Un método para reducir la expresión fenotípica de un ácido nucleico de interés,

que se puede expresar en una célula eucariótica, que comprende la operación de introducir en dicha célula un DNA quimérico que comprende las siguientes partes operativamente enlazadas: a) un promotor, operativo en dicha célula eucariótica; b) una región de DNA que, cuando se transcribe, produce una molécula de RNA con una secuencia de nucleótidos que comprende i. una secuencia de nucleótidos sentido de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de entre 75 y 100% con al menos parte de una región de codificación de dicho ácido nucleico de interés; y ii. una secuencia de nucleótidos antisentido que incluye al menos 10 nucleótidos consecutivos, que tiene una identidad de secuencia de entre 75% y 100% con el complemento de dichos al menos 10 nucleótidos consecutivos de dicha secuencia de nucleótidos sentido; en que el RNA es capaz de formar una estructura de RNA artificial en horquilla con un tallo de RNA de doble cadena por apareamiento de bases entre las regiones con secuencias de nucleótidos sentido y antisentido de modo que al menos dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia sentido se apareen por bases con dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia antisentido; en que dicho ácido nucleico de interés es un gen integrado en el genoma de dicha célula eucariótica, y en que dicho método no es un método de tratamiento del organismo humano o animal por cirugía o terapia, ni un método diagnóstico llevado a la práctica en el organismo humano o animal.

1. Campo del invento

El invento se refiere a métodos para reducir la expresión fenotípica de una secuencia de ácido nucleico de interés en células eucarióticas, particularmente células vegetales, al proporcionar simultáneamente a las células genes quiméricos que codifican moléculas de RNA sentido y antisentido que comprenden secuencias de nucleótidos homólogas y complementarias, respectivamente, con respecto a al menos parte de la secuencia de nucleótidos del ácido nucleico de interés. Las moléculas de RNA sentido y antisentido se proporcionan como una molécula de RNA, en que los RNA sentido y antisentido pueden estar enlazados por una secuencia nucleotídica espaciadora y son capaces de formar una molécula de RNA de cadena doble.

En un aspecto del invento, los métodos se dirigen hacia la reducción de una infección vírica, para dar lugar a una resistencia extrema a virus. En otra realización, los métodos se dirigen hacia la reducción de la expresión fenotípica de un gen endógeno en una célula vegetal. El invento se refiere además a métodos de exploración de alto rendimiento para identificar el fenotipo proporcionado por el ácido nucleico de interés a células vegetales. También se proporcionan células vegetales que comprenden dichas moléculas de RNA, así como plantas que consisten esencialmente en dichas células vegetales.

2. Fundamento del invento

En 1985, Sanford y Johnston propusieron el concepto de resistencia derivada de parásitos. Propusieron como postulado que productos génicos clave de un parásito expresados en el huésped en una forma disfuncional, en exceso o en una fase de desarrollo errónea, deberían alterar la función del parásito con un efecto mínimo sobre el huésped (Sanford y Johnston, 1985). Utilizando el bacteriófago QB como modelo, propusieron que la expresión, en bacterias, de la proteína de envoltura o la replicasa modificada del bacteriófago o de un RNA antisentido complementario del genoma de QB podría proporcionar resistencia. También propusieron que dichos planteamientos serían aplicables, en plantas, a virus vegetales y particularmente al uso de una replicasa modificada de un virus vegetal. La expresión de la proteína de envoltura del virus vegetal, el virus del mosaico del tabaco (TMV; del inglés, tobacco mosaic virus), en el tabaco fue la primera validación práctica de este concepto en cuanto a la resistencia a virus vegetales. Este trabajo (Powell-Abel et al., 1986) mostró que la expresión de la proteína de envoltura del TMV, procedente de un transgén bajo el control del promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor (CaMV; del inglés, cauliflower mosaic virus), confería resistencia al TMV a las plantas. El mismo grupo (Powell et al., 1990) mostró que las plantas que expresaban mayores niveles de proteína de envoltura eran generalmente más resistentes al TMV que las plantas que expresaban bajos niveles. Desde esta demostración, ha habido muchísimos ejemplos de plantas transformadas con genes de proteínas de envoltura de virus que muestran resistencia (Tabla 1). También ha habido diversos informes sobre resistencia a virus vegetales en plantas que expresan replicasa de tipo silvestre (Braun y Hemenway, 1992; Brederode et al., 1995), replicasa truncada (Carr et al., 1992), replicasa modificada (Longstaff et al., 1993) o RNA vírico antisentido (Kawchuck et al., 1991).

En 1992, Dougherty y sus colegas estaban utilizando diferentes formas del gen de la proteína de envoltura del virus del grabado del tabaco (TEV; del inglés, tobacco etch virus) y descubrieron que ciertas plantas que contenían genes de proteína de envoltura "antisentido" y genes de proteína de envoltura "sentido" no traducibles mostraban una resistencia extrema (ER; del inglés, extreme resistance) al virus (Lindbo y Dougherty, 1992 a, b). Esta resistencia era funcional a nivel de la planta completa y a nivel de una sola célula. El TEV era incapaz de replicarse en protoplastos procedentes de plantas ER pero se replicaba con niveles elevados en protoplastos procedentes de tabaco no transgénico. Dougherty et al. concluyeron que el mecanismo que creaba la resistencia extrema para la construcción sentido no traducible no era el mismo que la a menudo presentada estrategia mediada por la proteína de envoltura. Propusieron que el mRNA de la construcción sentido no traducible se estaba hibridando con el genoma sentido menos del virus e interfiriendo con la procesión de complejos de replicación en la cadena menos. Sugirieron que debía evitarse el uso de una secuencia vírica que pudiera formar un apareamiento intramolecular ya que esto interferiría con su capacidad para hibridarse con el RNA vírico diana.

Tabla 1: Especies vegetales que han sido genéticamente modificadas para resistencia a virus (de Rebecca Grumet, Hort Science 30 [3], 1995)

**(Ver fórmula)**

40

45

50

55

El grupo de Dougherty amplió sus investigaciones a plantas que contenían genes sentido no traducibles de la proteína de envoltura del virus Y de la patata (PVY; del inglés, potato virus Y). Obtuvieron resultados similares a aquellos con el TEV y mostraron que las plantas con ER tenían un elevado número de copias de transgenes, una transcripción muy activa de los transgenes, y bajos niveles de mRNA en estado estacionario procedente del transgén del PVY (Lindbo et al., 1993; Smith et al., 1994). Se propuso el siguiente modelo para este mecanismo de la resistencia: el elevado nivel de transcripción del transgén vírico desencadena un sistema de vigilancia celular postranscripcional, de base citoplásmica, que se dirige a RNAs específicos para su eliminación. Puesto que el transgén codifica un transcrito que comprende secuencias víricas, el mecanismo no sólo degrada el mRNA del transgén sino también las mismas secuencias del RNA genómico vírico. Un punto esencial en este modelo es la necesidad de un elevado nivel de transcripción del transgén, proporcionado por un elevado número de copias (3-8; Goodwin et al., 1996). Alternativamente, el umbral de RNA requerido para que se desencadene el mecanismo puede ser alcanzado por un nivel de transcripción más modesto ayudado por el RNA vírico de la replicación en la primera infección. Esto da lugar a un "fenotipo de recuperación", en el que la planta está inicialmente infectada y muestra síntomas pero luego produce nuevo crecimiento sin síntomas de virus, y que es sumamente resistente a la infección.

Esta propuesta vino corroborada por los hallazgos de que el silenciamiento génico de transgenes no víricos podía ser también debido a un mecanismo postranscripcional (Ingelbrecht et al., 1994; de Carvalho Niebel et al., 1995) que funcionaba a nivel de RNA.

Se obtuvo un vínculo entre silenciamiento de genes no víricos y esta resistencia derivada de patógenos al inocular un virus que contenía secuencias de GUS en plantas transgénicas en las que se sabía que un transgén GUS estaba silenciado por un mecanismo postranscripcional (English et al., 1996). En esta situación, las plantas eran muy resistentes a la infección vírica. Sin embargo, las mismas plantas eran susceptibles al virus si no contenían secuencias de GUS.

El grado de resistencia vírica no está siempre directamente relacionado con el nivel de transcripción de transgenes víricos (Mueller et al., 1995; English et al., 1996), lo que sugiere que puede haber un mecanismo alternativo para inducir la resistencia. Para acomodar estas discrepancias, se ha propuesto un modelo alternativo en que el factor crucial que afecta a la resistencia no es el nivel sino la calidad del mRNA transgénico (English et al., 1996). De acuerdo con este modelo, el transgén sólo puede inducir resistencia (o silenciamiento génico) si es transcrito para producir RNA "aberrante". Ha habido muchos ejemplos de silenciamiento génico postranscripcional y metilación del transgén (Hobbs et al., 1990; Ingelbrecht et al., 1994), y se ha hallado también que la metilación del transgén está asociada en algunos casos de resistencia vírica... [Seguir leyendo]

1. Un método para reducir la expresión fenotípica de un ácido nucleico de interés, que se puede expresar en una célula eucariótica, que comprende la operación de introducir en dicha célula un DNA quimérico que comprende las siguientes partes operativamente enlazadas:

a) un promotor, operativo en dicha célula eucariótica;

b) una región de DNA que, cuando se transcribe, produce una molécula de RNA con una secuencia de nucleótidos que comprende

i. una secuencia de nucleótidos sentido de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de entre 75 y 100% con al menos parte de una región de codificación de dicho ácido nucleico de interés; y

ii. una secuencia de nucleótidos antisentido que incluye al menos 10 nucleótidos consecutivos, que tiene una identidad de secuencia de entre 75% y 100% con el complemento de dichos al menos 10 nucleótidos consecutivos de dicha secuencia de nucleótidos sentido;

en que el RNA es capaz de formar una estructura de RNA artificial en horquilla con un tallo de RNA de doble cadena por apareamiento de bases entre las regiones con secuencias de nucleótidos sentido y antisentido de modo que al menos dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia sentido se apareen por bases con dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia antisentido;

en que dicho ácido nucleico de interés es un gen integrado en el genoma de dicha célula eucariótica, y

en que dicho método no es un método de tratamiento del organismo humano o animal por cirugía o terapia, ni un método diagnóstico llevado a la práctica en el organismo humano o animal.

2. Un método de acuerdo con la Reivindicación 1, en que el DNA quimérico comprende además una región de DNA implicada en la terminación de la transcripción y la poliadenilación.

3. Un método para reducir la expresión fenotípica de un ácido nucleico de interés, que se puede expresar en una célula eucariótica, que comprende la operación de introducir en dicha célula una molécula de RNA quimérica que comprende al menos una región de RNA con una secuencia de nucleótidos que comprende

i. una secuencia de nucleótidos sentido de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de entre 75 y 100% con al menos parte de una región de codificación del ácido nucleico de interés; y

ii. una secuencia de nucleótidos antisentido que incluye al menos 10 nucleótidos consecutivos, que tiene una identidad de secuencia de entre 75% y 100% con el complemento de dichos al menos 10 nucleótidos consecutivos de dicha secuencia de nucleótidos sentido;

en que dicha región de RNA es capaz de formar una estructura de RNA artificial en horquilla con un tallo de RNA de doble cadena por apareamiento de bases entre las regiones con secuencias de nucleótidos sentido y antisentido de modo que al menos dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia sentido se apareen por bases con dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia antisentido; y

en que dicho ácido nucleico de interés es un gen integrado en el genoma de dicha célula eucariótica, y

en que dicho método no es un método de tratamiento del organismo humano o animal por cirugía o terapia, ni un método diagnóstico llevado a la práctica en el organismo humano o animal.

4. El método de la Reivindicación 1 ó 2, en que dicha molécula de RNA comprende además una secuencia de nucleótidos espaciadora situada entre dichas secuencias de nucleótidos sentido y antisentido.

5. El método de la Reivindicación 1 ó 2, en que dicha secuencia de nucleótidos sentido tiene una longitud total de al menos 15 nucleótidos.

6. El método de la Reivindicación 1 ó 2, en que la secuencia de nucleótidos sentido total tiene una identidad de secuencia de al menos 85% con la parte correspondiente del ácido nucleico de interés.

7. El método de la Reivindicación 6, en que la secuencia de nucleótidos sentido incluye una secuencia de 20 nucleótidos con una identidad de secuencia del 100% con la parte correspondiente del ácido nucleico de interés.

8. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 5 a 7, en que dicha secuencia de nucleótidos antisentido tiene una longitud total que corresponde a la de la secuencia de nucleótidos sentido.

9. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 5 a 7, en que la longitud de la secuencia de nucleótidos antisentido difiere de la de la secuencia de nucleótidos sentido en aproximadamente un 10%.

10. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, en que la secuencia de nucleótidos antisentido tiene una identidad de secuencia de al menos 85% con el complemento de la secuencia de nucleótidos sentido.

11. El método de la Reivindicación 10, en que la secuencia de nucleótidos antisentido incluye una secuencia de 20 nucleótidos con una identidad de secuencia del 100% con el complemento de la secuencia de nucleótidos sentido.

12. El método de la Reivindicación 1 ó 2, en que dicha secuencia de nucleótidos sentido tiene una longitud total de al menos 50 nucleótidos.

13. El método de la Reivindicación 1, en que la molécula de RNA consiste en el RNA en horquilla.

14. El método de la Reivindicación 1 ó 3, en que dicho gen es un gen endógeno.

15. El método de la Reivindicación 1 ó 3, en que dicho gen es un transgén extraño.

16. El método de la Reivindicación 1, en que dicho DNA quimérico se integra establemente en el genoma del DNA.

17. El método de la Reivindicación 1 ó 2, en que dicho ácido nucleico de interés está comprendido en el genoma de un virus infectivo.

18. El método de la Reivindicación 17, en que dicho virus infectivo es un virus de RNA.

19. El método de acuerdo con la Reivindicación 1, 2 ó 3, en que dicha célula eucariótica es una célula vegetal.

20. El método de la Reivindicación 19, en que dicha célula vegetal está comprendida dentro una planta.

21. Un método de acuerdo con la Reivindicación 20, en que la planta es una planta agrícola o una planta comestible.

22. Un método de acuerdo con la Reivindicación 21, en que la planta es maíz, arroz, trigo, cebada, caña de azúcar, algodón, colza de semilla oleaginosa, soja, achicoria, vegetales de Brassica, lechuga, tomate, tabaco, patata o remolacha azucarera.

23. Un método de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 22, en que la expresión fenotípica reducida se usa para obtener resistencia al desprendimiento de partes vegetales, para obtener patrones modificados de los colores de las flores, para obtener plantas resistentes a nematodos, para retrasar la maduración de los frutos, para obtener esterilidad masculina, para reducir la presencia de metabolitos secundarios en plantas, para modificar mediante ingeniería metabólica el perfil de metabolitos sintetizados en una célula vegetal, para retrasar el envejecimiento, para alterar la lignificación, para alterar la calidad de las fibras en el algodón, para aumentar la resistencia a las machaca-duras en las patatas al reducir la polifenol oxidasa, para obtener resistencia a virus o para obtener resistencia a enfermedades o plagas.

24. Un método para identificar un fenotipo asociado con la expresión de un ácido nucleico de interés en una célula eucariótica, siendo dicho ácido nucleico de interés un gen integrado en el genoma de dicha célula eucariótica, método que comprende

a. seleccionar una secuencia diana de al menos 10 nucleótidos consecutivos en dicha secuencia de nucleótidos de interés;

b. diseñar una secuencia de nucleótidos sentido que corresponda a la longitud de la secuencia diana seleccionada y que tenga una identidad de secuencia de al menos 75% a 100% con dicha secuencia diana seleccionada;

c. diseñar una secuencia de nucleótidos antisentido que

**(Ver fórmula)**

i) tenga una identidad de secuencia de al menos 75% a 100% con el complemento de dichos al menos 10 nucleótidos consecutivos de dicha secuencia de nucleótidos sentido; y

ii) comprenda un tramo de al menos aproximadamente 10 nucleótidos consecutivos con una identidad de secuencia del 100% con respecto al complemento de una parte de dicha secuencia de nucleótidos sentido;

d. introducir una molécula de RNA que comprende tanto dicha secuencia de nucleótidos sentido como dicha secuencia de nucleótidos antisentido en una célula huésped eucariótica adecuada que comprende el ácido nucleico que incluye la secuencia de nucleótidos con el fenotipo hasta ahora no identificado, en que dicho RNA es capaz de formar una estructura de RNA artificial en horquilla con un tallo de RNA de doble cadena por apareamiento de bases entre las regiones con las secuencias de nucleótidos sentido y antisentido de modo que al menos dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia sentido se apareen por bases con dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia antisentido; y

**(Ver fórmula)**

e. observar el fenotipo mediante un método adecuado.

25. El método de acuerdo con la Reivindicación 24, en que la célula eucariótica es una célula vegetal.

26. El método de acuerdo con la Reivindicación 24 ó 25, en que la secuencia diana comprende al menos parte de un marco de lectura abierto.

27. El método de acuerdo con la Reivindicación 24 ó 25, en que la secuencia de nucleótidos antisentido comprende un tramo de aproximadamente 20 nucleótidos consecutivos con una identidad de secuencia del 100% con respecto al complemento de una parte de dicha secuencia de nucleótidos sentido.

28. Una célula eucariótica que comprende un ácido nucleico de interés, que se puede expresar fenotípicamente, que comprende además una molécula de DNA quimérica que comprende las siguientes partes operativamente enlazadas:

a) un promotor, operativo en dicha célula eucariótica;

b) una región de DNA que, cuando se transcribe, produce una molécula de RNA con al menos una región de RNA con una secuencia de nucleótidos que comprende

i) una secuencia de nucleótidos sentido de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de entre 75 y 100% con al menos parte de una región de codificación del ácido nucleico de interés; y

ii) una secuencia de nucleótidos antisentido que incluye al menos 10 nucleótidos consecutivos, que tiene una identidad de secuencia de entre 75% y 100% con el complemento de dichos al menos 10 nucleótidos consecutivos de dicha secuencia de nucleótidos sentido;

en que el RNA es capaz de formar una estructura de RNA artificial en horquilla con un tallo de RNA de doble cadena por apareamiento de bases entre las regiones con las secuencias de nucleótidos sentido y antisentido; y

en que dicho ácido nucleico de interés es un gen integrado en el genoma de dicha célula eucariótica.

29. Una célula de acuerdo con la Reivindicación 28, en que la molécula de DNA quimérica comprende además una región de DNA implicada en la terminación de la transcripción y la poliadenilación.

30. Una célula eucariótica que comprende un ácido nucleico de interés, que se puede expresar fenotípicamente, que comprende además una molécula de RNA quimérica que comprende al menos una región de RNA con una secuencia de nucleótidos que comprende

i) una secuencia de nucleótidos sentido de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de entre 75 y 100% con al menos parte de una región de codificación del ácido nucleico de interés; y

ii) una secuencia de nucleótidos antisentido que incluye al menos 10 nucleótidos consecutivos, que tiene una identidad de secuencia de entre 75% y 100% con el complemento de dichos al menos 10 nucleótidos consecutivos de dicha secuencia de nucleótidos sentido;

en que dicho RNA es capaz de formar un RNA artificial en horquilla con una región de RNA de doble cadena por apareamiento de bases entre las regiones con las secuencias de nucleótidos sentido y antisentido de modo que al menos dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia sentido se apareen por bases con dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia antisentido; y

en que dicho ácido nucleico de interés es un gen integrado en el genoma de dicha célula eucariótica.

31. La célula eucariótica de la Reivindicación 29 ó 30, que es una célula vegetal.

32. Una planta que comprende la célula vegetal de la Reivindicación 31.

33. Una molécula de RNA quimérica que comprende al menos una región de RNA con una secuencia de nucleótidos

**(Ver fórmula)**

que comprende

i. una secuencia de nucleótidos sentido de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de entre 75 y 100% con al menos parte de una región de codificación de un ácido nucleico de interés; siendo dicho ácido nucleico de interés un gen incorporado en el genoma de una célula eucariótica; y

ii. una secuencia de nucleótidos antisentido que incluye al menos 10 nucleótidos consecutivos, que tiene una identidad de secuencia de entre 75% y 100% con el complemento de dichos al menos 10 nucleótidos consecutivos de dicha secuencia de nucleótidos sentido;

en que el RNA es capaz de formar una estructura de RNA artificial en horquilla con un tallo de RNA de doble cadena por apareamiento de bases entre las regiones con las secuencias de nucleótidos sentido y antisentido de modo que al menos dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia sentido se apareen por bases con dichos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia antisentido.

34. La célula de acuerdo con la Reivindicación 28, o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con la Reivindicación 33, en que la molécula de RNA comprende además una secuencia de nucleótidos espaciadora situada entre dichas secuencias de nucleótidos sentido y antisentido.

35. La célula de acuerdo con la Reivindicación 28 o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con la Reivindicación 33, en que dicha secuencia de nucleótidos sentido tiene una longitud total de al menos 15 nucleótidos, preferiblemente al menos 50 nucleótidos.

36. La célula de acuerdo con la Reivindicación 28, o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con la Reivindicación 33, en que la secuencia de nucleótidos sentido total tiene una identidad de secuencia de al menos 85% con la parte correspondiente del ácido nucleico de interés.

37. La célula o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con la Reivindicación 36, en que la secuencia de nucleótidos sentido incluye una secuencia de aproximadamente 20 nucleótidos con una identidad de secuencia del 100% con respecto a la parte correspondiente del ácido nucleico de interés.

38. La célula o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 35 a 37, en que dicha secuencia de nucleótidos antisentido tiene una longitud total que corresponde a la de la secuencia de nucleótidos sentido.

39. La célula o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 35 a 37, en que la longitud de la secuencia de nucleótidos antisentido difiere de la de la secuencia de nucleótidos sentido en aproximadamente un 10%.

40. La célula de acuerdo con la Reivindicación 28, o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con la Reivindicación 33, en que la secuencia de nucleótidos antisentido tiene una identidad de secuencia de al menos 85% con respecto al complemento de la secuencia de nucleótidos sentido.

41. La célula o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con la Reivindicación 40, en que la secuencia de nucleótidos antisentido incluye una secuencia de 20 nucleótidos con una identidad de secuencia del 100% con respecto al complemento de la secuencia de nucleótidos sentido.

42. La célula de acuerdo con la Reivindicación 28, o la molécula de RNA quimérica de acuerdo con la Reivindicación 33, para uso en la reducción de una infección vírica o en la obtención de resistencia a una enfermedad.

43. Un método para modificar el perfil de ácidos grasos en el aceite de una planta, método que comprende la operación de introducir un DNA quimérico en las células de dicha planta, DNA quimérico que comprende las siguientes partes operativamente enlazadas:

a) un promotor expresable en plantas; y

b) una región de DNA que, cuando se transcribe, produce una molécula de RNA que comprende una región de RNA capaz de formar una estructura artificial de tallo-bucle, en que una de las secuencias de RNA hibridantes de la estructura de tallo-bucle comprende una secuencia de nucleótidos de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de al menos 75% con al menos parte de la secuencia de nucleótidos de un marco de lectura abierto que codifica la Δ12 desaturasa, y en que la segunda de dichas secuencias de RNA hibridantes comprende una secuencia de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de al menos 75% con al menos parte del complemento de al menos parte de la secuencia de nucleótidos de dicho marco de lectura abierto que codifica la Δ12 desaturasa.

44. Un método de acuerdo con la Reivindicación 43, en que el DNA quimérico comprende además una región de

DNA implicada en la terminación de la transcripción y la poliadenilación.

45. El método de la reivindicación 43 ó 44, en que dicha modificación del perfil de ácidos grasos comprende aumentar el contenido de ácido oleico.

46. Una planta que produce aceite con un perfil de ácidos grasos modificado, planta que comprende un DNA quimérico, DNA quimérico que comprende las siguientes partes operativamente enlazadas:

**(Ver fórmula)**

a) un promotor expresable en plantas; y

b) una región de DNA que, cuando se transcribe, produce una molécula de RNA que comprende una región de RNA capaz de formar una estructura artificial de tallo-bucle, en que una de las secuencias de RNA hibridantes de la estructura de tallo-bucle comprende una secuencia de nucleótidos de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de al menos 75% con al menos parte de la secuencia de nucleótidos de un marco de lectura abierto que codifica la Δ12 desaturasa, y en que la segunda de dichas secuencias de RNA hibridantes comprende una secuencia de al menos 10 nucleótidos consecutivos que tiene una identidad de secuencia de al menos 75% con al menos parte del complemento de al menos parte de la secuencia de nucleótidos de dicho marco de lectura abierto que codifica la Δ12 desaturasa.

47. Una planta de acuerdo con la Reivindicación 46, en que el DNA quimérico comprende además una región de DNA implicada en la terminación de la transcripción y la poliadenilación.

48. El método de la Reivindicación 43 o la planta de la Reivindicación 46, en que dicha región de DNA comprende la secuencia de nucleótidos de ID. SEC. nº 6.

49. El método de la Reivindicación 43 o la planta de la Reivindicación 46, en que dicho promotor expresable en plantas es un promotor específico de semillas.

50. El método de la Reivindicación 43 o la planta de la Reivindicación 46, en que dicha planta es colza de semilla oleaginosa.