Un procedimiento para determinar si un sujeto presenta un riesgo de tener enfermedad cardiovascular,

que comprende: determinación de los niveles de una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apolipoproteína A-I (apoA-I) en una muestra biológica del sujeto, en el que la muestra biológica es sangre, plasma o suero; en el que la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I se seleccionan entre apoA-I oxidada y un fragmento peptídico de apoA-I oxidada, en el que la apoA-I oxidada y el fragmento peptídico de apoA-I oxidada tienen actividad de flujo de colesterol dependiente de ABCA1 reducida o actividad de unión a lípidos reducida, o ambas, en comparación con apoA-I no oxidada; y en el que los niveles elevados de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en la muestra biológica en comparación con un valor de control o un patrón interno indican que el sujeto presenta un riesgo de tener enfermedad cardiovascular.

Marcadores de riesgo para enfermedad cardiovascular.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de la enfermedad cardiovascular. Más en concreto, se refiere a marcadores y procedimientos para determinar si un sujeto, en particular un sujeto humano, presenta un riesgo de desarrollar enfermedad cardiovascular, al tener una enfermedad cardiovascular, o sufrir una complicación de enfermedad cardiovascular. La presente solicitud se refiere también al uso de dichos marcadores y procedimientos para seguimiento del estado de una enfermedad cardiovascular en un sujeto o los efectos de los agentes terapéuticos en sujetos con enfermedad cardiovascular.

Enfermedad cardiovascular (ECV) es un término general aplicado a cardiopatías y enfermedades de los vasos sanguíneos, lo que incluye aterosclerosis, cardiopatía coronaria, enfermedad cerebrovascular, enfermedad aortoiliaca y enfermedad vascular periférica. Los sujetos con ECV pueden desarrollar una serie de complicaciones, que incluyen, pero no se limitan a, infarto de miocardio, ictus, angina de pecho, ataques isquémicos transitorios, insuficiencia cardiaca congestiva, aneurisma aórtico y muerte. La ECV es responsable de una de cada dos muertes en los Estados Unidos y es la principal enfermedad mortal. Así, la prevención de la enfermedad cardiovascular es un área de gran importancia en la salud pública.

Para prevenir ECV se recomienda una dieta baja en grasas y ejercicio. Además, puede prescribirse una serie de agentes terapéuticos por parte de profesionales médicos a aquellos individuos que, según se sabe, presentan el riesgo de desarrollar o tener ECV. Entre ellos se incluyen agentes de reducción de lípidos que reducen los niveles en sangre de colesterol y triglicéridos, agentes que normalizan la presión arterial, agentes, como aspirina o antagonista de receptor plaquetario del ADP (por ejemplo, clopidogrel y ticlopidina) que previenen la activación de plaquetas y reducen la inflamación vascular, y agentes pleotróficos como agonistas del receptor activado de proliferador de peroxisoma (PPAR) , con efectos metabólicos de amplio espectro que reducen la inflamación, promueven la sensibilización a la insulina, mejoran la función vascular y corrigen las anomalías lipídicas. Puede usarse una terapia más agresiva, por ejemplo, con administración de múltiples medicamentos o intervención quirúrgica, en aquellos individuos que presenten un riesgo elevado. Como las terapias de ECV pueden tener efectos secundarios adversos, es deseable tener procedimientos para identificar a aquellos individuos que presenten riesgo, en particular aquellos individuos que presenten un riesgo elevado, de desarrollar o tener ECV.

En la actualidad, se usan varios factores de riesgo entre los profesionales médicos para valorar el riesgo de un individuo de desarrollar o tener ECV y para identificar a individuos que presenten un riesgo elevado. Entre los principales factores de riesgo de enfermedad cardiovascular se incluyen la edad, hipertensión, antecedentes familiares de ECV prematura, tabaquismo, altos niveles de colesterol total, bajos niveles de colesterol HDL, obesidad y diabetes. Los principales factores de riesgo de ECV son aditivos, y normalmente se usan en conjunto entre los médicos en un algoritmo de predicción de riesgo para dirigirse a aquellos individuos que tengan la máxima probabilidad de beneficiarse de un tratamiento de ECV. Estos algoritmos consiguen una alta sensibilidad y especificidad para predecir el riesgo de ECV en un plazo de 10 años. Sin embargo, la capacidad de los algoritmos actuales de predecir una mayor probabilidad de desarrollar ECV es limitada. Entre los individuos que no tienen ninguno de los factores de riesgo actuales, el riesgo a 10 años de desarrollar ECV sigue siendo del 2 % aproximadamente. Además, se produce un alto número de complicaciones de ECV en individuos con perfiles de riesgo aparentemente bajos o moderados, según se determina usando en la actualidad factores de riesgo conocidos. Así, existe la necesidad para ampliar el algoritmo actual de riesgo cardiovascular para identificar un espectro más amplio de individuos en riesgo de o afectadas por ECV.

El mecanismo de aterosclerosis no es bien comprendido. En la última década una diversidad de datos clínicos, patológicos, bioquímicos y genéticos sustenta la noción de que la aterosclerosis es un trastorno inflamatorio crónico. Los reactivos de fase aguda (por ejemplo, proteína C reactiva, proteínas de complemento) , marcadores sensibles pero inespecíficos de inflamación, están enriquecidos en estrías grasas y las fases tardías de las lesiones ateroscleróticas. En un reciente ensayo clínico prospectivo, los niveles de plasma de base de proteína C reactiva predecían independientemente riesgo de infarto de miocardio e ictus por primera vez en individuos aparentemente sanos. La patente de EE.UU. nº 6.040.147 describe procedimientos que usan proteína C reactiva, citocinas y moléculas de adhesión celular para caracterizar el riesgo de un individuo de desarrollar un trastorno cardiovascular. Aunque útiles, estos marcadores pueden encontrarse en la sangre de individuos con inflamación debido a causas distintas de ECV, y así, estos marcadores pueden no ser suficientemente específicos. Por otra parte, no se ha demostrado que la modulación de sus niveles prediga una disminución en la morbilidad o mortalidad de ECV.

El documento WO 01/38395 describe el uso de formas oxidadas de apolipoproteínas (específicamente, ciertas formas oxidadas de apoA-I y apoA-II que tienen residuos de metionina (Met) oxidados específicos) en procedimientos de diagnóstico y tratamiento de enfermedades asociadas con estrés oxidativo, como enfermedad cardiovasculares, en particular, aterosclerosis.

El documento EP 0 722 086 describe procedimientos para determinación inmunológica de lipoproteínas oxidadas basándose en la unión específica de lipoproteínas oxidadas a l2-glicoproteína I (l2-GPI) . Más específicamente, el documento describe la detección/cuantificación del complejo de l2-GPI y una lipoproteína oxidada usando un ensayo en sándwich que emplea, por ejemplo, un anticuerpo anti-lipoproteína y/o un anticuerpo anti-apolipoproteína.

Shishehbor y col., 2003, JAMA, Vol. 289, nº 13, pág. 1675-1680 describen estudios de la relación entre niveles sistémicos de nitrotirosina y enfermedad de la arteria coronaria (EAC) . Se recogieron muestras de sangre y se determinaron los niveles totales de nitrotirosina ligada a proteínas. Se encontró que los niveles totales de nitrotirosina ligada a proteínas eran superiores en pacientes con EAC en comparación con los controles.

Matsunaga y col., 2001, J. Biochemistr y , Vol. 130, nº 2, pág. 285-293 describe estudios in vitro en los que las lipoproteínas se modificaron oxidativamente usando peroxinitrito (para producir NO2-lipoproteína) , y se investigaron los efectos de esta NO2-lipoproteína en la viabilidad de las células endoteliales en cultivo.

Bergt y col., 2003, Free Rad. Biol. & Med., Vol. 35, Sup. nº 1, Abs. nº 312, pág. S101 describe estudios de apoA-I que han sido oxidadas por HOCI, en un esfuerzo por determinar si los fagocitos cloran preferentemente sitios específicos en HDL. Los estudios demostraron que el principal sitio de cloración fue un único residuo de tirosina situado en uno de los motivos YxxK de las proteínas.

La presente invención proporciona procedimientos para caracterizar el riesgo de un sujeto, en particular un sujeto humano, de tener enfermedad cardiovascular. La presente invención también proporciona procedimientos de caracterización del riesgo de un sujeto de desarrollar enfermedad cardiovascular. En otra forma de realización, la presente invención proporciona procedimientos para caracterizar el riesgo de un sujeto de sufrir una complicación de enfermedad cardiovascular. En otra forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento para determinar si un sujeto que presenta dolor torácico tiene un riesgo a corto plazo de sufrir un ataque cardíaco u otro episodio cardiaco adverso importante. Los presentes procedimientos son especialmente útiles para identificar a aquellos sujetos que tienen necesidad de terapias de ECV altamente agresivas así como a aquellos sujetos que no requieren terapias dirigidas a inhibir o prevenir ECV o complicaciones de ECV.

Los procedimientos de la invención comprenden la determinación de los niveles de una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apolipoproteína A1 en una muestra corporal obtenida del sujeto, en... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para determinar si un sujeto presenta un riesgo de tener enfermedad cardiovascular, que comprende:

determinación de los niveles de una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apolipoproteína A-I (apoA-I) en una muestra biológica del sujeto, en el que la muestra biológica es sangre, plasma o suero; en el que la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I se seleccionan entre apoA-I oxidada y un fragmento peptídico de apoA-I oxidada, en el que la apoA-I oxidada y el fragmento peptídico de apoA-I oxidada tienen actividad de flujo de colesterol dependiente de ABCA1 reducida o actividad de unión a lípidos reducida, o ambas, en comparación con apoA-I no oxidada; y en el que los niveles elevados de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en la muestra biológica en comparación con un valor de control o un patrón interno indican que el sujeto presenta un riesgo de tener enfermedad cardiovascular.

2. Un procedimiento para caracterizar el riesgo a corto plazo de sufrir un episodio cardiaco adverso importante en un sujeto que presenta dolor torácico, que comprende:

determinación de los niveles de una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apolipoproteína A-I (apoA-I) en una muestra biológica del sujeto, en el que la muestra biológica es sangre, plasma o suero; en el que la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I se selecciona entre apoA-I oxidada y un fragmento peptídico de apoA-I oxidada, en el que la apoA-I oxidada y el fragmento peptídico de apoA-I oxidada tienen actividad de flujo de colesterol dependiente de ABCA1 reducida o actividad de unión a lípidos reducida, o ambas, en comparación con apoA-I no oxidada; y en el que los niveles elevados de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en la muestra biológica en comparación con un valor de control o un patrón interno indica que el sujeto presenta un riesgo de sufrir un episodio cardiaco adverso importante.

3. Un procedimiento para evaluar la terapia en un sujeto en el que se sospecha o al que se ha diagnosticado una enfermedad cardiovascular, que comprende:

determinación de niveles de una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apolipoproteína A-I (apoA-I) en una muestra biológica tomada del sujeto antes de la terapia; en el que la muestra biológica es sangre, plasma o suero; en el que la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I se seleccionan entre apoA-I oxidada y un fragmento peptídico de apoA-I oxidada; en el que la apoA-I oxidada y el fragmento peptídico de apoA-I oxidada tienen actividad de flujo de colesterol dependiente de ABCA1 reducida o actividad de unión a lípidos reducida, o ambas, en comparación con apoA-I no oxidada; y determinación de niveles de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en una muestra biológica correspondiente tomada del sujeto durante o después de una terapia, en el que una disminución en los niveles de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en la muestra tomadas después de o durante una terapia en comparación con niveles de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en la muestra tomadas antes de la terapia es indicativa de un efecto positivo de la terapia en la enfermedad cardiovascular en el sujeto tratado.

4. Un procedimiento para seguimiento con el tiempo del estado de la enfermedad cardiovascular en un sujeto con enfermedad cardiovascular, que comprende:

determinación de los niveles de una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apolipoproteína A-I (apoA-I) en una muestra biológica tomada del sujeto en un instante inicial, en el que la muestra biológica es sangre, plasma o suero, y en una muestra biológica correspondiente tomada del sujeto en un instante posterior; en el que la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I se seleccionan entre apoA-I oxidada y un fragmento peptídico de apoA-I oxidada; en el que la apoA-I oxidada y el fragmento peptídico de apoA-I oxidada tienen actividad de flujo de colesterol dependiente de ABCA1 reducida o actividad de unión a lípidos reducida, o ambas, en comparación con apoA-I no oxidada; en el que un aumento en los niveles de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en la muestra biológica tomada en el instante posterior en comparación con el instante inicial indica que la enfermedad cardiovascular de un sujeto ha empeorado.

5. Un procedimiento según la reivindicación 4, en el que

el sujeto ha experimentado uno o más episodios cardiovasculares adversos agudos en el pasado, y en el que un aumento en los niveles de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en la muestra biológica tomada en el instante posterior en comparación con el instante inicial indica que el riesgo de un sujeto de sufrir un episodio cardiovascular adverso posterior ha aumentado.

6. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la apoA-I oxidada es apoA-I que se ha oxidado por exposición a HOCI, ONOO- o radical tirosilo.

7. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho fragmento peptídico de apoA-I oxidada comprende tirosina oxidada.

8. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho fragmento peptídico de apoA-I oxidada comprende uno o más entre: clorotirosina, nitrotirosina, ditirosina, oxohistidina, trihidroxifenilalanina, dihidroxifenilalanina y peróxido de tirosina.

9. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el procedimiento emplea un procedimiento para detectar apoA-I oxidada o un fragmento peptídico de apoA-I oxidada que comprende un residuo de aminoácidos oxidado en una cualquiera de las posiciones 18, 29, 166, 192, 236 o cualquier combinación de dichas posiciones, en SEQ ID NO. 1.

10. Un procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que los niveles de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I se comparan con un valor de control o un intervalo de valores de control basándose en los niveles de la una o más biomoléculas oxidadas ligadas a apoA-I en muestras biológicas comparables de una población de sujetos de control humanos.

11. Un procedimiento según la reivindicación 1 ó 5, en el que el episodio cardiaco adverso importante es infarto de miocardio, un nuevo infarto, la necesidad de revascularización o la muerte.