CODIFICACIÓN ENZIMÁTICA.

La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de EE.UU. nº de serie 60/422.167 presentada el 30 de octubre de 2002; la solicitud provisional de EE.UU. nº de serie 60/434.425 presentada el 19 de diciembre de 2002 y la solicitud provisional de EE.UU. nº de serie 60/486.199 presentada el 11 de julio de 2003. Campo técnico de la invención La presente invención se refiere a un procedimiento para obtener un complejo bifuncional que comprende parte de molécula de presentación y una parte codificante. La invención también se refiere a un procedimiento para la generación de una biblioteca de complejos bifuncionales, a un procedimiento para identificar una molécula de presentación que tiene una propiedad preseleccionada. Antecedentes Se han desarrollado enfoques que permiten la codificación sintética de polipéptidos y otros polímeros bioquímicos. Un ejemplo de este enfoque se desvela en el documento US 5.723.598 que se refiere a la generación de una biblioteca de moléculas bifuncionales. Una parte del complejo bifuncional es el polipéptido y la otra parte es un oligonucleótido identificador que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica e identifica los aminoácidos que han participado en la formación del polipéptido. Tras la generación de la biblioteca de las moléculas bifuncionales se realiza una separación con respecto a la afinidad hacia una diana y la parte de oligonucleótido identificador de la molécula bifuncional se amplifica por medio de PCR. Eventualmente, los amplicones de PCR se secuencian y se descodifican para la identificación de los polipéptidos que tienen afinidad hacia la diana. La biblioteca de complejos bifuncionales se produce mediante un procedimiento comúnmente conocido como división y mezcla. El procedimiento implica que una molécula de ligador se divida en compartimentos separados espaciales y reaccione con un precursor de aminoácido específico en un extremo en cada compartimento y se añada una marca de ácido nucleico que codifica este precursor de aminoácido específico en el otro extremo por una reacción química ortogonal. Posteriormente, el contenido de los diversos compartimentos se recoge (se mezclan) y luego se dividen de nuevo en varios compartimentos para una nueva ronda de reacción alterna con precursor de aminoácido y marca de nucleótido. El procedimiento de división y mezcla continúa hasta que se alcanza la longitud deseada de polipéptido. Este procedimiento de la técnica anterior está limitado en su aplicación debido a que debe haber químicas compatibles entre los dos procedimientos de síntesis alternos para añadir una unidad química con respecto al de añadir una secuencia de nucleótidos u oligonucleótidos. Según la técnica anterior, el problema de la compatibilidad de síntesis se resuelve por la correcta elección de grupos protectores compatibles a medida que se sintetizan polímeros alternos, y por la correcta elección de procedimientos para la desprotección de un polímero en crecimiento selectivamente mientras que el otro polímero en crecimiento permanece bloqueado. Halpin y Harbury han sugerido en el documento WO 00/23458 otro enfoque en el que las moléculas formadas no sólo se identifican, sino que también son dirigidas por la marca de ácido nucleico. El enfoque también se basa en la estrategia de división y mezcla para obtener bibliotecas combinatorias usando dos o más etapas sintéticas. Se usa una pluralidad de moldes de ácido nucleico, cada uno de los cuales tiene en un extremo un sitio reactivo químico y disperso por todo el sitio una pluralidad de regiones de codón, especificando cada una de dichas regiones de codón a su vez codones diferentes. Los moldes se separan por hibridación de los codones con una sonda inmovilizada y posteriormente cada una de las cadenas se hace reaccionar en los sitios de reacción química con reactivos seleccionados específicos. Posteriormente, todas las cadenas se reúnen y se someten a una segunda separación basada en una región del segundo codón. El procedimiento de división y mezcla se realiza un número de veces apropiado para producir una biblioteca de normalmente entre 10 3 y 10 6 compuestos diferentes. El procedimiento tiene la desventaja de que debe proporcionarse un gran número de moldes de ácido nucleico. En el caso de que se desee una biblioteca final de 10 6 compuestos diferentes debe sintetizarse un total de 10 6 moldes de ácido nucleico. La síntesis es generalmente engorrosa y cara debido a que los moldes de ácido nucleico deben ser de una longitud considerable para asegurar una hibridación suficiente entre la región de codón y la sonda. En el documento WO 02/074929 se desvela un procedimiento para la síntesis de compuestos químicos. Los compuestos se sintetizan poniendo inicialmente en contacto una unidad de transferencia que comprende un anticodón y una unidad reactiva con un molde que tiene una unidad reactiva asociada al mismo en condiciones que permitan la hibridación del anti-codón al molde y posteriormente haciendo reaccionar las unidades reactivas. Por tanto, este procedimiento sufre la desventaja de que inicialmente debe proporcionarse un gran número de moldes de ácido nucleico. Los procedimientos de la técnica anterior usando moldes sufren la desventaja de que la codificación depende del reconocimiento entre el anti-codón y el molde. La hibridación entre dos oligonucleótidos puede producirse en caso de que haya una complementariedad suficiente entre éstos. Ocasionalmente, la hibridación se producirá aún cuando 2   no esté presente una coincidencia completa entre los oligonucleótidos. Entonces, el efecto es, en el caso de que esté presente una pluralidad de unidades de transferencia, que la secuencia de codones del molde no se corresponde algunas veces con la unidad reactiva realmente reaccionada. Este efecto no deseado es incluso más pronunciado cuando está prevista la formación de la biblioteca debido a una pluralidad de moldes y se supone que los bloques de construcción se encuentran en los medios de reacción. Si la etapa de hibridación no es completamente correcta, se generarán moléculas que están codificadas por los codones incorrectos en el molde. Esto tendrá dos efectos principales sobre el procedimiento de selección realizado en la biblioteca. Primero, los moldes con una combinación de codones que codifica ligandos de unión se perderán en el proceso de selección. En segundo lugar, y puede ser más importante, los moldes con una combinación de codones que codifica ligandos de no unión se enriquecerán. En un aspecto de la presente invención un objeto es proporcionar un procedimiento no dependiente del molde para obtener una molécula codificada, permitiendo dicho procedimiento que se apliquen químicas versátiles en la formación de la molécula codificada debido a que puede evitarse la aplicación de grupos de protección ortogonales compatibles en la formación alterna de la molécula codificada y la marca de oligonucleótido. La presente invención intenta mejorar en un aspecto preferido el procedimiento de hibridación propenso a error previo sugerido en el procedimiento de reconocimiento de codones. Además, un objeto de la invención es reducir los productos de reacción no específicos formados. Por tanto, en un aspecto de la presente invención, el presente procedimiento tiene una facilidad de corrección inherente que asegura que el fenotipo esté codificado con exactitud por el genotipo. Resumen de la invención En un primer aspecto la presente invención proporciona un procedimiento para obtener un complejo bifuncional que comprende una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de la molécula de presentación, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de a) proporcionar un complejo bifuncional naciente que comprende un sitio de reacción química y un sitio de cebado para la adición enzimática de una marca en forma de una secuencia de nucleótidos consecutivos, b) hacer reaccionar el sitio de reacción química con uno o más reactivos, y c) hacer reaccionar el sitio de cebado enzimáticamente con una o más marcas que identifican el uno o más reactivos, en el que un reactivo y la marca que identifica el reactivo no están ligados antes de su reacción con el sitio de reacción química y el sitio de cebado, respectivamente, del complejo bifuncional naciente. En un segundo aspecto la presente invención proporciona un procedimiento para producir una biblioteca de complejos bifuncionales diferentes, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de sintetizar complejos bifuncionales diferentes por el procedimiento anteriormente mencionado, en el que cada complejo bifuncional diferente de dicha biblioteca comprende una molécula de presentación... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para obtener un complejo bifuncional que comprende una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de la molécula de presentación, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de a) proporcionar un complejo bifuncional naciente que comprende un sitio de reacción química y un sitio de cebado para la adición enzimática de una marca en forma de una secuencia de nucleótidos consecutivos, b) hacer reaccionar el sitio de reacción química con uno o más reactivos, y c) hacer reaccionar el sitio de cebado enzimáticamente con una o más marcas que identifican el uno o más reactivos, en el que un reactivo y la marca que identifica el reactivo no están ligados antes de su reacción con el sitio de reacción química y el sitio de cebado, respectivamente, del complejo bifuncional naciente. 2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el complejo bifuncional naciente se somete a una o más rondas de reacción con reactivo(s) en el sitio de reacción química y adición de marcas(s) en el sitio de cebado. 3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que el producto de reacción de una ronda de reacción previa sirve de sitio de reacción química en cada ronda de reacción posterior de síntesis paralela y en el que la última marca incorporada proporciona un sitio de cebado para la adición enzimática de otra marca en una ronda de reacción posterior. 4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que un complejo bifuncional obtenido haciendo reaccionar uno o más reactivos con el sitio de reacción química y haciendo reaccionar la(s) marca(s) respectiva(s) con el sitio de cebado se hace reaccionar adicionalmente una o más veces con uno o más reactivos adicionales y marcas respectivas adicionales para producir otro complejo bifuncional que comprende un producto de reacción y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación del producto de reacción. 5. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la molécula de presentación se forma haciendo reaccionar más de un reactivo con el sitio de reacción química. 6. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que las secuencias de las marcas del oligonucleótido identificador del complejo bifuncional se usan para descifrar la estructura de los reactivos que han participado en la formación de la molécula de presentación. 7. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el orden de las marcas determina el orden de incorporación de los reactivos en la molécula de presentación. 8. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que un único reactivo se hace reaccionar con el sitio de reacción química en un único ciclo de reacción, comprendiendo además dicho ciclo de reacción hacer reaccionar enzimáticamente una marca que identifica el reactivo con el sitio de cebado. 9. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que múltiples reactivos se hacen reaccionar con el sitio de reacción química en un único ciclo de reacción, comprendiendo además dicho ciclo de reacción hacer reaccionar enzimáticamente las marcas respectivas que identifican los reactivos con el sitio de cebado. 10. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el complejo bifuncional se prepara añadiendo simultáneamente una marca y haciendo reaccionar un reactivo. 11. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el complejo bifuncional se prepara por adición secuencial de una marca y reacción de un reactivo. 12. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la reacción de un reactivo en el sitio de reacción química se produce después de la adición de una marca en el sitio de cebado. 13. El procedimiento de las reivindicaciones 1, en el que la adición de una marca en el sitio de cebado se produce después de la reacción de un reactivo en el sitio de reacción química. 14. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sitio de reacción química comprende un único grupo reactivo. 15. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sitio de reacción química comprende un andamiaje que tiene uno o más grupos reactivos unidos. 107   16. El procedimiento de la reivindicación 15, en el que se proporciona un andamiaje X ligado a una marca x, siendo así un sitio de cebado que identifica dicho andamiaje, en el que un reactivo A se hace reaccionar con el andamiaje X, produciendo dicha reacción A que está ligado a X, y en el que una marca a se añade la marca de andamiaje x. 17. El procedimiento de la reivindicación 15, en el que el andamiaje se selecciona de benzodiazepinas, esteroides, hidantoínas, piperazinas, dicetopiperazinas, morfolinas, tropanos, cumarinas, quinolinas, indoles, furanos, pirroles, oxazoles, precursores de aminoácidos y tiazoles. 18. El procedimiento de las reivindicaciones 1, en el que el sitio de reacción química comprende múltiples grupos reactivos que pueden hacerse reaccionar con uno o más reactivos. 19. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que un reactivo comprende una estructura química que comprende uno, dos o más grupos reactivos que reaccionan con el sitio de reacción química. 20. El procedimiento de la reivindicación 19, en el que el uno o más grupos reactivos se seleccionan del grupo que consiste en grupos hidroxilo, grupos ácido carboxílico, grupos tiol, grupos isocianato, grupos amina, grupos éster y grupos tioéster. 21. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que un reactivo comprende un grupo reactivo o un precursor de grupo reactivo activable. 22. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la reacción de un reactivo y el sitio de reacción química tiene lugar en presencia de otro reactivo que media en una conexión entre el reactivo y el sitio de reacción química. 23. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el reactivo es un precursor para la entidad estructural incorporada en las moléculas de presentación. 24. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el número de grupos reactivos del reactivo es de uno a diez. 25. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que los grupos reactivos incluyen un grupo amino. 26. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que el uno o más grupos reactivos incluyen un ácido carboxílico. 27. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que el uno o más grupos reactivos incluyen un grupo tio. 28. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que el uno o más grupos reactivos incluyen un aldehído. 29. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que el uno o más grupos reactivos incluyen grupos hidroxilo. 30. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que un reactivo que muestra sólo un grupo reactivo se usa en las posiciones terminales de polímeros o andamiajes. 31. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que un reactivo que tiene dos grupos reactivos se usa para la formación de la parte del cuerpo de un polímero o de andamiajes que pueden hacerse reaccionar adicionalmente. 32. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dos o más grupos reactivos están presentes en un andamiaje en forma de una estructura de núcleo que se hace reaccionar con diferentes reactivos, generando así diferentes moléculas de presentación con andamiaje. 33. El procedimiento de las reivindicaciones 32, en el que los reactivos que reaccionan con el andamiaje contienen uno, dos o varios grupos reactivos que pueden formar una conexión con el andamiaje. 34. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el complejo bifuncional naciente comprende además un resto de enlace que conecta el sitio de reacción química y el sitio de cebado. 35. El procedimiento de la reivindicación 34, en el que el resto de enlace del complejo bifuncional naciente comprende información referente a la identidad del sitio de reacción química. 36. El procedimiento de la reivindicación 34, en el que el resto de enlace es una secuencia de ácidos nucleicos con la que puede hibridarse un oligonucleótido complementario. 37. El procedimiento de la reivindicación 34, en el que el resto de enlace está unido al sitio de reacción química mediante un espaciador que comprende un ligador selectivamente escindible. 108   38. El procedimiento de la reivindicación 37, en el que el ligador selectivamente escindible se escinde y la molécula de presentación se desprende del oligonucleótido identificador del complejo bifuncional después de la formación de un complejo bifuncional final. 39. El procedimiento de la reivindicación 37, en el que el ligador selectivamente escindible se escinde por radiación electromagnética. 40. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el complejo bifuncional comprende un ligador selectivamente escindible que puede escindirse por radiación electromagnética, en el que dicho complejo bifuncional se selecciona del grupo que consiste en en las que R 1 y R 2 se seleccionan del grupo que consiste en una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de la molécula de presentación; en las que R 3 es H o OCH3; y en las que X es O o NH. 41. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el complejo bifuncional comprende un ligador selectivamente escindible que puede escindirse por radiación UV, en el que dicho complejo bifuncional tiene la fórmula en la que R 1 y R 2 se seleccionan del grupo que consiste en una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de la molécula de presentación. 42. El procedimiento de la reivindicación 41, en el que R 1 es la molécula de presentación y R 2 es el oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de la molécula de presentación. 43. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el complejo bifuncional comprende un ligador selectivamente escindible que puede escindirse por agentes químicos, en el que dicho complejo bifuncional tiene la fórmula 109   en la que R 1 y R 2 se seleccionan del grupo que consiste en una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de la molécula de presentación; en la que R 3 ; R 4 ; R 5 y R 6 se seleccionan de H, CN, F, NO2 y SO2NR2. 44. El procedimiento de la reivindicación 37, en el que el ligador selectivamente escindible es un ligador de disulfuro. 45. El procedimiento de la reivindicación 37, en el que el ligador selectivamente escindible se escinde por una proteasa. 46. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el oligonucleótido identificador comprende 3, 4, 5 o más marcas. 47. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sitio de cebado comprende uno, dos, o más nucleótidos con los que puede hibridarse un oligonucleótido complementario. 48. El procedimiento de la reivindicación 47, en el que el sitio de cebado comprende un grupo 3'-OH o 5'-fosfato de un nucleótido. 49. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que al menos una marca identificadora se une por una reacción enzimáticamente catalizada, y en el que otras marcas pueden unirse usando reacciones químicas o reacciones enzimáticas. 50. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que las otras marcas están unidas a una marca previa para producir un oligonucleótido identificador lineal o ramificado. 51. El procedimiento de la reivindicación 50, en el que todas las marcas del oligonucleótido identificador están unidas usando una reacción enzimáticamente catalizada. 52. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 50 y 51, en el que las marcas son las únicas marcas. 53. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el oligonucleótido identificador del complejo bifuncional comprende un oligonucleótido bicatenario con el fin de reducir la reacción entre el oligonucleótido y los reactivos. 54. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el oligonucleótido identificador del complejo difuncional es amplificable. 55. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que los nucleótidos del oligonucleótido identificador se seleccionan de ADN y ARN. 56. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que los nucleótidos del oligonucleótido identificador están compuestos por un resto de nucleobase y una unidad de esqueleto, en el que la unidad de esqueleto está compuesta por un resto de azúcar y un ligador internucleosídico. 57. El procedimiento de la reivindicación 56, en el que la nucleobase de un nucleótido del resto del oligonucleótido identificador se selecciona de nucleobases que se producen naturalmente y nucleobases que se producen no naturalmente. 58. El procedimiento de la reivindicación 57, en el que la nucleobase se selecciona del grupo que consiste en heterociclos de purina, heterociclos de pirimidina y análogos heterocíclicos y tautómeros de los mismos. 59. El procedimiento de la reivindicación 58, en el que la nucleobase se selecciona del grupo que consiste en adenina, guanina, timina, citosina, uracilo, purina, xantina, diaminopurina, 8-oxo-N 6 -metiladenina, 7-deazaxantina, 7- deazaguanina, N 4 ,N 4 -etanocitosina, N 8 ,N 6 -etano-2,6-diamino-purina, 5-metilcitosina, 5-(C 3 -C 6 )-alquinilcitosina, 5fluorouracilo, 5-bromouracilo, pseudoisocitosina, 2-hidroxi-5-metil-4-triazolopiridina, isocitosina, isoguanina e inosina. 60. El procedimiento de la reivindicación 58, en el que la nucleobase se selecciona del grupo que consiste en   adenina, guanina, timina, citosina, 5-metilcitosina y uracilo. 61. El procedimiento de la reivindicación 56, en el que las unidades de esqueleto del oligonucleótido identificador se seleccionan del grupo que consiste en en las que B denota una nucleobase. 62. El procedimiento de la reivindicación 56, en el que el resto de azúcar de la unidad de esqueleto es una pentosa. 63. El procedimiento de la reivindicación 62, en el que la pentosa se selecciona del grupo que consiste en ribosa, 2'desoxirribosa, 2'-O-metil-ribosa, 2'-fluoro-ribosa, y 2'-4'-O-metilen-ribosa (LNA). 64. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 62 y 63, en el que la nucleobase del nucleótido está unida a la posición 1' de la pentosa. 65. El procedimiento de la reivindicación 56, en el que el ligador internucleosídico que liga dos nucleótidos vecinos del oligonucleótido identificador se selecciona del grupo que consiste en enlaces fosfodiéster, enlaces fosforotioato, enlaces fosfonato de metilo, enlaces fosforamidato, enlaces fosfotriéster y enlaces fosfoditioato. 66. El procedimiento de la reivindicación 56, en el que el oligonucleótido identificador comprende nucleósidos que se producen naturalmente de la familia del ADN y ARN conectados mediante enlaces fosfodiéster. 67. El procedimiento de la reivindicación 66, en el que los desoxinucleósidos se seleccionan de desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxitimidina, y desoxicitidina y en el que los nucleósidos se seleccionan de adenosina, 111   guanosina, uridina, citidina e inosina. 68. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que cada marca codifica reactivos diferentes y en el que la estructura de la molécula de presentación se deduce teniendo en cuenta diferentes químicas de unión, impedimento estérico y desprotección de grupos de protección ortogonales. 69. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la misma marca se usa para un grupo de reactivos que comparte una propiedad común seleccionada del grupo que consiste en naturaleza lipófila, peso molecular y química de unión. 70. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que cada marca es única. 71. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que varias marcas diferentes se usan para el mismo reactivo. 72. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que dos o más marcas que identifican el mismo reactivo llevan adicionalmente información de diferentes condiciones de reacción empleadas para la reacción de dicho reactivo. 73. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que una única marca especifica dos o más reactivos. 74. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que marcas individuales se distinguen entre sí por sólo un único nucleótido. 75. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que dos o más diferencias distinguen una marca de cualquier otra marca. 76. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la longitud de las marcas es 5 nucleótidos, y en el que existen más de 100 combinaciones de nucleótidos para generar dos o más diferencias entre dos marcas cualesquiera. 77. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que las marcas tienen de 2 a 100 nucleótidos. 78. El procedimiento de la reivindicación 77, en el que las marcas tienen de 3 a 50 nucleótidos. 79. El procedimiento de la reivindicación 77, en el que las marcas tienen de 4 a 20 nucleótidos. 80. El procedimiento de la reivindicación 77, en el que las marcas tienen de 5 a 15 nucleótidos. 81. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que cada marca está separada por una región de unión de 1 a 20 nucleótidos. 82. El procedimiento de la reivindicación 81, en el que cada región de unión identifica la posición de una marca en el oligonucleótido identificador. 83. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 81 y 82, en el que las regiones de unión comprenden una o más nucleobases que forman tres enlaces de hidrógeno con una nucleobase relacionada. 84. El procedimiento de la reivindicación 83, en el que dichas nucleobases son guanina y citosina. 85. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 82 y 83, en el que la región de unión tiene una modificación del esqueleto seleccionada del grupo que consiste en sustitución de 2'-O-metilo de un resto de ribosa, ciclación de 2'-4' O-metileno del resto de ribosa (ácido nucleico bloqueado; LNA) y ácidos nucleicos peptídicos (PNA). 86. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que dos o más reactivos se hacen reaccionar con el sitio reactivo químico, y en el que las marcas del oligonucleótido identificador están separadas por una región de unión. 87. El procedimiento de la reivindicación 86, en el que la región de unión es un sustrato reconocido por una enzima seleccionada de una polimerasa y una ligasa. 88. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que cada marca comprende nucleótidos que identifican un reactivo y una secuencia de marco que identifica la historia de síntesis del reactivo. 112   89. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que las marcas comprenden además una región flanqueante que comprende un grupo de señal tal como un fluoróforo, o un grupo radiactivo que permite la detección del complejo bifuncional. 90. El procedimiento de la reivindicación 89, en el que las regiones flanqueantes comprenden una marca detectable, tal como biotina. 91. El procedimiento de la reivindicación 89, en el que las regiones flanqueantes comprenden sitios de cebado para amplificación por PCR. 92. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la molécula de presentación es el producto de reacción de dos o más reactivos. 93. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la molécula de presentación es el producto de reacción de más de un reactivo y el sitio de reacción química del complejo bifuncional. 94. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la molécula de presentación es una molécula no polimérica que tiene un peso molecular inferior a 1000 Da. 95. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la molécula de presentación es una molécula no polimérica que tiene un peso molecular superior a 1000 Da. 96. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la molécula de presentación es una molécula polimérica. 97. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que un primer reactivo forma un producto intermedio tras la reacción con el sitio reactivo químico y un segundo reactivo reacciona con el producto intermedio para obtener la molécula de presentación, o un precursor de la misma. 98. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dos o más reactivos reaccionan entre sí para formar un producto intermedio y el sitio reactivo químico reacciona con este producto intermedio para obtener la molécula de presentación, o un precursor de la misma. 99. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la enzima usada para la adición enzimática de una marca al sitio de cebado se selecciona del grupo que consiste en una polimerasa, una ligasa y una recombinasa. 100. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la marca está unida al sitio de cebado de un complejo bifuncional naciente usando una reacción de extensión enzimática. 101. El procedimiento de la reivindicación 100, en el que la reacción de extensión se realiza por una polimerasa o una ligasa, o una combinación de las mismas. 102. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos se transforma en un oligonucleótido identificador bicatenario por un procedimiento de extensión en el que un cebador se hibrida con el extremo 3' del oligonucleótido identificador y se extiende usando una polimerasa. 103. El procedimiento de la reivindicación 102, en el que la reacción de extensión usa un oligonucleótido anti-marca como cebador. 104. El procedimiento de la reivindicación 102, en el que el sustrato usado por la polimerasa es una mezcla de nucleótidos trifosfatos seleccionados del grupo que consiste en dATP, dGTP, dTTP, dCTP, rATP, rGTP, rTTP, rCTP y rUTP. 105. El procedimiento de la reivindicación 1 que comprende la etapa adicional de hibridación de un nucleótido protuberante monocatenario de un oligonucleótido anti-marca que identifica un reactivo con el extremo 3' del oligonucleótido identificador del complejo bifuncional naciente. 106. El procedimiento de la reivindicación 105, en el que la anti-marca se usa como cebador para transcribir el oligonucleótido identificador del complejo bifuncional naciente para generar oligonucleótido identificador bicatenario, en el que dicha transcripción usa una polimerasa y una mezcla de dNTP. 107. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 102 y 106, en el que la polimerasa se selecciona de ADN polimerasa, ARN polimerasa, transcriptasa inversa, ADN ligasa, ARN ligasa, ADN polimerasa Taq, polimerasa Pfu, polimerasa Vent, transcriptasa inversa del VIH-1, fragmento de Klenow. 108. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 102 y 106, en el que la polimerasa se selecciona de 113   polimerasas que permiten la extensión por desapareamiento. 109. El procedimiento de la reivindicación 108, en el que las polimerasas se seleccionan del grupo que consiste en ADN polimerasa y ADN polimerasa . 110. El procedimiento de las reivindicaciones 99, en el que la enzima usada para la adición enzimática de una marca al sitio de cebado es una ligasa. 111. El procedimiento de la reivindicación 110, en el que el sustrato para la ligasa es un oligonucleótido que comprende dos o más nucleótidos. 112. El procedimiento de la reivindicación 110, en el que la ligasa media en una ligación monocatenaria, en el que una marca de oligonucleótido está ligada con la molécula difuncional naciente. 113. El procedimiento de la reivindicación 112, en el que la ligación monocatenaria se realiza ligando un grupo 3'-OH de un primer ácido nucleico seleccionado del sitio de cebado y la marca de oligonucleótido a un grupo 5'-fosfato de un segundo ácido nucleico seleccionado del sitio de cebado y la marca de oligonucleótido, con la condición de que los dos ácidos nucleicos lleven diferentes grupos reactivos que puedan ligarse. 114. El procedimiento de la reivindicación 110, en el que la ligasa media en la ligación bicatenaria, en el que el sitio de cebado del complejo bifuncional naciente se hibrida con un oligonucleótido complementario antes de la ligación con una marca de oligonucleótido. 115. El procedimiento de la reivindicación 110, en el que la ligación bicatenaria tiene lugar en presencia de un tercer oligonucleótido que complementa parte del extremo 3' y parte del extremo 5', respectivamente, de un primer y segundo ácido nucleico, seleccionándose dichos primer y segundo ácidos nucleicos del sitio de cebado y la marca de oligonucleótido. 116. El procedimiento de la reivindicación 110, en el que la enzima se selecciona del grupo que consiste en ADN ligasa Taq, ADN ligasa T4, ARN ligasa T4, ADN ligasa T7 y ADN ligasa de E. coli. 117. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 114 y 115, en el que el oligonucleótido bicatenario que va a ligarse tiene extremos romos, y en el que una ARN ligasa T4 se usa para ligar dichos extremos romos. 118. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 114 y 115, en el que el oligonucleótido bicatenario que va a ligarse tiene extremos cohesivos, y en el que una ADN ligasa Taq se usa para ligar dichos extremos cohesivos. 119. El procedimiento de las reivindicaciones 110, en el que una combinación de transcripción con polimerasa y acoplamiento por ligación de oligonucleótidos hibridados y complementarios se usa para generar el oligonucleótido identificador bicatenario. 120. El procedimiento de la reivindicación 119, en el que un hueco en un oligonucleótido identificador de otro modo bicatenario se rellena inicialmente por una polimerasa y luego se liga por una ligasa con un oligonucleótido en la dirección 5' para producir un oligonucleótido identificador exclusivamente bicatenario. 121. Los procedimientos de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en los que las reacciones enzimáticas se realizan en disolvente acuoso, y en los que al menos algunas reacciones entre un reactivo y el sitio de reacción química se llevan a cabo en un disolvente orgánico. 122. El procedimiento de la reivindicación 121, en el que la reacción enzimática se lleva a cabo inicialmente en un disolvente acuoso, la mezcla de reacción se liofiliza luego y posteriormente el producto de reacción se disuelve para dispersarse en diferentes disolventes antes de la reacción en el sitio de reacción química. 123. El procedimiento de la reivindicación 122, en el que no se incluye ninguna etapa de liofilización en el procedimiento, y en el que se obtienen condiciones de reacción apropiadas añadiendo un disolvente al disolvente acuoso. 124. El procedimiento de la reivindicación 123, en el que el disolvente añadido es miscible con el disolvente acuoso, en el que la adición del disolvente produce un disolvente de reacción homogéneo. 125. El procedimiento de la reivindicación 124, en el que el disolvente añadido es miscible con el disolvente acuoso, en el que la adición del disolvente produce un disolvente de reacción bifásico. 126. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que no se usa ningún grupo de protección para proteger el oligonucleótido identificador o la molécula de presentación del complejo bifuncional naciente. 114   127. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la molécula de presentación de un complejo bifuncional naciente está protegida por grupos de protección. 128. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que los grupos reactivos del sitio de reacción química están inicialmente en una proforma activable, en el que los grupos reactivos de la proforma activable se activan antes de la reacción con un reactivo. 129. El procedimiento de la reivindicación 128, en el que los grupos reactivos de la proforma activable están protegidos con un grupo que previene la reacción con un reactivo. 130. Un procedimiento para producir una biblioteca de complejos bifuncionales diferentes, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de sintetizar complejos bifuncionales diferentes mediante el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 129, en el que cada complejo bifuncional diferente de dicha biblioteca comprende una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de las moléculas de presentación individuales. 131. El procedimiento de la reivindicación 130 que comprende las etapas adicionales de d) proporcionar en compartimentos de reacción separados complejos bifuncionales nacientes comprendiendo cada uno un sitio de reacción química y un sitio de cebado para la adición enzimática de una marca en forma de una secuencia de nucleótidos consecutivos, e) realizar en cada compartimento de reacción una reacción entre el sitio de reacción química de los complejos bifuncionales nacientes y uno o más reactivos proporcionados en dicho compartimento de reacción, y f) añadir al sitio de cebado de los complejos bifuncionales nacientes en cada compartimento de reacción una o más marcas respectivas proporcionadas a dicho compartimento de reacción, identificando dicha una o más marcas dicho uno o más reactivos, en el que la etapa e) y f) pueden producirse en cualquier orden. 132. El procedimiento de la reivindicación 131, en el que los complejos bifuncionales nacientes proporcionados en cada compartimento de reacción separado son idénticos. 133. El procedimiento de la reivindicación 131, en el que los complejos bifuncionales nacientes proporcionados en cada compartimento de reacción separado son diferentes. 134. El procedimiento de la reivindicación 129, en el que los complejos bifuncionales nacientes se diferencian en el sitio de reacción química y en el que cada uno de los complejos bifuncionales nacientes comprende una marca que identifica la estructura del sitio de reacción química. 135. Los procedimientos de cualquiera de las reivindicaciones 131 a 134, en los que los reactivos aplicados en cada compartimento de reacción separado son idénticos. 136. Los procedimientos de cualquiera de las reivindicaciones 131 a 134, en los que los reactivos aplicados en cada compartimento de reacción separado son diferentes. 137. Los procedimientos de cualquiera de las reivindicaciones 131 a 136, en los que las condiciones de reacción en cada compartimento de reacción separado son las mismas. 138. Los procedimientos de cualquiera de las reivindicaciones 131 a 136, en los que las condiciones de reacción en cada compartimento de reacción separado son diferentes. 139. Los procedimientos de cualquiera de las reivindicaciones 131 a 138, en los que el complejo bifuncional naciente se hace reaccionar con más de un único reactivo. 140. Los procedimientos de cualquiera de las reivindicaciones 131 a 139, en los que dos o más compartimentos de reacción se reúnen juntos después de la formación en cada compartimento de reacción de un complejo bifuncional y posteriormente se dividen en una matriz de más compartimentos de reacción para una nueva ronda de reacción. 141. El procedimiento de la reivindicación 140 que comprende más de una ronda de síntesis del complejo bifuncional, en el que el producto de reacción de una ronda de síntesis precedente se usa como complejo bifuncional naciente en una ronda de síntesis posterior para obtener una biblioteca de complejos bifuncionales diferentes comprendiendo cada uno una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de las moléculas de presentación individuales. 142. El procedimiento de la reivindicación 141, en el que los compartimentos de reacción separados se mezclan   juntos y se dividen en más compartimentos de reacción entre cada ronda de síntesis. 143. El procedimiento de la reivindicación 141, en el que dos o más reacciones de reactivos se producen antes de añadir una marca al sitio de cebado. 144. El procedimiento de la reivindicación 141, en el que la última ronda de síntesis del complejo bifuncional incluye la incorporación de un oligonucleótido que comprende un sitio de cebado. 145. El procedimiento de la reivindicación 130, en el que la biblioteca contiene de 10 3 a 10 6 complejos bifuncionales diferentes. 146. El procedimiento de la reivindicación 130, en el que la biblioteca contiene de 10 3 a 10 8 complejos bifuncionales diferentes. 147. El procedimiento de la reivindicación 130, en el que la biblioteca contiene de 10 3 a 10 10 complejos bifuncionales diferentes. 148. El procedimiento de la reivindicación 130, en el que la biblioteca contiene de 10 5 a 10 6 complejos bifuncionales diferentes. 149. El procedimiento de la reivindicación 130, en el que la biblioteca contiene de 10 5 a 10 8 complejos bifuncionales diferentes. 150. El procedimiento de la reivindicación 130, en el que la biblioteca contiene de 10 5 a 10 10 complejos bifuncionales diferentes. 151. Un procedimiento para identificar una molécula de presentación que tiene una propiedad predeterminada, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de a) producir una biblioteca de complejos bifuncionales diferentes mediante el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 130 a 150, en el que cada complejo bifuncional diferente de dicha biblioteca comprende una molécula de presentación y un oligonucleótido identificador que comprende marcas que identifican los reactivos que han participado en la formación de las moléculas de presentación individuales, b) someter la biblioteca obtenida en la etapa a) a una condición de selección produciendo la separación del resto de la biblioteca de la una o más moléculas de presentación que tienen dicha propiedad predeterminada, y c) identificar la una o más moléculas de presentación que tienen dicha propiedad predeterminada descodificando el oligonucleótido identificador de los uno o más complejos bifuncionales separados. 152. El procedimiento de la reivindicación 151, en el que la condición de selección implica la etapa de poner en contacto la biblioteca de complejos bifuncionales con una diana, en el que complejos bifuncionales que tienen una afinidad por la diana se separan del resto de la biblioteca eliminando complejos bifuncionales de no unión de los complejos bifuncionales que tienen una afinidad por la diana, y posteriormente eluyendo bajo condiciones de selección más rigurosas complejos bifuncionales que tienen una afinidad por dicha diana. 153. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 151 y 152, en el que el oligonucleótido identificador de los complejos bifuncionales separados se escinde de la molécula de presentación después de la eliminación de los complejos bifuncionales de no unión. 154. El procedimiento de la reivindicación 153, en el que el oligonucleótido identificador de los complejos bifuncionales separados se recupera y se descodifica para identificar las moléculas de presentación respectivas. 155. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 151 a 154, en el que una única ronda de selección contra una diana específica va seguida de amplificación de las variantes del complejo bifuncional seleccionado. 156. El procedimiento de la reivindicación 155, en el que las variantes del complejo bifuncional seleccionado se prueban por separado en un ensayo. 157. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 151 a 154, en el que más rondas de selección contra una diana específica van seguidas de amplificación de las variantes del complejo bifuncional seleccionado. 158. El procedimiento de la reivindicación 157, en el que las varias rondas de selección emplean condiciones de rigurosidad aumentadas. 159. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 157 y 158, en el que entre cada etapa de selección se realiza una amplificación del complejo seleccionado. 116   160. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 155 y 159, en el que las marcas del oligonucleótido identificador se amplifican usando PCR y cebadores que generan dos únicos sitios de corte. 161. El procedimiento de la reivindicación 160, en el que los sitios de corte se usan para la multimerización de las marcas clonando las marcas del oligonucleótido identificador en un vector adecuado para secuenciación. 162. El procedimiento de la reivindicación 160, en el que el producto de PCR resultante de la amplificación se clona directamente en un vector adecuado usando clonación TA. 163. El procedimiento de la reivindicación 160, en el que el producto de PCR resultante de la amplificación se introduce en una micromatriz con el fin de identificar la molécula de presentación. 117   118   119     121   122   123   124     126   127   128   129     131   132   133   134     136   137   138   139     141   142   143   144     146   147   148   149     REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN La lista de referencias citadas por el solicitante es, únicamente, para conveniencia del lector. No forma parte del documento de patente europea. Si bien se ha tenido gran cuidado al compilar las referencias, no pueden excluirse errores u omisiones y la OEP declina toda responsabilidad a este respecto. Documentos de patente citados en la descripción Literatura no patente citada en la descripción 151