Un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:

13, endonde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas.

Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos

Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos que son extremadamente eficaces como vacunas contra el cáncer, y fármacos para el tratamiento y prevención de tumores, que contienen estos péptidos.

Antecedentes de la invención

El crecimiento tumoral en general está limitado a 1~2 mm3 en ausencia de un suministro de sangre vascularizada, y la angiogénesis tiene un papel crítico en la invasión, crecimiento y metástasis de tumores (Folkman, J. (2002) Semin. Oncol. 29: 15-8, Folkman, J. (1996) Nat. Med. 2: 167-8, Kerbel y Folkma, (2002) . Nature Rev. Cancer. 2: 727-39, Brown et al., (1995) Hum. Pathol. 26: 86-91, Eberhard et al., (2000) Cancer Res. 60: 1388-93) . También se ha mostrado que la inhibición de la angiogénesis tumoral se asocia con la supresión de la progresión tumoral. Para alcanzar la supresión de la angiogénesis, un número de investigadores han estado examinando estrategias terapéuticas que se dirigen al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y al receptor de VEGF (VEGFR) , que desempeñan papeles críticos en la regulación del proceso de angiogénesis. Estos estudios han mostrado que el crecimiento tumoral se puede suprimir con éxito in vitro e in vivo usando anticuerpos monoclonales, receptores recombinantes o inhibidores para la transducción de señales (El-Mousawi et al., (2003) J.Biol.Chem. 278: 46681-91, Stefanik et al., (2001) J. Neurooncol. 55: 91-100, Wood et al., (2000) Cancer Res. 60: 2178-89, Luttun et al., (2002) Nat. Med. 8: 831-40, Ly den et al., (2001) Nat. Med. 7: 1194-201, Lu et al., (2001) Cancer Res. 61: 7002-8) . Sin embargo, estas estrategias requieren la administración frecuente o continua de los reactivos a niveles de dosis relativamente altos, que pueden estar asociados con inconveniencias y efectos secundarios significativos.

VEGF se une a dos receptores tirosina quinasa relacionados, VEGFR1 (Flt-1) y VEGFR2 (KDR) , que se expresan intensamente en células endoteliales en tejido tumoral pero no en tejido normal (Risau, W. (1997) Nature. 386: 6714, Ferrara y Davis-Smyth, (1997) Endor. Rev. 18: 4-25, Shibuya et al., (1999) Curr. Topics. Microbiol. Immunol. 237: 59-83, Plate et al., (1994) Int. J. Cancer. 59: 520-9) . VEGFR1 es el primer receptor de VEGF que se ha identificado (Shibuya et al., (1990) Oncogene 5: 519-24) , e interacciona con VEGF (VEGF-A) y con otros dos miembros de la familia de VEGF, VEGF-B (Olofsson et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 2576-81) y el factor de crecimiento de placenta (PlGF) (Maglione et al., 1991. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 9267-71) . Al desplazar a VEGF de VEGFR1, se espera que PlGF haga que más VEGF esté disponible para unirse y activar VEGFR2 y de esta manera aumentar la angiogénesis dirigida por VEGF (Park et al., (1994) J. Biol. Chem. 269: 25646-54) . Otros estudios han mostrado que existe una sinergia entre VEGF y PlGF in vivo, especialmente durante situaciones patológicas, como se evidencia por la tumorigénesis alterada y la fuga vascular en ratones PlGF -/- (Carmeliet et al., (2001) Nat. Med.

7: 575-83) .

En el documento US2005/0175624 A1, se han llevado a cabo análisis informáticos para predecir la utilidad de fragmentos de VEGFR1 en inmunoterapia. Sin embargo, no se ha mostrado que ninguno de estos fragmentos induzca una respuesta inmune.

Artículos recientes han mostrado que la vacunación usando ADNc o proteína recombinante de VEGFR2 de ratón se asocia con efectos antitumorales significativos en modelos tumorales de ratón (Li et al., (2002) J. Exp. Med. 195: 1575-84, Niethammer et al., (2002) Nat. Med. 8: 1369-75) . Pero estos resultados no pueden garantizar directamente la aplicación clínica de esta estrategia, ya que usaron el homólogo de ratón de VEGFR2 humano en sistemas de ratón que se considera que son significativamente diferentes del equivalente humano.

Abreviaciones usadas en la presente solicitud:

LTC, linfocito T citotóxico VEGF, factor de crecimiento endotelial vascular PlGF, factor de crecimiento de placenta VEGFR1, receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular VEGFR2, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular RTG, ratones transgénicos AAT, antígeno asociado a tumores i.d., inyección intradérmica s.c., inyección subcutánea IFA, adyuvante de Freund incompleto

Breve compendio de la invención

La presente invención proporciona péptidos que inducen células T citotóxicas contra células endoteliales que expresan endógenamente VEGFR1.

La presente invención particularmente proporciona:

1. Un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas.

2. Un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos y en donde el péptido no es NLTATLAVNV.

3. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis o tumores, en donde la composición comprende uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en:

(a) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 13, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas; y

(b) un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 13, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos;

o un polinucleótido que codifica dicho péptido.

4. Una vacuna para su uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad mediada por angiogénesis, en donde la vacuna comprende uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en:

(a) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 13, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas;

(b) un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 13, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos; y

(c) un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1;

o un polinucleótido que codifica dicho péptido como principio activo.

5. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis, en donde la composición comprende uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en:

(a) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas; y

(b) un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos.

Los péptidos descritos en el presente documento comprenden una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2, 13 o una secuencia en donde se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos. En ciertas formas de realización, el segundo aminoácido a partir del extremo N es leucina o metionina. En algunas formas de realización, el aminoácido C-terminal es valina o leucina.

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas para su uso en el tratamiento o prevención de tumores, en donde la composición comprende los péptidos de la invención.

La presente invención proporciona exosomas que presentan en su superficie un complejo que comprende el péptido de esta invención y un antígeno HLA. En algunas formas de realización, el antígeno HLA es HLA-A24 (por ejemplo, HLA A2402) o HLA-A02 (HLA-0201) .

También se describen métodos de inducir células presentadoras de antígeno que tienen alta inducibilidad de células T citotóxicas y métodos para inducir células T citotóxicas que comprenden administrar los péptidos de la invención a un paciente. En algunas formas de realización, los métodos pueden comprender transferir un gen que comprende un polinucleótido que codifica el péptido de la invención a células presentadoras de antígeno. La invención describe células T citotóxicas y células presentadoras de antígeno aisladas que son inducidas por los métodos descritos en el presente documento. La presente... [Seguir leyendo]

1. Un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas.

2. Un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos y en donde el péptido no es NLTATLAVNV.

3. El péptido de la reivindicación 2, en donde el segundo aminoácido a partir del extremo N es leucina o metionina.

4. El péptido de la reivindicación 2 o 3, en donde el aminoácido C-terminal es valina o leucina.

5. Una composición farmacéutica que comprende uno o más péptidos de la reivindicación 1 o 2.

6. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis o tumores, en donde la composición comprende uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en:

(a) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2

o 13, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas; y

(b) un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 13, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos;

o un polinucleótido que codifica dicho péptido.

7. Uso de un péptido como se define en la reivindicación 6 o un polinucleótido que codifica dicho péptido para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de tumores o una enfermedad mediada por angiogénesis.

8. Un exosoma que presenta en su superficie un complejo que comprende un péptido como se define en la reivindicación 6 y un antígeno HLA.

9. El exosoma de la reivindicación 8, en donde el antígeno HLA es HLA-A02.

10. El exosoma de la reivindicación 9, en donde el antígeno HLA es HLA-A0201.

11. Una célula presentadora de antígeno, que comprende un complejo formado entre un antígeno HLA y un péptido como se define en la reivindicación 6.

12. Una vacuna para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis, en donde la vacuna comprende uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en:

(a) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2

o 13, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas;

(b) un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 13, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos; y

(c) un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1;

o un polinucleótido que codifica dicho péptido como el principio activo.

13. La vacuna para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis según la reivindicación 12 para su uso en la administración a un sujeto cuyo antígeno HLA es HLA-A02.

14. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis, en donde la composición comprende uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en:

(a) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en donde el péptido tiene inducibilidad de células T citotóxicas; y

(b) un péptido que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido consiste en la secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en donde se sustituyen o añaden 1 o 2 aminoácidos.

15. El uso de la reivindicación 7, en donde la enfermedad mediada por angiogénesis se selecciona del grupo que consiste en retinopatía diabética, artritis reumatoide crónica, psoriasis y ateroesclerosis.

16. La vacuna para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis según la reivindicación 12 o la composición para su uso en tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis según la reivindicación 6 o 14, en donde la enfermedad mediada por angiogénesis se selecciona del grupo que consiste en retinopatía diabética, artritis reumatoide crónica, psoriasis y ateroesclerosis.

Fig.1 Fig. 2 Fig. 3 Fig. 4 Fig. 5 Fig. 6