Un procedimiento para diagnosticar infarto de miocardio que comprende (i) producir un complejo inmunitario poniendo en contacto una inmunoglobulina específica de la isozima de adenilato cinasa humana (AK3) con una muestra biológica;

y (ii) detectar el complejo inmunitario obtenido en la etapa (i), en el que la detección de dicho complejo inmunitario es indicativa de infarto de miocardio

Campo técnico

La presente invención se refiere a una formulación inmunitaria y a un kit de diagnóstico para cardiopatías que usan las isozimas de la adenilato cinasa mitocondrial humana, más particularmente a una formulación inmunitaria y a un kit de diagnóstico para cardiopatías caracterizados por usar la isozima de adenilato cinasa AK3 que tiene una expresión 5 específica en el músculo cardiaco como indicador diagnóstico de cardiopatías tales como infarto de miocardio y angina de pecho, posibilitando por tanto un diagnóstico más correcto y sencillo de cardiopatías sin diagnóstico erróneo debido a una excelente discriminación de diagnóstico.

Antecedentes de la técnica

Las cardiopatías tales como infarto de miocardio agudo, como una de las enfermedades en adultos que aparecen 10 predominantemente en los últimos 40 años de vida, y los pacientes que mueren de cardiopatías están aumentando gradualmente en el mundo. Se inician una media de 200 o más pruebas de diagnóstico mensuales en un hospital general nacional. Cada año, varios millones de personas que padecen dolor de pecho acuden a las urgencias de un hospital en los Estados Unidos de América.

Un procedimiento general para diagnosticar una cardiopatía en el pasado en una persona que padece dolor de pecho es 15 usar un electrocardiograma (“ECG” o sonografía cardiaca). Cuando se diagnostica un infarto de miocardio usando ECG, el infarto de miocardio se ha determinado por los cambios de una onda ST-T anormal y la onda Q del ECG. Sin embargo, un 50% o más de los pacientes con infarto de miocardio que acudieron a un hospital se diagnosticaron erróneamente, aproximadamente un 5% de dichos pacientes volvieron a sus casas y un 16% de dichos pacientes se diagnosticaron erróneamente y murieron. 20

Frithz y col. (Upsala J. Med. Sci. 81: 155-158, 1976) describen actividades adenilato cinasa elevadas en el suero y la orina de pacientes que padecen infarto de miocardio. Se usa un ensayo enzimático para detectar la adenilato cinasa, y se afirma explícitamente que la adenilato cinasa no es específica del corazón. Se encuentra que un 45% de los pacientes con infarto de miocardio son positivos para la adenilato cinasa.

Nobumoto y col. (J. Biochem. 123, 128-135, 1998) dan a conocer isozimas de adenilato cinasa, más específicamente 25 AK2 y AK3. Las isozimas se aíslan del hígado. No se hace referencia al infarto de miocardio.

Russell y col. (Journal of Biological Chemistry, 249, nº 6, 1874-1879, 1974) dan a conocer isoenzimas adenilato cinasa frente a las que se han creado antisueros. Las isoenzimas se dan a conocer como específicas de órgano.

Kurokawa y col. (Enzyme 1990; 43: 57-71) dan a conocer anticuerpos contra adenilato cinasa 1.

Ronquist y col. (Upsala J. Med. Sci. 88: 51-59, 1983) dan a conocer cuatro isozimas diferentes de adenilato cinasa en 30 pacientes con infarto de miocardio. No se hace mención a la adenilato cinasa mitocondrial 3.

Para resolver estos problemas, se han desarrollado marcadores biológicos para infarto de miocardio. Se prefiere que los marcadores biológicos ideales para infarto de miocardio tengan los siguientes requisitos.

En primer lugar, deben existir solo en células de músculo cardiaco y liberarse en la sangre con la necrosis de los miocitos. 35

En segundo lugar, deben liberarse rápidamente en la sangre tras la herida en el músculo cardiaco, ya que esto depende de la distribución celular y el tamaño molecular del marcador biológico.

En tercer lugar, la relación entre la extensión de la lesión cardiaca y la cantidad liberada de marcador biológico debe ser lineal.

En cuarto lugar, no deben requerirse un adiestramiento ni técnicas especiales para el ensayo, y el coste de los reactivos 40 necesarios para la detección debe ser económico continuadamente.

En quinto lugar, la concentración patológica de marcador bioquímico en la sangre debe aumentar después de que los pacientes sientan el dolor en el pecho.

En sexto lugar, los marcadores biológicos liberados deben retirarse rápidamente para confirmar el infarto de miocardio continuo. Sin embargo, desgraciadamente, no existen aún marcadores biológicos que satisfagan todos estos requisitos.

Actualmente, se emplean un ensayo de masa de creatina cinasa (CK) y una prueba de troponina como marcadores bioquímicos para diagnosticar infarto de miocardio. Puesto que la CK es de tipo MM en tejido muscular, de tipo BB en cerebro y médula ósea y de tipo MB híbrido en músculo esquelético o músculo cardiaco, sus concentraciones séricas se 5 usan como indicador de lesión de tejido cardiaco. Específicamente, la CK-MB se reconoce como una enzima que indica la extensión de infarto de miocardio agudo, y muestra un intervalo de cambio de aproximadamente un 5% de concentración sanguínea en todas las lesiones musculares tales como quemaduras, traumatismos, enfermedades musculares cardiacas y esqueléticas. Sin embargo, el diagnóstico de infarto que miocardio que emplea CK-MB tenía un problema de detección limitada y aproximadamente un 20% de señal falsa que reduce la exactitud de la detección, con 10 lo que no podía ser un diagnóstico fiable. Actualmente, los estándares de diagnóstico para infarto de miocardio estipulados por la Organización Mundial de la Salud (OMS) son los siguientes: (1) el dolor de pecho tradicional, (2) una onda Q anormal del ECG y (3) los marcadores bioquímicos deben estar por encima del intervalo de referencia. Si al menos dos estándares de entre ellos son aplicables a una persona, se diagnostica definitivamente como paciente con infarto de miocardio. Los marcadores bioquímicos deben incluirse como parte de la triada de diagnóstico de IMA. 15

Como alternativa, Boyce N. y col. han desarrollado una prueba de troponina cardiaca T (cTnT) para reducir el diagnóstico erróneo usando creatina cinasa (CK-MB) como marcador de lesión cardiaca convencional [véase Clinical Laboratory News, 22(1), 1-14(1996)]. Esta prueba se ha reconocido oficialmente por la Oficina federal estadounidense de fármacos y alimentos (FDA) , y se comercializa como producto de Boehringer Manheim Diagnostics Co., Ltd. de Alemania. En los Estados Unidos, se ha usado el producto desde noviembre de 1996, pero ahora se usa la prueba de 20 troponina I, puesto que se ha confirmado que reacciona de forma cruzada con troponina T derivada de músculo esquelético. Sin embargo, cTnT y cTnI se liberan al cabo de 12-24 h después del dolor del pecho, y por tanto no pueden usarse como marcadores tempranos. [Véase Eisenbrey y col., (1995) The Journal of American Medical Association, 74, 1343-1344]. Por lo tanto, estas pruebas no podían ser pruebas alternativas satisfactorias. En consecuencia, se emplean solo como medios auxiliares de la prueba de CK-MB. Dichos procedimientos de diagnóstico se emplean limitadamente 25 solo en unos pocos hospitales generales, puesto que requieren equipos de ensayo costosos, un cardiólogo especialista y personal muy adiestrado, lo que aumenta por tanto el coste de un diagnóstico costoso. Adicionalmente, los pacientes que requieren una detección continua apenas usan la troponina, porque, en Corea, el seguro médico únicamente permite una prueba de troponina.

Como se menciona anteriormente, el marcador biológico convencional para diagnosticar cardiopatías no es satisfactorio 30 con vistas a la exactitud de diagnóstico y en el momento del diagnóstico una vez iniciado el IMA. En consecuencia, se ha demandado un nuevo indicador diagnóstico para lesión de músculo cardiaco que posibilite un diagnóstico más exacto y rápido sin equipos de ensayo costosos en una clínica pequeña y por parte de una persona para diagnosticar cardiopatías.

Divulgación de la invención 35

La presente invención se refiere a un procedimiento para diagnosticar infarto de miocardio, a una adenilato cinasa humana 3 y a una inmunoglobulina específica de adenilato cinasa humana 3, como se define en las reivindicaciones adjuntas. Se da a conocer también una formulación inmunitaria y un kit de diagnóstico de cardiopatía e infarto de miocardio que usa isozimas de adenilato cinasa mitocondrial que posibilitan una excelente exactitud y sensibilidad, caracterizado porque el material candidato a indicador diagnóstico que satisface todos los requisitos de indicadores 40 diagnósticos ideales para infarto de miocardio existe específicamente en tejido de músculo cardiaco, y porque se usan anticuerpos dirigidos...

1. Un procedimiento para diagnosticar infarto de miocardio que comprende

(i) producir un complejo inmunitario poniendo en contacto una inmunoglobulina específica de la isozima de adenilato cinasa humana (AK3) con una muestra biológica; y

(ii) detectar el complejo inmunitario obtenido en la etapa (i), en el que la detección de dicho complejo 5 inmunitario es indicativa de infarto de miocardio.

2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que la muestra biológica se selecciona del grupo constituido por orina, sangre, suero y plasma sanguíneo.

3. Un uso in vitro de la isozima de adenilato cinasa mitocondrial humana 3 (AK3) como marcador para el diagnóstico de infarto de miocardio. 10

4. Un uso in vitro de una inmunoglobulina específica de la isozima de adenilato cinasa mitocondrial humana (AK3) para el diagnóstico de infarto de miocardio.