SOLUCIÓN PRESERVACIÓN DE ÓRGANOS.

[0001] La presente invención se refiere al campo de la preservación de órganos y tejidos biológicos y en particular a las soluciones que se utilizan en la preservación de órganos y/o tejidos antes de ser trasplantados a un sujeto. Antecedentes de la invención [0002] La conservación de órganos tiene como objetivo mantener el órgano del donante en un estado morfológico y bioquímico óptimo desde el momento de la extracción hasta el momento del trasplante. El almacenamiento en frío de los órganos debe soportar las agresiones provocadas por la isquemia fría inicial y la posterior lesión por reperfusión durante la implantación. [0003] Aunque este método de preservación de órganos es efectivo y ha incrementado el tiempo de conservación de los órganos de forma segura, algunos órganos no funcionan bien tras el trasplante y presentan una disfunción orgánica primaria 1 . La disfunción orgánica primaria se asocia con la duración de la isquemia fría y, posiblemente, con la lesión por reperfusión 2 . En consecuencia, a pesar del continuo progreso en la supervivencia del injerto a corto y largo plazo, la disfunción orgánica primaria continúa siendo un problema y un objetivo para la intervención terapéutica. [0004] La disfunción endotelial constituye un importante mediador en el desarrollo de la lesión por isquemia-reperfusión (IR) y en el rechazo del trasplante 3, 4 . La protección del endotelio vascular es un factor crítico en la preservación de órganos. Esta monocapa de células que recubre todos los vasos sanguíneos sanos normalmente libera factores relajantes derivados del endotelio para ayudar a mantener el flujo sanguíneo en la microcirculación, y para ayudar a prevenir la adhesión o inflamación de células y plaquetas que predisponen a la inflamación y la trombosis 5 . [0005] La solución de la Universidad de Wisconsin (UW) ha revolucionado la conservación isquémica fría de órganos sólidos, al permitir la preservación segura de los órganos hasta las 72 horas. En la actualidad sigue siendo la solución más utilizada para la conservación en frío de los órganos intraabdominales. La composición de la solución de UW fue diseñada para contrarrestar los problemas teóricos asociados con la preservación en isquemia fría, y concretamente para minimizar la inflamación celular inducida por la hipotermia, para prevenir la acidosis intracelular, para prevenir la expansión del espacio intersticial y para prevenir las lesiones inducidas por los radicales libres de oxígeno 6 . [0006] Ha habido pocos cambios en los componentes de la solución de UW desde su concepción, pero los estudios in vitro e in vivo han demostrado que muchos de los componentes de la solución de UW aportan pocos beneficios. Estos estudios sugieren que es posible mejorar la solución de UW mediante la simplificación y la eliminación de varios componentes; solo se han considerado como verdaderamente esenciales el lactobionato, la rafinosa y el glutatión 7 . Sin embargo, los ensayos clínicos en trasplante renal indican que la adición de glutatión a la solución de UW no confiere ninguna ventaja clínica 8 . [0007] El glutatión (GSH) se añade a la solución de preservación de órganos de UW y a otras soluciones de preservación, tales como la solución Celsior o la solución Belzer MPS, bajo la premisa de que actúa contra el estrés oxidativo durante la isquemia fría. Sin embargo, una de las desventajas es que el glutatión a menudo se debe añadir inmediatamente antes de utilizar la solución de preservación, ya que se oxida durante el almacenamiento. [0008] Se ha sugerido que el suministro/producción de pequeñas cantidades de óxido nítrico al órgano o tejido puede ser beneficioso. Vodovotz (Óxido Nítrico Nov. 2003; 9(3): 141-7), por ejemplo, mostró que la combinación de suprimir cantidades perjudiciales de NO y añadir una cantidad baja y constante de NO puede mejorar la preservación pulsátil de los riñones usando Belzer MPS que contenga glutatión. Quintana et al. (Int. J. Surg. Investig. 2001; 2(5): 401-411) también examinaron la adición de S-nitrosoglutatión (GSNO) a la solución de UW y observaron que el GSNO como donante de NO puede mejorar las propiedades de la solución de UW para preservar el hígado de las ratas, mantenimiento la morfología hepática y evitando la lesión hepática tras la conservación/reperfusión en frío. [0009] Uno de los objetivos de la presente invención consiste en evitar y/o mitigar al menos uno de los inconvenientes anteriormente mencionados. [0010] Un objetivo adicional de la invención es proporcionar una solución para la preservación de órganos con al menos una ventaja sobre la solución de la UW y/u otras soluciones relacionadas ya existentes. [0011] La presente invención se basa en estudios realizados por los inventores para evaluar el impacto que añadir glutatión (GSH) a la solución de UW tiene sobre la función endotelial en un modelo de isquemia-reperfusión fría, así como para determinar si el éster monoetílico de GSH (GSH-MEE) para células permeables o el donante de óxido nítrico (NO) relacionado con GSH, el S-nitrosoglutatión (GSNO), podrían tener algún efecto beneficioso sobre la función vascular y la supervivencia de las células endoteliales frente al estrés oxidativo. [0012] En primer lugar, se proporciona una solución para que se utilice en la preservación de órganos y/o tejidos in vitro. La solución comprende una fuente de S-nitrosotiol, e incluye además uno o más componentes adicionales, seleccionados a partir de almidón; hidroxietilalmidón; ácido lactobiónico; gluconato de sodio y/o potasio; glucosa; CaCl2; 2   fosfato de potasio; EDTA u otro agente quelante de metal, como el sulfato de magnesio chelex; rafinosa; dextrano; albúmina recombinante; agentes de protección contra la lesión isquémica, como la adenosina; antioxidantes, como el alopurinol y/o la pentafracción, con los componentes preparados en agua, con la condición de que la solución esté sustancialmente libre de glutatión o compuestos que forman glutatión. [0013] Como se menciona en los antecedentes de la invención, el glutatión y/o los compuestos que forman glutatión a menudo se agregan o se incluyen en las soluciones de reperfusión de órganos, como en la solución de UW. La presente invención se basa en parte en el uso de soluciones que están libres o sustancialmente libres de glutatión o de compuestos que forman glutatión. Por sustancialmente libres se entiende niveles inferiores a 50 µM, siendo utilizado normalmente el glutatión en mM. Los compuestos que forman glutatión incluyen N-acetilcisteína, cisteína o disulfuro de glutatión. Debe tenerse en cuenta que las soluciones de preservación de órganos de la técnica anterior pueden almacenarse libres de glutatión antes de su uso, pero que el glutatión, o los compuestos que forman glutatión, tendrán que añadirse con antelación o justo antes de utilizarse. La presente invención, por tanto, se refiere a la formulación de una solución de preservación de órganos destinada a ser administrada a un sujeto. [0014] Normalmente el S-nitrosotiol es S-nitroglutatión. El S-nitrosotiol, como el S-nitrosoglutatión, habitualmente se añade en cantidades de 1µM - 1mM, tales como 20µM - 500µM. [0015] La solución de preservación de órganos de la presente invención consta naturalmente de otros componentes conocidos y utilizados en otras soluciones de preservación, como la de UW (ver US 4.798.824 y 4.879.283, por ejemplo), la de Celsior y la de Belzer MPS. Otros componentes pueden incluir amortiguadores ácido-básicos para ayudar a mantener el pH de la solución. Los amortiguadores típicos pueden basarse en fosfatos, como el KH2PO4. Además, es probable que haya fuentes de potasio y sodio y que la solución tenga que tener una osmolaridad deseada. [0016] Otros componentes pueden incluir o ser seleccionados a partir de almidón; hidroxietilalmidón; ácido lactobiónico; gluconato de sodio y/o potasio; glucosa; CaCl2; fosfato de potasio; EDTA u otro agente quelante de metal, como el sulfato de magnesio chelex; rafinosa; dextrano; albúmina recombinante; agentes de protección contra la lesión isquémica, como la adenosina; antioxidantes, como el alopurinol y/o la pentafracción, con los componentes preparados en agua. Otros componentes opcionales pueden incluir antibióticos, como la penicilina; la insulina (para ayudar en la absorción de glucosa) y/o anti-inflamatorios, como la dexametasona. [0017] El uso de EDTA u otro agente quelante de metal puede ser particularmente ventajoso, ya que los iones metálicos de transición pueden tener un efecto no deseado sobre el S-nitrosoglutatión y su extracción/quelación sería deseable. [0018] También puede ser deseable proteger la solución de la luz durante el almacenamiento. Por tanto, la solución debe ser... [Seguir leyendo]

1. Una solución para que se utilice en la preservación de órganos y/o tejidos in vitro, donde la solución comprende una fuente de S-nitrosotiol, e incluye además uno o más componentes adicionales, seleccionados a partir de almidón; hidroxietilalmidón, ácido lactobiónico; gluconato de sodio y/o potasio; glucosa; CaCl2; fosfato de potasio; EDTA u otro agente quelante de metal, como el sulfato de magnesio chelex; rafinosa; dextrano; albúmina recombinante; agentes de protección contra la lesión isquémica, como la adenosina; antioxidantes, como el alopurinol y/o la pentafracción, con los componentes preparados en agua, con la condición de que la solución esté sustancialmente libre de glutatión o compuestos que forman glutatión. 2. La solución según la reivindicación 1, en la cual la solución comprende glutatión o compuestos que forman glutatión en concentraciones de hasta 50 µM. 3. La solución según las reivindicaciones 1 o 2, en la cual el S-nitrosotiol es S-nitrosoglutatión. 4. La solución según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la cual el S-nitrosotiol está presente en una cantidad de 1µM - 1Mm. 5. La solución según la reivindicación 1, la cual comprende también uno o más componentes adicionales, seleccionados a partir de antibióticos, como la penicilina; insulina (para ayudar en la absorción de glucosa) y/o antiinflamatorios, como la dexametasona. 6. La solución según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, la cual comprende también EDTA u otro(s) agente(s) quelante(s) de metal. 7. Un envase sustancialmente impermeable a la luz, que contiene la solución según cualquiera de las reivindicaciones 1-6. 8. El envase según la reivindicación 7, en el cual el S-nitrosotiol se encuentra inicialmente en un compartimento separado del resto de la solución, y en el cual el compartimiento se compone de una membrana, pared o similar rompible, que tras su ruptura permite que el S-nitrosotiol se mezcle con el resto de la solución. 9. La solución o envase según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el S-nitrosotiol se almacena en una solución estabilizadora, como DMSO o DMF, antes de mezclarse con otros componentes de la solución previamente a su uso. 10. Una solución de preservación de órganos sin glutatión y que comprende, inmediatamente antes de su uso como solución de preservación, S-nitrosoglutatión 50 µM - 200 µM; lactobionato 50mM - 200mM; KH2 PO4 10mM - 100mM; MgSO4 1mM - 20mM; fuente de carbohidratos (Ej. rafinosa, glucosa o sacarosa) 2mM - 50mM; agente quelante de metal (Ej. EDTA o Chelex) 0,01mM - 1mM; agente protector contra lesiones isquémicas, como la adenosina 1mM - 10mM; antioxidantes, como el alopurinol 100µM - 5mM; anti-inflamatorios, como la dexametasona, 5 mg/l - 30mg/l; insulina 10u/l - 100u/l; antibiótico(s), como la penicilina 50mg/l - 250mg/l. 11. Un método de conservación de órganos y/o tejidos, que comprende los siguientes pasos: a. mantener aislado el órgano y/o tejido en una solución según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o 10; y/o reperfundir una solución según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6 o 10 a través del órgano y/o tejido aislado. 12. Un método según la reivindicación 11, según el cual el órgano y/o tejido que se preserva son riñones, hígado, pulmón o páncreas. 13. Una solución o envase según cualquiera de las reivindicaciones 1-10 que se utiliza en la preservación de riñones, hígado, pulmón o páncreas. 9   Dibujos Figura 1 Figura 2 Contracción (mN) Contracción (%)   Figura 3 Relajación (%) 11   Figura 4 Contracción (%) Relajación (%) Contracción (mN) 12   Figura 5 Figura 6 Supervivencia de las células HUVEC (%) / Tratamiento Contracción (mN) % de GSNO restante / Tiempo (días) 13