Un método para la detección de bacterias en un fluido que comprende las etapas:

(i) Filtrado de una muestra de dicho fluido por medio de un primer filtro con lo que se excluyen las partículas mayores que dichas bacterias; (ii) Iluminación de dicha muestra de fluida usando un haz de luz colimada. (iii) Medición de la intensidad de luz dispersada por dicha muestra de fluido al menos en un punto, y (iv) Comparación de dicha luz dispersada con una escala de calibración

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere en general al análisis de un fluido corporal. En particular, la presente invención se refiere al análisis óptico de la orina, para detectar la presencia de bacterias, las medidas de dispersión de la luz y la filtración.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los líquidos acuosos, tales como soluciones, emulsiones o suspensiones son muy comunes en el contexto biológico. Tales son el agua potable para consumo humano o animal, alimentos líquidos o bebidas, orina, líquido amniótico o de la columna vertebral. Tales fluidos pueden ser, en ocasiones, analizados para comprobar la presencia de bacterias. En los laboratorios de microbiología clínica, una gran proporción de las muestras analizadas son las muestras de orina. Un análisis típico de muestras de orina que implique uso de microscopio y/o cultivos, exige prácticos cualificados y consumen tiempo y recursos. Por lo tanto, cualquier método de detección rápida y económica que pueda evitar una cantidad significativa de métodos analíticos caros y consumidores de tiempo, sería beneficioso.

Las tiras reactivas para la detección de infecciones del tracto urinario están disponibles en el mercado. Estas cintas incluyen reactivos específicos incluidos en dos almohadillas distintas. Una almohadilla contiene reactivos de las pruebas para detectar la presencia de la esterasa de leucocitos en la muestra. La otra pastilla contiene reactivos para analizar el nitrito de tal modo que se determine la presencia de bacterias de formación de nitrito. La detección de la infección bacteriana se logra haciendo coincidir las almohadillas coloreadas con una gradación de colores en las tablas de color calibrado. La solicitud de patente europea 0320154A1 describe un método para la exploración de la orina sobre la base de un enfoque similar. El método incluye la realización de al menos dos análisis diferentes realizados en porciones de una muestra de orina mezclada con reactivos específicos. Un análisis detecta la presencia de leucocitos y el otro detecta la presencia de compuestos generados por las bacterias tales como el nitrito. Sin embargo, ambos métodos mencionados supra fallan en la detección de bacterias no generadas por aquellos productos que concuerdan con los reactivos específicos incluidos. Los métodos se basan en una concentración relativamente alta de bacterias en la muestra sometida a análisis y, por lo tanto, estos procesos de exploración son propensos a la sensibilidad suficiente y relativamente baja especificidad. Además, estos métodos de exploración están limitados a poblaciones específicas de pacientes, no deberían aplicarse, por ejemplo, a niños y/o a mujeres embarazadas.

La Patente Europea 1136563 divulga un método para la detección y cuantificación de bacterias en la orina que comprende la medición de la emisión de fluorescencia y subsiguiente dispersión en un velocímetro de flujo en la presencia de surfactante catiónico para reducir la interferencia por contaminantes, tales como hebras de mucosa, cristales, sales amorfas y fragmentos de células.

Según un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un método para detectar bacterias en un líquido que comprende las etapas de:

a. filtrado de una muestra de dicho líquido por medio de un primer filtro de partículas de tal forma que se excluyan partículas más grandes que dichas bacterias;

b. iluminar dicha muestra de líquido utilizando un haz de luz colimada;

c. la medición de la intensidad de la luz dispersada por dicha muestra de líquido por lo menos en un punto; y

d. la comparación de dicha luz dispersada a una escala de calibración.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La figura. 1 es una representación esquemática de un sistema para detectar bacterias en fluidos de acuerdo con la presente invención;.

La figura 2 es una visión en sección transversal en una cubeta esquemática de acuerdo con una realización preferida de la presente invención;

La figura 3 es una visión en sección transversal en una unidad óptica esquemática de un sistema para detectar bacterias en líquidos de acuerdo con una realización preferida de la presente invención;

La figura 4A es una visión isométrica de una unidad de cubeta de acuerdo con una realización preferida de la presente invención;

La figura 4B es un plano de despiece de la unidad de la cubeta que se muestra en la figura. 4A;

La figura 4C es una vista en sección transversal en una unidad de cubeta de acuerdo con otra realización preferida de la presente invención;

La figura 4D es una visión en sección transversal de la unidad de la cubeta que se muestra en la figura 4C;

La figura 5 es un sistema de coordinadas polares de una distribución simulada angular de la intensidad de la luz dispersada por dos partículas de diferentes tamaños;

La figura 6A es un gráfico que compara un perfil de dispersión simulada frente a un perfil de dispersión medida de una muestra de orina típica complementado con bacterias;

La figura 6B es un gráfico que compara las contribuciones simuladas frente las contribuciones medidas de las bacterias y las partículas de sal a los perfiles de dispersión de la figura 6A;

La figura 7A es una distribución angular de dispersión medida para una muestra usual de orina que contenga bacterias de unas medidas de 103 UFC/ml.

La figura 7B es una distribución angular de dispersión medida para una muestra usual de orina que contenga 104 UFC/ml.

La figura 7C es una distribución angular de dispersión medida para una muestra usual de orina que contenga 105 UFC/ml.

La figura 7D es una distribución angular de dispersión medida para una muestra usual de orina que contenga 106 UFC/ml.

La figura 8 es un gráfico que compara perfiles de dispersión medidos frente a adaptados calculados para las muestras de orina como se muestran en las Figuras 7A – 7D respectivamente;

La Figura 9 es un gráfico que compara perfiles de dispersión medidos frente a adaptados de una muestra de orina que contiene bacterias, tomada como ejemplo.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA PRESENTE INVENCIÓN

El sistema de la presente invención permite la detección de bacterias en fluidos acuosos como el agua, soluciones acuosas, geles, emulsiones y/o suspensiones, comida líquida y bebidas, orina, fluidos espinales, líquido amniótico y suero. Para la descripción del sistema divulgado por la invención, hacemos referencia en primer lugar a la Figura 1, que muestra un esquema de un sistema para la detección de bacterias, de acuerdo con la presente invención. El sistema consiste de una unidad óptica (2) en la cual se analizan ópticamente muestras del líquido examinado. Un procesador (4) vinculado a la unidad óptica lleva a cabo medidas y cálculos y activa la unidad óptica (2). Una unidad de interfaz de usuario, no mostrada, vinculada al procesador (4), consiste generalmente de un monitor para presentar los resultados de las medidas e instrucciones al operador y un teclado para introducir datos. Una batería, no mostrada, suministra energía a las unidades óptica y de interfaz del operador y al procesador.

Unidad Óptica

La unidad óptica (2) contiene una fuente luminosa (5) que produce un haz de luz. El haz de luz es colimado por un colimador (6). Una lente convergente (7), simple o compuesta, enfoca la luz que procede de una muestra de la muestra del líquido examinado hacia una unidad receptora (8). Una unidad de cubeta instalable (UC) (9) que contiene la muestra de fluido es ubicada entre el colimador (6) y la lente convergente (7). Varias características estructurales alternativas de la UC se describen Infra. En general, el término cubeta, a partir de aquí, se refiere a un recipiente transparente apto para contener una muestra del líquido y es instalable en la unidad óptica.

Los rayos luminosos (10) representan el haz iluminador emitido por la fuente de luz (5). El haz es colimado por un colimador (6) consistente de una lente simple o compuesta (12) y un diafragma que contiene una abertura (14). Un haz de luz colimada representada por los rayos (16) se propaga a través de una ventana (18) y el líquido en el interior de la cubeta. Un medio de obscurecimiento de la luz (19) impide cualquier luz iluminadora entrar en la unidad receptora (8). La luz dispersada en el líquido se representa... [Seguir leyendo]

1. Un método para la detección de bacterias en un fluido que comprende las etapas:

(i) Filtrado de una muestra de dicho fluido por medio de un primer filtro con lo que se excluyen las partículas mayores que dichas bacterias;

(ii) Iluminación de dicha muestra de fluida usando un haz de luz colimada.

(iii) Medición de la intensidad de luz dispersada por dicha muestra de fluido al menos en un punto, y

(iv) Comparación de dicha luz dispersada con una escala de calibración.

2. Un método como el de la reivindicación 1, comprendiendo además:

(i) Filtrado de una segunda muestra de dicho fluido por medio de un segundo filtro con lo que se excluyen las partículas mayores de un límite predefinido más pequeño que el de dichas bacterias;

(ii) Iluminación de dicha segunda muestra de fluida usando un haz de luz colimada.

(iii) Medición de la intensidad de luz dispersada por dicha segunda muestra de fluido al menos en un punto, y

(iv) Comparación de dicha luz dispersada con una escala de calibración.

3. Un método como el de la reivindicación 1, comprendiendo además la asociación de un perfil de dispersión con dicha intensidad medida, en el que dicha medición se llevó a cabo al menos en dos puntos diferentes.

4. Un método como el de la reivindicación 1, comprendiendo además el emparejamiento a dicho perfil de dispersión asociado de cualquier artículo seleccionado de una lista de artículos consistentes de perfiles de dispersión calibrados pre – almacenados y combinaciones lineares de perfiles de dispersión calibrados pre – almacenados.

5. Un método como el de la reivindicación 1, comprendiendo además la polarización de dicho haz de luz colimada.

6. Un método como el de la reivindicación 1, en el que dicha medición es llevada a cabo en relación, al menos, con una longitud de onda específica.

7. Un método como el de la reivindicación 1, en el que dicha iluminación se lleva a cabo por al menos un diodo láser.