Un procedimiento in vitro para evaluar el riesgo de muerte dentro del año para un sujeto,

comprendiendo el procedimiento: determinar un nivel de ST2 en una muestra de ensayo de un sujeto; y comparar el nivel en la muestra de ensayo con un nivel de referencia de ST2, en el que el nivel de ST2 en la muestra en comparación con el nivel de referencia indica el riesgo de muerte del sujeto dentro de un periodo de tiempo especificado de un año

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a procedimientos para predecir la mortalidad y detectar la presencia de una enfermedad grave midiendo los niveles circulantes de ST2 solo o en combinación con otros biomarcadores. ANTECEDENTES

La evaluación clínica de sujetos, particularmente los que tienen síntomas no específicos tales como dolor de pecho o malestar, falta de aliento, náuseas, vómitos, eructos, sudoración, palpitaciones, mareos, fatiga o desvanecimiento, puede presentar desafíos significativos, ya que no siempre son evidentes la causa y la gravedad de la afección del sujeto. La decisión de si tratar a un sujeto de manera agresiva o conservativa, o de si admitir al sujeto como un paciente hospitalizado o enviarlo a casa, algunas veces puede tomarse únicamente basándose en una evaluación clínica del médico o por “instinto visceral” en cuanto al estado real del individuo. Los biomarcadores que indican la probabilidad de que un sujeto tenga un resultado adverso, por ejemplo mortalidad, y/o la presencia de enfermedad grave mejorarían significativamente la capacidad del médico de tomar decisiones de tratamiento fundamentadas. SUMARIO

La presente invención se basa, al menos en parte, en el descubrimiento de que los niveles en suero del biomarcador ST2 (gen 2 expresado por estimulación del crecimiento, también conocido como receptor de interleucina 1 tipo 1 (IL1RL-1)) puede usarse para predecir el resultado clínico, por ejemplo, la muerte, dentro de un periodo de tiempo específico, por ejemplo 30 días, 3 ó 6 meses, o un año o más, o para detectar la presencia de enfermedad grave, independientemente de las causas subyacentes de los síntomas o del diagnóstico final. Los cambios en el nivel de ST2 a lo largo del tiempo, por ejemplo, durante unos cuantos días o más, también pueden usarse para predecir el resultado clínico, por ejemplo, en pacientes hospitalizados después de un acontecimiento agudo.

Los procedimientos descritos en el presente documento incluyen medir los niveles de ST2 así como supervisar los cambios en los niveles de ST2 a lo largo del tiempo (por ejemplo, relaciones) para proporcionar evaluaciones de diagnóstico y pronóstico de pacientes, por ejemplo pacientes con síntomas no específicos, por ejemplo, pacientes con disnea aguda y los que tienen dolor de pecho.

La IL-33 se ha identificado como el ligando de ST2. De esta manera, la revelación incluye procedimientos para evaluar a los pacientes mediante la supervisión de los niveles de biomarcadores de ST2 y/o niveles de IL-33, así como de complejos ST2/IL-33, y las relaciones de complejos ST2:IL-33 con respecto a ST2 y/o IL-33 libres.

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Además, los procedimientos pueden incluir el uso de procedimientos de diagnóstico adicionales, incluyendo la evaluación de la función de órganos y/o niveles de biomarcadores auxiliares tales como troponina (Tn, por ejemplo, TnI o TnT), péptido natriurético cerebral (BNP), proBNP, NTproBNP, péptido natriurético atrial (ANP), NT-proANP, proANP, péptido Creactivo (CRP), nitrógeno de urea en sangre (BUN), dímeros-D (productos de degradación de fibrina reticulada, cuyo nivel se eleva después de la formación de un coágulo), albúmina, enzimas de la función hepática, medidas de la función renal (por ejemplo, creatinina, tasa de aclaramiento de creatinina, o tasa de filtración glomerular) y/o endotoxina bacteriana. En algunas realizaciones, los procedimientos incluyen medir ST2 y/o un cambio en los niveles de ST2 a lo largo del tiempo además de BUN, NT-proBNP o BNP y/o TnI.

De esta manera, en un aspecto, la invención se refiere a procedimientos para evaluar el riesgo de muerte dentro de un periodo de tiempo específico de un año, para un sujeto. Los procedimientos incluyen usar una muestra, por ejemplo, sangre, suero, plasma, orina o un tejido corporal obtenido a partir del sujeto; determinar el nivel de biomarcador de ST2 en la muestra; y comparar el nivel de biomarcador de ST2 en la muestra con un nivel de referencia de ST2. Una comparación del nivel de biomarcador de ST2 en la muestra frente a la referencia indica el riesgo del sujeto de muerte dentro del periodo de tiempo específico. El periodo de tiempo específico es un año.

En algunas realizaciones, el nivel de referencia representa un nivel en un sujeto que tiene bajo riesgo de muerte dentro de un año. En algunas realizaciones, por ejemplo, en las que el nivel de biomarcador de ST2 se mide usando un inmunoensayo, por ejemplo, un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA), por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 1, el nivel de referencia de ST2 está comprendido entre aproximadamente 0,2 y 0,3 ng/ml de suero, por ejemplo, el nivel puede ser 0,20, 0,23, 0,25, 0,27, o 0,29 ng/ml de suero, y un nivel en la muestra que es mayor o igual al nivel de referencia indica que el sujeto tiene un riesgo elevado, es decir, elevado de una forma estadísticamente significativa, de muerte dentro de un periodo de año. Si se emplea una técnica analítica distinta del ELISA descrito en el Ejemplo 1, el nivel de referencia de ST2 puede ser diferente del descrito en el presente documento; los números específicos mencionados en el presente documento deben considerarse equivalentes a números correspondientes generados usando otras técnicas analíticas. En algunas realizaciones, el riesgo elevado de muerte es al menos un 20% mayor, por ejemplo, un 30%, 40% o 50% mayor.

En otro aspecto, la revelación se refiere a procedimientos para determinar la gravedad de una o más enfermedades, por ejemplo, la gravedad actual de enfermedades, en un sujeto. Los procedimientos incluyen obtener una muestra a partir del sujeto; determinar un nivel de

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biomarcador de ST2 y/o IL-33 en la muestra; y comparar el nivel de biomarcador de ST2 y/o IL33 en la muestra con un nivel de referencia de ST2 y/o IL-33. El nivel de biomarcador de ST2 y/o IL-33 en la muestra en comparación con la referencia indica si la enfermedad o enfermedades que tiene el sujeto son graves, por ejemplo, ponen en riesgo la vida.

En otro aspecto, la revelación incluye procedimientos para supervisar el estado de un sujeto, por ejemplo, para decidir si un sujeto ha mejorado, por ejemplo, ha mejorado lo suficiente como para salir del hospital. Los procedimientos incluyen determinar un primer nivel de biomarcador de ST2 y/o IL-33 en el sujeto, por ejemplo, un nivel basal; y determinar al menos un nivel posterior de biomarcador de ST2 y/o IL-33 en el sujeto, por ejemplo, un nivel de tratamiento. Después se comparan el primer nivel y los niveles posteriores. Si el nivel de biomarcador de ST2 y/o IL-33 se reduce lo suficiente, por ejemplo, de una forma estadísticamente significativa, o al menos en un 5%, 10%, 15%, 20% o más, desde el primer nivel a los niveles posteriores, entonces es probable que el estado del sujeto esté mejorando y, si uno o los dos niveles son suficientemente bajos, por ejemplo, están por debajo de un umbral seleccionado, entonces puede darse el alta al sujeto, por ejemplo, para el tratamiento como paciente externo.

En algunas realizaciones, los procedimientos incluyen determinar el nivel de ST2 que indica el riesgo de un sujeto, y opcionalmente seleccionar o modificar el tratamiento para el sujeto, basándose en la relación del primer nivel de ST2, por ejemplo, un nivel basal, con respecto al segundo nivel de ST2, por ejemplo, un nivel tomado algún tiempo después, por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro o más días después. Por ejemplo, si el segundo nivel de ST2 es más que un porcentaje seleccionado del primer nivel, entonces el sujeto tiene un alto riesgo y debe tratarse de manera más agresiva; si el sujeto ya se está tratando, entonces el sujeto no está respondiendo favorablemente al tratamiento actual y debe seleccionarse un nuevo tratamiento, es decir, un tratamiento alternativo al que el paciente pueda responder de manera más favorable. Como un ejemplo, si el segundo nivel es aproximadamente un 85% o más del primer nivel (es decir, se ha reducido aproximadamente en un 15% o menos), el sujeto no está mejorando y sigue teniendo un alto riesgo de muerte.

En algunas realizaciones, el nivel de ST2 en un sujeto se compara con un nivel de referencia que representa un nivel en un sujeto que no tiene enfermedad grave, por ejemplo, no tiene enfermedad o no tiene enfermedad aguda grave, por ejemplo, cuando se mide usando un ELISA, por ejemplo, como se describe en el presente documento. El nivel de referencia de ST2 puede estar comprendido entre aproximadamente 0,2 y 0,3 ng/ml, por ejemplo, el nivel puede ser de aproximadamente 0,20, 0,23,...

1. Un procedimiento in vitro para evaluar el riesgo de muerte dentro del año para un sujeto,

comprendiendo el procedimiento: determinar un nivel de ST2 en una muestra de ensayo de un sujeto; y comparar el nivel en la muestra de ensayo con un nivel de referencia de ST2, en el que el nivel de ST2 en la muestra en comparación con el nivel de referencia indica el riesgo de muerte del sujeto dentro de un periodo de tiempo especificado de un año.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que un nivel de ST2 en la muestra de ensayo que es mayor o igual al nivel de referencia indica que el sujeto tiene un riesgo elevado de muerte dentro del año, en comparación con un sujeto con un nivel de ST2 por debajo del nivel de referencia.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sujeto no tiene un diagnóstico, no tiene un trastorno cardiovascular, tiene un trastorno pulmonar o tiene un trastorno hepático.

4. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que el sujeto presenta uno o más síntomas no específicos.

5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que dicho uno o más síntomas no específicos se seleccionan entre el grupo que consiste en dolor de pecho o malestar, falta de aliento, náuseas, vómitos, eructos, sudoración, palpitaciones, mareo, fatiga y desvanecimiento.

6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, que comprende además

determinar el nivel de un biomarcador auxiliar en la muestra; y comparar el nivel del biomarcador auxiliar en la muestra con un nivel de referencia de biomarcador auxiliar; en el que el nivel del biomarcador auxiliar en la muestra en comparación con el nivel de referencia del biomarcador auxiliar, en combinación con el nivel de ST2 en la muestra en comparación con el nivel de referencia de ST2, indica si el sujeto tiene un mayor riesgo de muerte.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que el biomarcador auxiliar se selecciona

entre el grupo que consiste en troponina, péptido natriurético cerebral (BNP), proBNP, NT

proBNP, péptido natriurético atrial (ANT), NT-proANP, pro ANP, péptido C reactivo (CRP), creatinina, tasa de aclaramiento de creatinina, tasa de filtración glomerular (TFG), dímeros-D, Nitrógeno de Urea en Sangre (BUN), albúmina, enzimas de la función hepática, endotoxina bacteriana y cualquier combinación de dos o más de los anteriores.

8. El procedimiento de la reivindicación 6, que comprende determinar los niveles de (i) NTproBNP, proBNP o BNP y (ii) ST2 en la muestra.

9. El procedimiento de la reivindicación 6, que comprende determinar los niveles de (i) NT

10 proBNP y (ii) ST2 en la muestra, en el que el riesgo de muerte del sujeto dentro del año se determina de acuerdo con la siguiente tabla:

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

10. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el nivel de referencia de ST2 representa un nivel de ST2 que corresponde a un riesgo aumentado de una forma estadísticamente significativa de muerte dentro del año en comparación con individuos sanos.

11. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que la muestra de ensayo es una muestra de suero, sangre, plasma, orina o tejido corporal.

12. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que el sujeto tiene un IMC de 25-29, un IMC de ≥ 30 o insuficiencia renal.

13. Un kit que comprende tanto un anticuerpo para ST2 como un anticuerpo para NTproBNP, 25 e instrucciones para realizar el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9.