aaatagcctt tgtagcaatg 1140 gagagaataa cttgggatta tgatgggatt ggttctaatg gtaaaaaggt ggatcacgat 1200 aagttcttag atgatgctga aaaacattat ctgccaaaga catatacttt tgataatgga 1260 acctttatta taagagcagg ggataaggta tccgaagaaa aaataaaaag gctatattgg 1320 gcatcaagag aagtgaagtc tcaattccat agagtagttg gcaatgataa agctttagag 1380 gtgggaaatg ccgatgatgt tttaactatg aaaatattta atagcccaga agaatataaa 1440 tttaatacca atataaatgg tgtaagcact gataatggtg gtctatatat agaaccaaga 1500 gggactttct acacttatga gagaacacct caacaaagta tatttagtct tgaagaattg 1560 tttagacatg aatatactca ctatttacaa gcgagatatc ttgtagatgg tttatggggg 1620 caaggtccat tttatgaaaa aaatagatta acttggtttg atgaaggtac agctgaattc 1680 tttgcaggat ctacccgtac atctggtgtt ttaccaagaa aatcaatatt aggatatttg 1740 gctaaggata aagtagatca tagatactca ttaaagaaga ctcttaattc agggtatgat 1800 gacagtgatt ggatgttcta taattatgga tttgcagttg cacattacct atatgaaaaa 1860 gatatgccta catttattaa gatgaataaa gctatattga atacagatgt gaaatcttat 1920 gatgaaataa taaaaaaatt aagtgatgat gcaaataaaa atacagaata tcaaaaccat 1980 attcaagagt tagcagataa atatcaagga gcaggcatac ctctagtatc agatgattac 2040 ttaaaagatc atggatataa gaaagcatct gaagtatatt ctgaaatttc aaaagctgct 2100

tctcttacaa acactagtgt aacagcagaa aaatctcaat attttaacac attcacttta 2160 agaggaactt atacaggtga aacttctaaa ggtgaattta aagattggga tgaaatgagt 2220 aaaaaattag atggaacttt ggagtccctt gctaaaaatt cttggagtgg atacaaaact 2280 ttaacagcat actttacgaa ttatagagtt acaagcgata ataaagttca atatgatgta 2340 gttttccatg gggttttaac agataatgcg gatattagta acaataaggc tccaatagca 2400 aaggtaactg gaccaagcac tggtgctgta ggaagaaata ttgaatttag tggaaaagat 2460 agtaaagatg aagatggtaa aatagtatca tatgattggg attttggcga tggtgcaact 2520 agtagaggca aaaattcagt acatgcttac aaaaaagcag gaacatataa tgttacatta 2580 aaagtaactg acgataaggg tgcaacagct acagaaagct ttactataga aataaagaac 2640 gaagatacaa caacacctat aactaaagaa atggaaccta atgatgatat aaaagaggct 2700 aatggtccaa tagttgaagg tgttactgta aaaggtgatt taaatggttc tgatgatgct 2760 gataccttct attttgatgt aaaagaagat ggtgatgtta caattgaact tccttattca 2820 gggtcatcta atttcacatg gttagtttat aaagagggag acgatcaaaa ccatattgca 2880 agtggtatag ataagaataa ctcaaaagtt ggaacattta aatctacaaa aggaagacat 2940 tatgtgttta tatataaaca cgattctgct tcaaatatat cctattcttt aaacataaaa 3000 ggattaggta acgagaaatt gaaggaaaaa gaaaataatg attcttctga taaagctaca 3060 gttataccaa atttcaatac cactatgcaa ggttcacttt taggtgatga ttcaagagat 3120 tattattctt ttgaggttaa ggaagaaggc gaagttaata tagaactaga taaaaaggat 3180 gaatttggtg taacatggac actacatcca gagtcaaata ttaatgacag aataacttac 3240 ggacaagttg atggtaataa ggtatctaat aaagttaaat taagaccagg aaaatattat 3300 ctacttgttt ataaatactc aggatcagga aactatgagt taagggtaaa taaataa 3357

<210> 4

<211> 330

<212> DNA

<213> Artificial sequence <220>

<223> péptido señal colagenasa G

<400> 4 atgaaaaaaa atattttaaa gattcttatg gatagttatt ctaaagaatc taaaattcaa 60 actgtacgta gggttacgag tgtatcactt ttagcggtat atcttactat gaatacttca 120 agtttagttt tagcaaaacc aatagaaaat actaatgata ctagtataaa aaatgtggag 180 aaattaagaa atgctccaaa tgaagagaat agtaaaaagg tagaagatag taaaaatgat 240 aaggtagaac atgtgaaaaa tatagaagag gcaaaggttg agcaagttgc acccgaagta 300 aaatctaaat caactttaag aagtgcttct 330

<210> 5

<211> 110 <212> PRT

<213> Artificial sequence <220>

<223> péptido señal colagenasa G

<400> 5 Met Lys Lys Asn Ile Leu Lys Ile Leu Met ASp Ser Tyr Ser Lys Glu 1 5 10 15

Ser Lys Ile Gln Thr val Arg Arg val Thr Ser val Ser Leu Leu Ala 20 25 30

val Tyr Leu Thr Met Asn Thr Ser Ser Leu val Leu Ala Lys Pro Ile 35 40 45

Glu Asn Thr Asn ASP Thr Ser Ile Lys Asn val Glu Lys Leu Arg Asn 50 55 60

Ala Pro Asn Glu Glu Asn Ser Lys Lys val Glu ASp Ser Lys Asn ASp65 70 75 80

Lys val Glu His val Lys Asn Ile Glu Glu Ala Lys val Glu Gln val 85 90 95

Ala pro Glu val Lys Ser Lys Ser Thr Leu Arg Ser Ala Ser 100 105 110

<210> 6

<211> 3066

<212> DNA

<213> Artificial sequen ce <220>

<223> colagenasa H y péptido señal <400> 6 atgaaaagga aatgtttatc taaaaggctt atgttagcta taacaatggc tacaatattt 60 acagtgaaca gtacattacc aatttatgca gctgtagata aaaataatgc aacagcagct 120 gtacaaaatg aaagtaagag gtatacagta tcatatttaa agactttaaa ttattatgac 180 ttagtagatt tgcttgttaa gactgaaatt gagaatttac cagacctttt tcagtatagt 240 tcagatgcaa aagagttcta tggaaataaa actcgtatga gctttatcat ggatgaaatt 300 ggtagaaggg cacctcagta tacagagata gatcataaag gtattcctac tttagtagaa 360 gttgtaagag ctggatttta cttaggattc cataacaagg aattgaatga aataaacaag 420 aggtctttta aagaaagggt aataccttct atattagcaa ttcaaaaaaa tcctaatttt 480 aaactaggta ctgaagttca agataaaata gtatctgcaa caggactttt agctggtaat 540 gaaacagcgc ctccagaagt tgtaaataat tttacaccaa tacttcaaga ctgtataaag 600 aatatagaca gatacgctct tgatgattta aagtcaaaag cattatttaa tgttttagct 660 gcacctacct atgatataac tgagtattta agagctacta aagaaaaacc agaaaacact 720

ccttggtatg gtaaaataga tgggtttata aatgaactta aaaagttagc tctttatgga 780 aaaataaatg ataataactc ttggataata gataacggta tatatcatat agcaccttta 840 gggaagttac atagcaataa taaaatagga atagaaactt taacagaggt tatgaaagtt 900 tatccttatt taagtatgca acatttacaa tcagcagatc aaattaagcg tcattatgat 960 tcaaaagatg ctgaaggaaa caaaatacct ttagataagt ttaaaaagga aggaaaagaa 1020 aaatactgtc caaaaactta tacatttgat gatggaaaag taataataaa agctggtgct 1080 agagtagaag aagaaaaagt taaaagacta tactgggcat caaaggaagt taactctcaa 1140 ttctttagag tatacggaat agacaaacca ttagaagaag gtaatccaga tgatatatta 1200 acaatggtta tctacaacag tcccgaagaa tataaactca atagtgttct atacggatat 1260 gatactaata atggtggtat gtatatagag ccagaaggaa ctttcttcac ctatgaaaga 1320 gaagctcaag aaagcacata cacattagaa gaattattta gacatgaata tacacattat 1380 ttgcaaggaa gatatgcagt tccaggacaa tggggaagaa caaaacttta tgacaatgat 1440 agattaactt ggtatgaaga aggtggagca gaattatttg caggttctac tagaacttct 1500 ggaatattac caagaaagag tatagtatca aatattcata atacaacaag aaataataga 1560 tataagcttt cagacactgt acattctaaa tatggtgcta gttttgaatt ctataattat 1620 gcatgtatgt ttatggatta tatgtataat aaagatatgg gtatattaaa taaactaaat 1680 gatcttgcaa aaaataatga tgttgatgga tatgataatt atattagaga tttaagttct 1740 aattatgctt taaatgataa atatcaagat catatgcagg agcgcataga taattatgaa 1800 aatttaacag tgccttttgt agctgatgat tatttagtaa ggcatgctta taagaaccct 1860 aatgaaattt attctgaaat atctgaagta gcaaaattaa aggatgctaa gagtgaagtt 1920 aagaaatcac aatattttag tacctttact ttgagaggta gttacacagg tggagcatct 1980 aaggggaaat tagaagatca aaaagcaatg aataagttta tagatgattc acttaagaaa 2040 ttagatacgt attcttggag tgggtataaa actttaactg cttatttcac taattataaa 2100 gttgactctt caaatagagt tacttatgat gtagtattcc acggatattt accaaacgaa 2160 ggtgattcca aaaattcatt accttatggc aagatcaatg gaacttacaa gggaacagag 2220 aaagaaaaaa tcaaattctc tagtgaaggc tctttcgatc cagatggtaa aatagtttct 2280 tatgaatggg atttcggaga tggtaataag agtaatgagg aaaatccaga gcattcatat 2340 gacaaggtag gaacttatac agtgaaatta aaagttactg atgacaaggg agaatcttca 2400 gtatctacta ctactgcaga aataaaggat ctttcagaaa ataaacttcc agttatatat 2460 atgcatgtac ctaaatccgg agccttaaat caaaaagttg ttttctatgg aaaaggaaca 2520 tatgacccag atggatctat cgcaggatat caatgggact ttggtgatgg aagtgatttt 2580 agcagtgaac aaaacccaag ccatgtatat actaaaaaag gtgaatatac tgtaacatta 2640 agagtaatgg atagtagtgg acaaatgagt gaaaaaacta tgaagattaa gattacagat 2700 ccggtatatc caataggcac tgaaaaagaa ccaaataaca gtaaagaaac tgcaagtggt 2760