Un polipéptido sustancialmente puro que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80%idéntica a la SEC.

ID. Nº 1, a condición de que la secuencia de aminoácidos del polipéptido no sea la SEC. ID.Nº 2.

Composiciones y métodos para tratar disfunción eréctil

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

La presente solicitud reivindica la prioridad sobre la Solicitud nº 3884/2007, presentada el 31 de diciembre de 2007 en el Departamento de la Propiedad Industrial de Chile.

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a polipéptidos activos desde un punto de vista terapéutico y originalmente obtenidos de la araña chilena Latrodectus mactans, así como métodos para su purificación y uso en el tratamiento de la disfunción eréctil (DE) .

ANTECEDENTES

La disfunción eréctil (DE) consiste en la incapacidad para desarrollar y mantener una erección para el acto sexual. El estado puede tener causas psicogenéticas u orgánicas que alteran la respuesta eréctil del paciente. Las variaciones en la intensidad hacen que la disfunción eréctil y su incidencia en la población resulten difíciles de definir. Dependiendo de la definición utilizada, hay diversas estimaciones que oscilan entre los 15 y 30 millones de hombres afectados en el mundo. Según la Encuesta Nacional de Atención Médica Ambulatoria (NAMCS) de 1985, en los Estados Unidos ocho de cada 1.000 hombres que visitaron a su médico hablaron de disfunción eréctil. En 1999 esa cifra prácticamente se había triplicado (hasta unos 22 hombres de cada 1.000) , tal vez porque se estaban comenzando a presentar tratamientos y porque el debate sobre la disfunción eréctil empezaba a tener una mayor aceptación. La medicación más publicitada ha sido el tratamiento oral con citrato de sildenafilo (Viagra®) (véase, por ejemplo, la Patente estadounidense nº 6.204.383) . Los datos de la NAMCS indican que la Viagra® se mencionó unos 2, 6 millones de veces durante las visitas médicas en 1999 y un tercio de esas visitas fueron por motivos de diagnósticos no relacionados con la DE.

El proceso de erección exige una secuencia de acontecimientos y la DE puede suceder cuando se interrumpe cualquiera de ellos. Los eventos necesarios incluyen impulsos nerviosos en el cerebro, la médula espinal y la zona que rodea el pene, así como diversas respuestas en los músculos, tejidos fibrosos, venas y arterias del cuerpo cavernoso y cercanas. En ocasiones la disfunción eréctil está asociada con una enfermedad, como la diabetes, renopatía, alcoholismo crónico, esclerosis múltiple, arteriosclerosis, enfermedad vascular o enfermedad neurológica, pero también puede ser un efecto secundario de la medicación (p. ej., un efecto secundario de un antihipertensivo, antihistamínico, antidepresivo, tranquilizante, supresor del apetito o cimetidina) . Otras causas incluyen los traumatismos, incluyendo la cirugía (en particular, cirugía prostática) que provoca daños nerviosos o limita el flujo sanguíneo en el pene. En ausencia de cualquier causa orgánica, se puede determinar que la DE tiene un origen psicológico (DEP) , como la depresión, la ansiedad, el estrés, la tensión o la culpabilidad. La DE no es una consecuencia normal del envejecimiento, pero su incidencia aumenta con la edad. Alrededor del 5% de los hombres de 40 años y el 25% de los hombres de 65 años padecen DE. El tratamiento con éxito se puede aplicar a cualquier edad.

Los tratamientos farmacológicos estándar para la DE incluyen una clase de fármacos conocidos como inhibidores de la fosfodiesterasa tipo 5 (PDE-5) , como el citrato de sildenafilo (Viagra®) . A pesar de que estos fármacos pueden ser muy efectivos, alrededor del 30% del total de los pacientes tratados sufren efectos secundarios. Los inhibidores de PDE5 están asociados con efectos secundarios que incluyen cefalea, enrojecimiento del rostro, molestias estomacales, congestión nasal, infección del tracto urinario, cambios visuales, como cambios leves y temporales en los colores azul/verde o aumento de la sensibilidad a la luz y diarrea. Por otra parte, estos fármacos están contraindicados en pacientes que están tomando fármacos a base de nitratos para la angina de pecho, como nitroglicerina (Nitro-Bid™, entre otros) , mononitrato de isosorbida (Imdur™) y dinitrato de isosorbida (Isordil™) ; anticoagulantes y determinados tipos de bloqueadores alfa para la próstata agrandada (hiperplasia prostática benigna) o tensión arterial elevada. Los inhibidores de PDE5 pueden no ser adecuados para los pacientes que sufren una cardiopatía grave, fallo cardíaco, hipotensión, hipertensión, diabetes incontrolada o que han sufrido un accidente cerebrovascular, así como para los pacientes con trastornos hematológicos que pueden estar asociados con el priapismo (por ejemplo, anemia de células falciformes, mieloma múltiple o leucemia) . Por consiguiente, existe una constante necesidad de terapias seguras y efectivas para el tratamiento de la DE.

RESUMEN

La presente invención presenta composiciones y métodos que se pueden utilizar, entre otras cosas, para el tratamiento de la disfunción eréctil. Las composiciones incluyen un polipéptido aislado del veneno de la araña conocida como la viuda negra, Latrodectus mactans, y fragmentos biológicamente activos u otras variantes de los mismos. De este modo, los polipéptidos presentes se pueden obtener de una latrotoxina (p. ej., una latrotoxina alfa) que puede ser, por ejemplo, una proteína precursora de latrotoxina, latrotoxina madura, una proteína asociada a la

latrotoxina o un fragmento biológicamente activo, u otra variante y homólogo de los mismos. La proteína precursora de latrotoxina incluye la secuencia de latrotoxina madura y uno o más de los polipéptidos presentes pueden encontrarse parcial o totalmente dentro de la secuencia de la latrotoxina madura (p. ej., latrotoxina alfa) . Los fragmentos biológicamente activos y otras variantes de polipéptidos comprendidos en la invención tendrán secuencias que difieren de una latrotoxina naturalmente presente o de una secuencia de referencia (p. ej., la SEC. ID. Nº I) en determinada medida, pero que conservan la capacidad funcional (p. ej., conservan suficiente actividad para utilizarlos para uno o más de los fines descritos en el presente) .

Los polipéptidos, ácidos nucleicos y células huésped descritos en el presente se pueden formular de diversas formas y pueden incluir portadores farmacéuticamente aceptables. Por consiguiente, la invención contiene composiciones fisiológicamente aceptables que están preparadas para la administración, así como concentrados o polvos liofiliados de los polipéptidos presentes. Las formulaciones que están preparadas para la administración y las que exigen una posterior manipulación (por ejemplo, dilución o suspensión) pueden estar empaquetadas como kits con instrucciones de uso y, opcionalmente, cualquier dispositivo o instrumento que pueda facilitar su administración. A pesar de que las secuencias de los polipéptidos presentes pueden variar, los polipéptidos útiles incluyen aquellos que son al menos un 80% idénticos a la SEC. ID. Nº 1: GDSLDPAEFACADDID QAELLKNNDICLQCEDLHKEGLVFSLCKTNCFSTEYFQHCVKDLEEAKKEPPE (SEC. ID. Nº I) . En algunas realizaciones, los polipéptidos presentes excluyen específicamente aquellos que se componen o incluyen la secuencia representada por la SEC. ID. Nº 2, que es también conocida como proteína 2 asociada a la alfalatrotoxina (número Genbank AAY33774; GI:63109347) y tiene la secuencia de aminoácido: MLKLICIAFL VTVLTLVAGQ DSLDPAEFGC ADDVNQAELL KNNDICLQCE DLHKEGVVFS LCKTNCFTTE YFQHCVKDLE EAKKEPPE (SEC. ID. Nº 2; la secuencia contigua mostrada aquí en bloques de 10 aminoácidos) .

La secuencia de aminoácidos de los polipéptidos presentes puede diferir de la SEC. ID. Nº 1, por el hecho de contener (o solamente contener) una o más deleciones, inserciones o sustituciones de aminoácidos. Las sustituciones pueden considerarse conservadoras, como una sustitución dentro de los siguientes grupos: glicina y alanina; valina, isoleucina y leucina; ácido aspártico y ácido glutámico; asparagina, glutamina, serina y treonina; lisina, histodina y arginina; y fenilalanina y tirosina. También se pueden realizar sustituciones no conservadoras e incorporar aminoácidos no presentes naturalmente. Alternativamente, o adicionalmente, la secuencia de aminoácidos puede diferir de la SEC. ID. Nº 1 (que se puede considerar la secuencia “de referencia”) , por el hecho de contener una inserción y/o deleción de uno o más residuos de aminoácidos.

Más concretamente, los polipéptidos de la invención pueden incluir o consistir en la secuencia de aminoácidos representada por SEC.... [Seguir leyendo]

1, Un polipéptido sustancialmente puro que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80% idéntica a la SEC. ID. Nº 1, a condición de que la secuencia de aminoácidos del polipéptido no sea la SEC. ID.5 Nº 2.

2, El polipéptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia de aminoácidos varía de la SEC. ID. Nº 1 por el hecho de contener una o más sustituciones de aminoácidos,

3, El polipéptido de la reivindicación 2, donde la sustitución o sustituciones de aminoácidos comprenden una o más sustituciones de aminoácidos conservadoras,

4, El polipéptido de la reivindicación 1, donde la secuencia de aminoácidos del polipéptido varía de la SEC. ID. Nº 1 por el hecho de contener una o más deleciones o inserciones de aminoácidos,

5, El polipéptido de la reivindicación 1, donde la secuencia de aminoácidos es al menos un 85%, al menos un 90%, al menos un 95% o al menos un 98% idéntica a la SEC. ID. Nº 1,

6, El polipéptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia de aminoácidos se compone de la SEC. ID. Nº 1,

7, Un ácido nucleico aislado que codifica el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8, Un vector de expresión que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 7,

9, Una célula huésped que comprende el vector de expresión de la reivindicación 8,

10, Una composición farmacéuticamente aceptable que comprende el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6,

11, Una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un polipéptido que se compone de una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80% idéntica a la SEC. ID. Nº 1,

12, La composición farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 11, en el que la secuencia de aminoácidos del polipéptido varía de la SEC. ID. Nº 1 por el hecho de contener una o más sustituciones de aminoácidos,

13, La composición farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 12, donde la sustitución o sustituciones de aminoácidos comprenden una o más sustituciones de aminoácidos conservadoras,

14, La composición farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 11, donde la secuencia de aminoácidos del40 polipéptido varía de la SEC. ID. Nº 1 por el hecho de contener una o más deleciones o inserciones de aminoácidos,

15, La composición farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 11, donde la secuencia de aminoácidos del polipéptido es al menos un 85%, al menos un 90%, al menos un 95% o al menos un 98% idéntica a la SEC.45 ID. Nº 1,

16, La composición farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 11, donde la secuencia de aminoácidos comprende una secuencia heteróloga,

50 17, La composición farmacéuticamente aceptable de cualquiera de las reivindicaciones 10, u 11 a 16, que comprende además un segundo ingrediente farmacéuticamente activo,

18, La composición farmacéuticamente aceptable de cualquiera de las reivindicaciones 10, u 11 a 16, donde la composición está formulada para la administración oral,

19, La composición farmacéuticamente aceptable de cualquiera de las reivindicaciones 10, u 11 a 16, donde la composición está formulada para la administración parenteral,

20, La composición farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 17, donde el segundo ingrediente60 farmacéuticamente activo es citrato de sildenafilo,

21, La composición farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 19, donde la administración parenteral es una administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, transdérmica o transmucosa.

22, Una composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 10 a 21 para utilizarla en un método de tratamiento de un sujeto que padece disfunción eréctil, comprendiendo dicho método la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición farmacéutica,

23, La composición de la reivindicación 22, donde el método comprende además el paso de identificar a un sujeto que padece disfunción eréctil,

24, Un método para hacer el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, comprendiendo dicho método el cultivo de la célula huésped de la reivindicación 9, durante un tiempo y bajo condiciones apropiadas 10 para la expresión del polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6,

25, El método de la reivindicación 24, comprendiendo también el paso de aislar el polipéptido de la célula huésped o del medio en el que se cultivó la célula huésped.

Tiempo

FIG. 10

Canal 1

Canal 2

Canal 3

Canal 1

Canal 2