Un método para la generación de células dendríticas maduras que emplea temperaturas por debajo de 37°C durante el desarrollo de células progenitoras y células dendríticas inmaduras.

Método para Generar Células Dendríticas Empleando un Descenso de Temperatura.

Campo Técnico La descripción se refiere a métodos y medios útiles para inducir respuestas inmunitarias contra malignidades y enfermedades infecciosas. Más concretamente, la invención está relacionada con métodos mejorados para generar células presentadoras de antígenos.

Técnica Anterior

Las terapias inmunitarias basadas en células dendríticas que explotan los mecanismos naturales de presentación deantígenos representan el método no tóxico más prometedor para el tratamiento del cáncer. Éste se puede utilizar como único tratamiento, o como un coadyuvante para otros tipos de terapias tales como, por ejemplo, la cirugía, la radiación y la quimioterapia. La estrategia se basa en la manipulación ex vivo y la reintroducción de productos celulares para sortear las competencias inmunitarias con el fin de inducir respuestas inmunitarias específicas de tumores. De este modo, el último objetivo de tales terapias inmunitarias basadas en células dendriticas es la inducción de células efectoras específicas de tumores in vivo y los enfoques recientes se han centrado en los linfocitos T citotóxicos CD8+ (CTL) capaces de reconocer y eliminar células tumorales. Además, el tratamiento de enfermedades infecciosas tales como, por ejemplo, el VIH se puede beneficiar de las estrategias de vacunación basadas en las células dendríticas.

Presentación de antígenos

La inducción de respuestas inmunitarias específicas de tumores requiere la participación de células presentadoras de antígenos profesionales (CPA) que expresan moléculas del Complejo Principal de Histocompatibilidad (CPH) así como moléculas co-estimuladoras unidas a la membrana y secretadas. Además, dichas CPA deben ser capaces de absorber, procesar y presentar antígenos en asociación con las moléculas del CPH.

Las células dendriticas (CD) son las CPA profesionales del sistema inmunitario con capacidad para activar tanto células no sensibilizadas previamente como células T de memoria. Las fases que conducen a la maduración de las CD están asociadas con ciertas propiedades de la célula. Las células CD inmaduras son particularmente útiles en la absorción de antígenos extracelulares por medio de fagocitosis o pinocitosis y el procesamiento de antígenos a péptidos en compartimentos endocíticos tales como endosomas y fagosomas. Aquí los péptidos están unidos a las moléculas del CPH de clase II. Las CD inmaduras también tienen la capacidad única de cargar los péptidos de proteínas exógenas a la ruta de presentación del CPH de clase I, un proceso denominado presentación cruzada.

La capacidad para estimular eficazmente una respuesta inmunitaria activando las células T coadyuvantes de tipo 1 CD4+ (células Th1) y las células T citotóxicas CD8+ (CTL) depende de forma crucial de una CD madura. Solamente las CD completamente maduras equipadas con un panel de moléculas co-estimuladoras unidas a la membrana y accesorias tales como, por ejemplo, CD40, CD80, CD83, CD86 y CPH de clase II pueden inducir eficazmente la proliferación y diferenciación de linfocitos T específicos de antígenos1.

Un papel significativo de la actividad co-estimuladora de las CD es proporcionado por las citoquinas secretadas, en particular la IL-12p70. Su papel en la activación de las células T y su polarización hacia una respuesta de tipo Th1 fueron claramente demostrados por Heufler et al. (1996) 1. Además, Inoue et al. (2005) informaron de una buena correlación entre la presencia de CD maduras que expresan IL-12 en el tumor y la supervivencia del paciente. Las CD maduras para la vacunación deben producir cantidades limitadas de la citoquina IL-10 inhibidora de las células Th1.

CCR7 es el receptor para las quimioquinas CCL19 y CCL21 que son producidas por las células del estroma en los ganglios linfáticos. Las CD que expresan niveles suficientes de CCR7 activado migran al ganglio linfático en respuesta a CCL19 o CCL212. Aquí se encuentran con los linfocitos T y pueden iniciar una respuesta inmunitaria.

Protocolos para la generación de CD maduras Se han descrito muchos protocolos para la generación de CD maduras. El protocolo "convencional" más utilizado en la actualidad para la inducción de CD emplea un cóctel de maduración que consiste en IL-1beta, IL-6, TNF-alfa y prostaglandina E2. A pesar de la actividad migratoria debida a CCR7 y de la actividad inmunoestimuladora in vivo, la CD madurada por medio de este cóctel genera CD con una capacidad reducida para producir IL12p703.

Un segundo grupo de protocolos de maduración de CD comprende ácido poliinosínico:policitidílico, poli- (I:C) . Éste se utiliza normalmente combinado con citoquinas tales como TNF alfa, IL-1beta, IFN-gamma e IFN-alfa. La CD generada mediante este método produce IL-12p70, pero normalmente expresa bajos niveles de CCR7. Los bajos niveles de expresión de CCR7 que caracterizan las CD obtenidas en presencia de poli- (I:C) restringen su migración in vivo a los ganglios linfáticos.

Recientemente, una solicitud de patente publicada US 2005/0003533 A1 describía un método para la maduración de células dendríticas que expresaban CCR7 que con posterioridad, después de la estimulación con CD40L, pudieron ser inducidas a producir IL-12p70.

Por consiguiente todavía existe un requerimiento no satisfecho para el desarrollo de métodos normalizados para generar células dendríticas maduras que expresen elevados niveles de CCR7 activado y que también produzcan una cantidad suficiente de IL-12p70.

Además, a pesar de los esfuerzos de muchos investigadores, las vacunas basadas en células dendríticas para su uso en la terapia contra el cáncer han proporcionado en general respuestas inmunitarias con una eficacia clínica modesta. Estas vacunas han sido producidas principalmente por medio de manipulación ex vivo y carga de antígenos de CD autólogas. La demanda creciente con respecto a la seguridad del paciente requiere un elevado nivel de reproducibilidad y conformidad con las cuestiones reguladoras. De este modo, existe una fuerte necesidad de métodos que generen CD equipadas apropiadamente que induzcan eficazmente respuestas inmunitarias y en particular proporcionen respuestas clínicas mejoradas.

Además, las CD generadas ex vivo también podrían ser implementadas como una vacuna terapéutica en el tratamiento de algunas enfermedades infecciosas crónicas tales como el VIH y la hepatitis B y C, donde el enfoque de vacuna tradicional no está funcionando eficazmente. Los resultados de los estudios preclínicos y clínicos primarios4-5 indican que la inmunoterapia basada en CD podría ser una estrategia prometedora para el tratamiento de pacientes con infecciones crónicas por VIH y hepatitis B y C. Como con la inmunoterapia para el cáncer, la respuesta clínica eficaz contra estos agentes infecciosos intracelulares está asociada con la inducción de la respuesta coadyuvante Th1 requerida para el desarrollo de células efectoras CD8+5. Por lo tanto, se puede esperar que las células dendríticas generadas ex vivo tengan las mismas características para tratar tanto el cáncer como las enfermedades infecciosas crónicas.

Descripción de la invención

En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un método para generar células dendríticas empleando temperaturas por debajo de 37°C durante el desarrollo de células progenitoras en células dendríticas inmaduras.

En un segundo aspecto, la descripción hace referencia a una población de células dendríticas, donde dichas células son generadas mediante un método para generar células dendríticas empleando temperaturas por debajo de 37°C durante el desarrollo de células progenitoras y células dendríticas inmaduras.

En un tercer aspecto, la descripción hace referencia a una composición farmacéutica que comprende una población de células dendríticas donde dichas células se generan mediante un método para generar células dendríticas empleando temperaturas por debajo de 37°C durante el desarrollo de células progenitoras y células dendríticas inmaduras.

En un cuarto aspecto, la descripción hace referencia al uso de la población de células, donde dichas células se generan mediante un método para generar células dendríticas empleando temperaturas por debajo de 37°C durante el desarrollo de células progenitoras y células dendríticas inmaduras, para la estimulación y/o expansión de células T.

En un... [Seguir leyendo]

1. Un método para la generación de células dendríticas maduras que emplea temperaturas por debajo de 37°C durante el desarrollo de células progenitoras y células dendríticas inmaduras.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, donde la evolución de las células progenitoras y las células 5 dendríticas inmaduras comprende la diferenciación de dichas células.

3. El método de acuerdo con las reivindicaciones 1-2, donde la temperatura es de 31°C a 37°C.

4. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde la temperatura es 34°C.

5. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde las células progenitoras son células progenitoras autólogas.

6. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde las células progenitoras se seleccionan entre células progenitoras mieloides o células pluripotenciales.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 6, donde las células progenitoras mieloides son monocitos.