COMPOSICIONES DETERGENTES.

Una composición detergente que comprende una enzima bacteriana alcalina que presenta actividad endobeta-1,

4-glucanasa (E.C. 3.2.1.4) , hasta 10% en peso de aluminosilicato (en base anhidra) y/o agente reforzante de la detergencia de tipo fosfato, teniendo la composici6n una alcalinidad de reserva superior a 4.

Composiciones detergentes CAMP0 TECNlC0

La presente invenci6n se refiere a composiciones detergentes para lavado de ropa y en particular a detergentes que comprenden una enzima bacteriana alcalina que presenta actividad endo-beta-1, 4-glucanasa (E.C. 3.2.1.4)

ANTECEDENTES DE LA lNVENClON Y ESTAD0 DE LA TECNlCA

Se han usado enzimas de tipo celulasa en composiciones detergentes desde hace muchos aros por sus conocidas ventajas de eliminaci6n de bolas, suavidad y cuidado del color. Sin embargo, el uso de la mayorfa de las celulasas ha sido limitado debido al impacto negativo que la celulasa puede tener en la resistencia a la tracci6n de las fibras de los tejidos al hidrolizar la celulosa cristalina. Recientemente, se han desarrollado celulasas con una especificidad muy elevada con respecto a la celulosa amorfa para explotar el potencial limpiador de las celulasas evitando al mismo tiempo la negativa perdida de resistencia a la tracci6n. Se han desarrollado endoglucanasas alcalinas para adecuarse mejor al uso en condiciones de detergente alcalino.

Por ejemplo, Novozymes en W002/099091 describe una enzima novedosa que presenta actividad endo-beta-glucanasa (EC 3.2.1.4) end6gena de la cepa Bacillus sp., DSM 12648; para usar en aplicaciones de detergente y tejidos. Novozymes ademas describe en W004/053039 composiciones detergentes que comprenden una endo-glucanasa con propiedades anti-redeposici6n y su combinaci6n con ciertas glucanasas que tienen mayor estabilidad hacia enzimas de tipo tensioactivo ani6nico y/u otras enzimas especfficas. En EP-265 832, de Kao, se describe celulasa K alcalina novedosa, CMCasa l y CMCasa ll obtenidas por aislamiento a partir de un cultivo de Bacillus sp KSM-635. Kao describe, ademas, en EP-1.350.843, celulasa alcalina que actua favorablemente en un medio alcalino y que puede producirse facilmente en masa porque tiene una elevada capacidad de secreci6n o una mayor actividad especffica.

El problema al que hacfan frente los inventores de la presente invenci6n era c6mo maximizar la eficacia de esta nueva generaci6n de celulasas. Los inventores de la presente invenci6n descubrieron que aunque puede obtenerse una pequera ventaja formulando dichas enzimas segun las formulaciones de detergente actuales remplazando simplemente enzimas celulasa existentes con la nueva generaci6n de enzimas, se descubri6 una mejora considerable en el rendimiento formulando las composiciones detergentes de un modo diferente e incluso reduciendo los niveles de algunos ingredientes detergentes convencionales. De hecho, se ha descubierto sorprendentemente que el uso de niveles muy bajos de aditivo reforzante de la detergencia, o incluso la ausencia completa de aditivo reforzante de la detergencia inorganico, mejora la capacidad limpiadora de la celulasa alcalina bacteriana. Sin pretender imponer ninguna teorfa, se cree que (i) los aditivos reforzantes de la detergencia inorganicos como, por ejemplo, STPP, zeolitas y silicatos interactuan con la dureza para formar materiales insolubles que se depositan sobre los tejidos y pueden interferir con el mecanismo catalftico de la celulasa y que (ii) los iones asociados con la dureza como, por ejemplo, Ca2+ y Mg2+ estabilizan la enzima en soluci6n y favorecen la deposici6n de enzima sobre las superficies de los tejidos. Por lo tanto, se espera que la retirada o reducci6n del aditivo reforzante de la detergencia aumente los niveles de dureza libres que producen un aumento de la estabilidad enzimatica y de la deposici6n superficial, aumentando al mismo tiempo su actividad sobre los tejidos debido a los reducidos niveles de encrustaci6n.

DEFlNlClON DE LA lNVENClON

Segun la presente invenci6n se proporciona una composici6n detergente que comprende una enzima bacteriana alcalina que presenta actividad endo-beta-1, 4-glucanasa (E.C. 3.2.1.4) y que comprende menos de 10% en peso de agente reforzante de la detergencia de tipo aluminosilicato (en base anhidra) y menos de 10% en peso de agente reforzante de la detergencia de tipo fosfato, teniendo la composici6n una alcalinidad de reserva superior a 4.

En un aspecto preferido de la invenci6n, las composiciones detergentes de la invenci6n comprenden menos de un 10% en peso de aditivos reforzantes de la detergencia seleccionados de agente reforzante de la detergencia de tipo aluminosilicato (zeolita) y/o agente reforzante de la detergencia de tipo fosfato. En otro aspecto preferido de la invenci6n, las composiciones comprenden menos de 8% en peso de zeolita, o incluso menos de 4% en peso y menos de 8% en peso de agente reforzante de la detergencia de tipo fosfato o incluso menos de 4% en peso.

LlSTAD0 DE SECUENClAS

SEQ lD N.o: 1 muestra la secuencia de aminoacidos de una endoglucanasa de Bacillus sp. AA349

SEQ lD N.o: 2 muestra la secuencia de aminoacidos de una endoglucanasa de Bacillus sp KSM-S237

DESCRlPClON DETALLADA DE LA lNVENClON Endoglucanasa adecuada La endoglucanasa a incorporar a la composici6n detergente de la presente invenci6n es una o mas enzima/s alcalina/s bacteriana/s que presenta/n actividad endo-beta-1, 4-glucanasa (E.C. 3.2.1.4) y esta comprendida de forma tfpica a un nivel de 0, 00005% a 0, 15%; de 0, 0002% a 0, 02%, o incluso de 0, 0005% a 0, 01% en peso de 5 enzima pura de una o mas endoglucanasas.

En la presente memoria, el termino "endoglucanasa alcalina", significara una endoglucanasa que tiene un pH 6ptimo superior a 7 y que mantiene mas del 70% de su actividad 6ptima a pH 10.

Preferiblemente, la endoglucanasa es un polipeptido bacteriano end6geno de un elemento del genero Bacillus. Mas preferiblemente, la enzima acalina que presenta actividad de endo-beta-1, 4-glucanasa (E.C. 3.2.1.4) , es un 10 polipeptido que contiene (i) al menos un m6dulo de uni6n a carbohidratos de la familia 17 (familia 17 CBM) y/o (ii) al menos un m6dulo de uni6n a un carbohidrato de la familia 28 (familia 28 CBM) . Consultese, a modo de referencia, por ejemplo: Current 0pinion in Structural Biology, 2001, 593-600 de Y. Bourne y B. Henrissat en su artfculo titulado: "Glycoside hydrolases and glycosyltransferases: families and functional modules" para la definici6n y clasificaci6n de CBM. Consultese ademas Biochemical Journal, 2002, v361, 35-40 de A.B. Boraston y col. en su artfculo titulado: "ldentification and glucan-binding properties of a new carbohydrate-binding module family" para las propiedades de la familia 17 y 28 de CBM.

En una realizaci6n preferida, dicha enzima comprende un polipeptido (o variante del mismo) end6geno de una de las siguientes especies de Bacillus:

Son endoglucanasas adecuadas para las composiciones de la presente invenci6n:

1) Una enzima que presenta actividad endo-beta-1, 4-glucanasa (E.C. 3.2.1.4) que tiene una secuencia de al menos 90%, preferiblemente 94%, mas preferiblemente 97% y, aun mas preferiblemente, 99% o 100% de similitud con la secuencia de aminoacidos de la posici6n 1 a la posici6n 773 de la SEQ lD N.o:1 (correspondiente a la SEQ lD N.o2

E061167

en W002/099091) ; o un fragmento de la misma que tiene actividad endo-beta-1, 4-glucanasa, cuando el grado de similitud se determina mediante GAP proporcionado por el programa GCG usando una penalizaci6n por creaci6n de GAP de 3, 0 y una penalizaci6n por extensi6n de GAP de 0, 1. La enzima y el metodo de producci6n correspondiente se describe de forma extensiva en la solicitud de patente W002/099091 publicada por Novozymes A/S el 12 de diciembre de 2002. Consultese, a modo de referencia, la descripci6n detallada en las paginas 4 -17 y en los ejemplos de la pagina 20 a la pagina 26. Una de dichas enzimas... [Seguir leyendo]

1. Una composici6n detergente que comprende una enzima bacteriana alcalina que presenta actividad endobeta-1, 4-glucanasa (E.C. 3.2.1.4) , hasta 10% en peso de aluminosilicato (en base anhidra) y/o agente reforzante de la detergencia de tipo fosfato, teniendo la composici6n una alcalinidad de reserva superior a 4.

5 2. Una composici6n segun la reivindicaci6n 1, en donde la enzima es un polipeptido bacteriano end6geno de un elemento del genero Bacillus.

3. Una composici6n segun las reivindicaciones 1-2, en donde la enzima es un polipeptido que contiene (i) al menos un m6dulo de uni6n a un carbohidrato de la familia 17 y/o (ii) al menos un m6dulo de uni6n a un carbohidrato de la familia 28.

10 4. Una composici6n segun las reivindicaciones 1-3, en donde la enzima comprende un polipeptido end6geno a una de las siguientes especies de Bacillus seleccionadas del grupo que consiste en: AA349 DSM 12648; KSM S237, 1139; KSM 64; KSM N131; KSM 635, FERM BP 1485; KSM 534, FERM BP 1508; KSM 53, FERM BP 1509; KSM 577; FERM BP 1510; KSM 521, FERM BP 1507; KSM 580, FERM BP 1511; KSM 588, FERM BP 1513; KSM 597, FERM BP 1514; KSM 522, FERM BP 1512; KSM 3445, FERM BP 1506; KSM 425, FERM BP 1505, y mezclas

de los mismos.

5. Una composici6n segun las reivindicaciones 1-4, en donde la enzima es seleccionada del grupo que consiste en:

(i) la endoglucanasa que tiene la secuencia de aminoacidos de las posiciones 1 a la posici6n 773 de la SEQ lD N.o:1;

(ii) una endoglucanasa que tiene una secuencia de al menos 90%, preferiblemente 94%, mas preferiblemente 97% y aun mas preferiblemente 99%, 100% de similitud con la secuencia de aminoacidos de la posici6n 1 a la posici6n 773 de la SEQ lD N.o:1; o un fragmento de la misma tiene actividad endobeta-1, 4-glucanasa, cuando la similitud se determina mediante GAP proporcionado por el programa GCG usando una penalizaci6n por creaci6n de GAP de 3, 0 y una penalizaci6n por extensi6n de GAP de 0, 1; y (iii) mezclas de los mismos.

6. Una composici6n segun las reivindicaciones 1-4, en donde la enzima es una variante de endoglucanasa alcalina obtenida sustituyendo el residuo de aminoacidos de una celulasa que tiene una secuencia de aminoacidos que presenta al menos 90%, preferiblemente 95%, mas preferiblemente 98%, 100% de similitud con la secuencia de aminoacidos representada como SEQ. lD N.o:2 en: (a) posici6n 10, (b) posici6n 16, (c) posici6n 22, (d) posici6n 33, (e) posici6n 39, (f) posici6n 76, (g) posici6n 109, (h) posici6n 242, (i) posici6n 263, (j) posici6n 308, (k) posici6n 462, (l) posici6n 466, (m) posici6n 468, (n) posici6n 552, (o) posici6n 564 y/o (p) posici6n 608 en la SEQ lD N.o:2, y/o en una posici6n correspondiente a la misma con otro residuo de aminoacidos.

7. Una composici6n segun la reivindicaci6n 5, en donde la enzima esta caracterizada por al menos una de las siguientes sustituciones:

(a) en la posici6n 10: glutamina, alanina, prolina o metionina, preferiblemente glutamina;

(b) en la posici6n 16: asparagina o arginina, preferiblemente asparagina;

(c) en posici6n 22: prolina;

(d) en la posici6n 33: histidina;

(e) en la posici6n 39: alanina, treonina o tirosina, preferiblemente alanina;

(f) en la posici6n 76: histidina, metionina, valina, treonina o alanina, preferiblemente histidina;

(g) en la posici6n 109: isoleucina, leucina, serina o valina, preferiblemente isoleucina;

(h) en la posici6n 242: alanina, fenilalanina, valina, serina, acido aspartico, acido glutamico, leucina, isoleucina, tirosina, treonina, metionina o glicina, preferiblemente alanina, fenilalanina o serina;

(i) en la posici6n 263: isoleucina, leucina, prolina o valina, preferiblemente isoleucina;

45 (j) en la posici6n 308: alanina, serina, glicina o valina, preferiblemente alanina;

(k) en la posici6n 462: treonina, leucina, fenilalanina o arginina, preferiblemente treonina;

(l) en la posici6n 466: leucina, alanina o serina, preferiblemente leucina;

(m) en la posici6n 468: alanina, acido aspartico, glicina o lisina, preferiblemente alanina;

(n) en la posici6n 552: metionina;

(o) en la posici6n 564: valina, treonina o leucina, preferiblemente valina; y/o

(p) en la posici6n 608: isoleucina o arginina, preferiblemente isoleucina.

8. Una composici6n segun las reivindicaciones 6 y 7, en donde la enzima se selecciona del grupo que consiste en las siguientes variantes de endoglucanasa: Egl-237, Egl-1139, Egl-64, Egl-N131b y mezclas de las mismas.

9. Una composici6n segun las reivindicaciones 1-4, en donde la enzima es una celulasa alcalina K que tiene las siguientes propiedades ffsicas y qufmicas:

(1) Actividad: tiene una actividad enzimatica Cx de actuaci6n sobre la carboximetilcelulosa junto con una actividad enzimatica C1 debil y una actividad de beta-glucoxidasa debil;

(2) Especificidad en sustratos: actua en la carboximetilcelulosa (CMC) , celulosa cristalina, Avicell, celobiosa, y p-nitrofenilcelobiosida (PNPC) ;

(3) Tiene un pH de trabajo en el intervalo de 4 a 12 y un pH 6ptimo en el intervalo de 9 a 10;

(4) Tiene valores de pH estables de 4, 5 a 10, 5 y de 6, 8 a 10 cuando se deja reposar a 40 oC durante 10 y 30 minutos respectivamente;

(5) Se puede trabajar con ella en un amplio intervalo de temperatura de 10 oC a 65 oC con una temperatura 6ptima reconocida en aproximadamente 40 oC;

(6) lnfluencias de los agentes quelantes: la actividad no impedida con el acido

etilendiaminotetraacetico (EDTA) , el acido etileneglicol-bis- ( -aminoetileter) N, N, N', N''-tetraacetico (EGTA) , la N, N-bis (carboximetil) glicina (acido nitrilotriacetico) (NTA) , el tripolifosfato s6dico (STPP) y la zeolita;

(7) lnfluencias de los agentes tensioactivos: experimenta poca inhibici6n de la actividad debida a agentes tensioactivos como, por ejemplo, los alquilbencenosulfonatos lineales de sodio (LAS) , los alquilsulfatos de sodio (AS) , los polioxietilenalquilsulfatos de sodio (ES) , los alfaolefinsulfonatos de sodio (A0S) , los esteres de acidos alifaticos alfa-sulfonados de sodio (alfa-SFE) , alquilsulfonatos de sodio (SAS) , alquileteres secundarios de polioxietileno, sales de acido graso (sales de sodio) , y cloruro de dimetildialquilamonio;

(8) Tiene una gran resistencia a las proteinasas; y 30 (9) Peso molecular (determinado mediante cromatograffa de gel) : tiene un pico maximo a 180.000 ±

10.000.

10. Una composici6n segun la reivindicaci6n 9, en donde la celulasa alcalina K se obtiene mediante aislamiento de un producto de cultivo de Bacillus sp KSM-635.

11. Una composici6n segun las reivindicaciones 1-3, en donde la enzima es seleccionada del grupo que 35 consiste en: La celulasa alcalina K-534 de KSM 534, FERM BP 1508, La celulasa alcalina K-539 de KSM 539, FERM BP 1509, La celulasa alcalina K-577 de KSM 577, FERM BP 1510, La celulasa alcalina K-521 de KSM 521, FERM BP 1507, 40 La celulasa alcalina K-580 de KSM 580, FERM BP 1511, La celulasa alcalina K-588 de KSM 588, FERM BP 1513, La celulasa alcalina K-597 de KSM 597, FERM BP 1514, La celulasa alcalina K-522 de KSM 522, FERM BP 1512, La celulasa alcalina E-ll de KSM 522, FERM BP 1512, E061167

La celulasa alcalina E-lll de KSM 522, FERM BP 1512.

La celulasa alcalina K-344 de KSM 344, FERM BP 1506, La celulasa alcalina K-425 de KSM 425, FERM BP 1505, y mezclas de las mismas.

12. Una composici6n segun las reivindicaciones 1-3, en donde la enzima es seleccionada del grupo que consiste en endoglucanasas derivadas de la especie de Bacillus KSM -N, preferiblemente es la endoglucanasa alcalina Egl-546H derivada de Bacillus sp. KSM-N546.

13. Una composici6n segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la enzima alcalina bacteriana que presenta actividad endo-beta-1, 4-glucanasa esta comprendida a un nivel de 0, 00005% a 0, 15%, preferiblemente de 0, 0002% a 0, 02% o, mas preferiblemente, de 0, 0005% a 0, 01% en peso de enzima pura.

14. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende menos de 8% en peso de aluminosilicato (en base anhidra) y/o agente reforzante de la detergencia de tipo fosfato.

15. Un composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende menos de 5% en peso de aluminosilicato (en base anhidra) y/o agente reforzante de la detergencia de tipo fosfato.

16. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que tiene una alcalinidad de reserva superior a 7, 5.

17. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende de 0, 1% a 40% en peso de tensioactivo alquilsulfato alcoxilado y/o de 0, 1% a 40% en peso alquilo (C1-4) estersulfonato, preferiblemente metilestersulfonato (MES) .

18. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende un reforzador de formaci6n de las jabonaduras en una cantidad de 0, 05% a 2% en peso, preferiblemente seleccionado de amidas de acido graso, alcanolamidas de acidos grasos, betafnas, sulfobetafnas y 6xidos de amina o mezclas de los mismos.

19. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende de 0, 05% a 5%, preferiblemente de 0, 1% a 1% en peso de polfmero para la liberaci6n de la suciedad, preferiblemente seleccionado de eteres de celulosa modificados, tales como metilhidroxietilcelulosa (MHEC) o polfmeros para la liberaci6n de la suciedad de tipo poliester o mezclas de los mismos.

20. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende de 0, 01% en peso a 10% en peso de un quelante, preferiblemente seleccionado del grupo que consiste en acido 4, 5dihidroxi-m-bencenodisulf6nico, sal dis6dica (Tiron®) ; acido hidroxietano-dimetilen-fosf6nico (HEDP) ; acido 2fosfonobutano-1, 2, 4-tricarboxflico (PBTC) y mezclas de los mismos.

21. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende un abrillantador 6ptico de la siguiente estructura, en la que R1 y R2, junto con el atomo de nitr6geno que los une, forman un anillo morfolino, piperidina o pirrolidina no sustituido o sustituido con alquilo C1-C4:

N NH R1

H2N

R2

S03Na N

N

N

N

N

N

S03Na NH N

NH2

R1

R2

22. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, comprendiendo ademas una enzima lipasa (E.C. 3.1.1.3) .

23. Una composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es una composici6n detergente s6lida, preferiblemente granulada.

24. Un proceso de lavado que comprende lavar artfculos textiles en una soluci6n acuosa, que comprende la composici6n detergente segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

25. Un proceso de lavado segun la reivindicaci6n 24, en el que la soluci6n acuosa esta a una temperatura inferior a 30 oC.