DIAGNÓSTICO Y SUPERVISIÓN DE ENFERMEDADES.

La invención se refiere al diagnóstico y supervisión de Esclerosis Múltiple (MS) mediante la cuantificación de Asp-Ala DKP (DA-DKP), N-acetil-Ala-Ser DKP (NAS-DKP), N-acetil-Ala-fosforilada-Ser DKP, Arg-Arg DKP, Gln-Asn DKP. En particular, la invención se refiere a la detección y medición de las dicetopiperazinas Asp-Ala DKP (DA-DKP), N-acetil- Ala-Ser DKP (NAS-DKP), N-acetil-ala-fosforilada-Ser DKP, Arg-Arg DKP, Gln-Asn DKP. Antecedentes Siempre se necesitan ensayos más simples y rápidos para diagnosticar y supervisar enfermedades y afecciones médicas. Además, muchas enfermedades graves siguen siendo difíciles de diagnosticar y supervisar, y los procedimientos para diagnosticar y supervisar estas enfermedades o afecciones son críticamente necesarios. Por ejemplo, la esclerosis múltiple (MS) es difícil de diagnosticar debido a que el avance, severidad y los síntomas específicos de MS son bastantes variables e impredecibles. No existen ensayos de laboratorio, síntomas ni descubrimientos físicos que puedan, por sí mismos, determinar si una persona posee MS. Los criterios establecidos desde hace tiempo para diagnosticar MS son: 1. Debe haber evidencia objetiva de dos ataques (es decir, dos episodios de demielinación en el sistema nervioso central (CNS)). Un ataque (también conocido como una exacerbación, arrebato o recidiva) se define clínicamente como la aparición repentina o empeoramiento de un síntoma o síntomas de MS, que duran al menos 24 horas. La evidencia objetiva proviene de los hallazgos de un examen neurológico y ensayos adicionales. 2. Los dos ataques deben estar separados en tiempo (al menos un mes) y espacio (indicado por la evidencia de inflamación y/o daño en diferentes áreas del CNS). 3. No debe haber alguna otra explicación para estos ataques o los síntomas que la persona está experimentando. Muchos síntomas que son comunes en MS también pueden ser causados por otras enfermedades. Por ello, el diagnóstico de MS solamente puede realizarse mediante el descarte de posibilidades. En los últimos veinte años, ensayos tales como imágenes por resonancia magnética (MRI), examen de fluido cerebroespinal, y ensayo de respuesta evocada han jugado un papel cada vez más importante en el proceso de diagnóstico. En el año 2001, el Panel Internacional sobre Diagnóstico de Esclerosis Múltiple emitió un conjunto revisado de criterios de diagnóstico (Annals of Neurology, 50:121-127 (2001)). Además de los requerimientos tradicionales aportados más arriba, los criterios revisados proporcionan lineamientos específicos para utilizar los hallazgos de MRI, análisis de fluido cerebroespinal y potenciales visuales evocados para proporcionar evidencia del segundo ataque y de ese modo confirmar el diagnóstico más rápidamente. Estos lineamientos también facilitan el proceso de diagnóstico en aquellos pacientes que poseen avance firme de discapacidad sin ataques precisos. Sin embargo, aún con estos criterios revisados, el diagnóstico de MS es aún difícil, y aún típicamente toma varios meses o aún años. Debido a la posibilidad de empeoramiento o recurrencia de MS, hacer rápidamente un diagnóstico conclusivo sería muy beneficioso. Ahora están disponibles fármacos para el tratamiento de MS que reducen la velocidad o previenen el avance de la enfermedad en muchos pacientes, y un diagnóstico rápido permitiría la intervención temprana y podría mejorar significativamente el pronóstico para muchos pacientes con MS. El diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer es difícil y a menudo se basa en la exclusión de otras causas. Se emplean diversos ensayos cognitivos para identificar posiblemente la enfermedad. Sin embargo, un diagnóstico definitivo es sólo posible mediante una autopsia de cerebro después de la muerte. Claramente, se necesita un ensayo diagnóstico que pueda proporcionar un diagnóstico para pacientes vivos con enfermedad de Alzheimer. La isquemia cerebral es actualmente un diagnóstico clínico. Aunque se han descrito ciertos marcadores bioquímicos, tales como Enolasa, familia S-100 de proteínas y otros, Las técnicas de imágenes disponibles para el médico clínico son más confiables y específicas. Un marcador bioquímico confiable y específico para la isquemia cerebral sería útil en el diagnóstico y supervisión de esta enfermedad. La isquemia cardíaca temprana también es difícil de diagnosticar. Los marcadores cardíacos de necrosis celular, tales como isoenzimas de quinasa creatina (CK-MB), mioglobina, o troponina, son marcadores no confiables de isquemia transitoria de miocardio, particularmente cuando se mide en las primeras 2 a 6 horas después de un evento isquémico. Kontos, M.C. y R.L. Jesse, Am J Cardiol, 2000. 85 (5A): páginas 32B-39B; Ishikawa, Y., et al., Clin Chem, 1997. 43 (3): páginas 467-75; Brogan, G.X., Jr., et al., Acad Emerg Med, 1997. 4 (1): páginas 6-12; Hedges, J.R., et al., Acad Emerg Med, 1996. 3(1): páginas 27-33. Los pacientes que son examinados pronto después de la aparición de los síntomas isquémicos típicamente requieren observación prolongada para descartar infarto de miocardio o 2   isquemia de miocardio. Gomez, M.A., et al., J Am Coll Cardiol, 1996. 28(1): páginas 25-33; Zalenski, R.J., et al., Arch Intern Med, 1997. 157(10): páginas 1085-91; de Winter, R.J., et al., Ann Emerg Med, 2000. 35(2): páginas 113-20; Peacock, W.I., et al. Ann Emerg Med, 2000. 35(3): páginas 213-20. Se ha descrito un nuevo procedimiento de ensayo de sangre para medir el cobalto exógeno reducido que se une a la albúmina de suero humano en pacientes con isquemia de miocardio. Bar-Or et al., J. Emerg. Med., 2000. 19 (4): páginas 311-5. El ensayo de unión de cobalto a albúmina (ACB) mide la capacidad de unión del cobalto exógeno al extremo terminal amino (extremo terminal N) de albúmina humana. En condiciones normales, los metales de transición, incluyendo cobalto, están estrechamente unidos al extremo terminal N expuesto de la albúmina. Kubal, G., P.J. Sadler, y A. Tucker, Eur J Biochem, 1994. 220(3): páginas 781-7. El ensayo ACB se basa en que las observaciones que las afecciones isquémicas pueden alterar el extremo terminal N de la albúmina y reducir rápidamente su capacidad de unión para metales de transición. Berenshtein et al., J. Mol. Cell. Cardiol., 1997. 29(11): páginas 3025-34; Bar-Or et al., Eur. J. Biochem., 2001. 268(1): páginas 42-47. Se predecirían las alteraciones inducidas por isquemia a la albúmina minutos u horas antes de que se pudieran detectar niveles anormales de CK-MB, mioglobina, o troponina. Sin embargo, el ensayo ACB se ha aprobado solamente como un ensayo para descartar la isquemia cardíaca, y sería altamente deseable tener un ensayo que pudiera diagnosticar la isquemia, así como descartarla. El bajo peso de nacimiento (LBW) es la principal causa de morbosidad fetal y neonatal en todo el mundo. El LBW en general es aceptado para indicar un peso menor que 2500 gramos en el nacimiento, y puede resultar de un recién nacido que nace en término pero pequeño para la edad gestacional (SGA), nacido en pretérmino y apropiado para la edad gestacional (AGA) o siendo de pretérmino y SGA. Como tal, la epidemiología de LBW es compleja y multifactorial. SGA es una definición estadística, que indica que el peso de nacimiento es menor que el percentil 10 para la edad gestacional. Por definición entonces, el 10% de los recién nacidos son SGA. En la práctica, algunos de estos recién nacidos son pequeños y están bien, cumpliendo con su potencial de crecimiento genético, y no están en riesgo sustancial. Por otro lado, otros recién nacidos con SGA tienen verdadero deterioro en el crecimiento, no cumpliendo con el potencial de crecimiento genético debido a una variedad de factores según lo que se debate más abajo. Se dice que estos recién nacidos sufren de restricción del crecimiento fetal (FGR). En la práctica, algunos niños son presumiblemente AGA y sufren FGR; es decir su peso puede estar en el percentil 20 para la edad gestacional, pero fueron programados genéticamente para pesar en el percentil 80. Estos niños son difíciles de identificar en un sentido práctico, ya que no existe ninguna forma previa de saber cuanto debería pesar un individuo. FGR lleva a LBW por deterioro directo del crecimiento fetal, y a menudo además por la necesidad del parto de pretérmino indicado debido al estado fetal comprometido o enfermedad materna asociada (por ejemplo, preeclampsia). La morbosidad debido a LBW y/o premadurez es variada y sustancial y está bien documentada en otros lados. Adicionalmente, datos recientes han sugerido que un medio intrauterino comprometido puede tener una influencia profunda en la salud en la vida adulta, la así denominada hipótesis de Barker u "orígenes fetales de enfermedad". A través de estos diversos mecanismos, la carga de enfermedad atribuible... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para diagnosticar o supervisar Esclerosis Múltiple (MS) que comprende las etapas de: (a) determinar la cantidad de un marcador en una muestra biológica obtenida de un paciente que va a ser diagnosticado o supervisado, en la que el marcador es: (i) Asp-Ala DKP (DA-DKP); (ii) N-acetil-Ala-Ser DKP (NAS-DKP); (iii) N-acetil-Ala-fosforilada-Ser DKP; (iv) Arg-Arg DKP; (v) Gln-Asn DKP; y (b) determinar si la cantidad de el marcador en dicha muestra biológica es indicativa de la presencia, ausencia o estado de MS. 2. El procedimiento de la reivindicación 1 en el que se determina la cantidad de ambos (i) y (ii) o en el que se determina la cantidad de (i) a (v). 3. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que se determina la cantidad de un marcador mediante espectrometría de masa, ensayo químico o inmunoensayo. 4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que se determina la cantidad de un marcador mediante inmunoensayo. 5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que dicho inmunoensayo es conducido mediante la utilización de un ligando específico para un marcador, en el que el ligando es un anticuerpo o un aptámero. 6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la muestra biológica es un fluido corporal. 7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que el fluido corporal es suero, plasma, sangre, orina, saliva, fluido cerebroespinal, lágrimas, semen, secreción vaginal, fluido amniótico o sangre de cordón. 8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que el fluido corporal es plasma o suero. 9. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho paciente es un ser humano. 10. Un ligando aislado que posee especificidad para un marcador en una muestra biológica indicativo de la presencia, ausencia o estado de MS, el marcador seleccionado de los grupos (i) a (v) detallados en la Reivindicación 1, en el que el ligando es un anticuerpo o un aptámero. 11. El ligando aislado de la reivindicación 10, en el que dicho ligando es un anticuerpo monoclonal. 12. El ligando aislado de la reivindicación 10, en el que dicho ligando es un aptámero. 13. Una composición que comprende el ligando de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12 en un vehículo fisiológicamente aceptable. 14. Un kit de cuantificación para cuantificar un marcador en una muestra biológica indicativo de la presencia, ausencia o estado de MS que comprende el ligando de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12 y reactivos asociados. 18   Figura 1 Figura 2 Figura 3 19   Figura 4 Figura 5