VACUNA CONTRA EL SINDROME RESPIRATORIO Y REPRODUCTIVO PORCINO BASADA EN EL AISLADO JA-142.
Un procedimiento de pases múltiples para atenuar un virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (SRRP) capaz de inducir un efecto citopático,
que incluye las etapas de replicar sucesivamente dicho virus por inoculación y replicación del virus en cultivos celulares individuales hasta que se consiga su atenuación, caracterizado porque cada etapa sucesiva de inoculación y replicación comprende (1) retirar una muestra que contiene virus del cultivo celular mientras que el virus se está replicando a una velocidad logarítmica y antes de la inducción de efectos citopáticos en el cultivo celular, (2) inocular el cultivo celular siguiente con una alícuota de dicha muestra, de modo que se usa la alícuota más pequeña que mantiene la infección y la replicación logarítmica, y de modo que sólo se transfieren pequeñas cantidades de virus de un pase a otro, (3) conservar cada cultivo celular del que se ha retirado una muestra (de acuerdo con la etapa 1)) después de la etapa de retirada, y (4) observar si se produce inducción de un efecto citopático en cada uno de dichos cultivos celulares conservados
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2000/010852.
Solicitante: UNITED STATES DEPARTMENT OF AGRICULTURE
BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA, INC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 1400 INDEPENDENCE AVENUE SW WASHINGTON, DC 20250-0302 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: GORCYCA, DAVID E., MENGELING,WILLIAM,L, VORWALD,ANN, LAGER,KELLY, BURKHART,KELLY, ROOF,MIKE.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 21 de Abril de 2000.
Fecha Concesión Europea: 14 de Julio de 2010.
Clasificación PCT:
- A61K39/12 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Antígenos virales.
- C12N7/00 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00).
- C12N7/02 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Aislamiento o purificación.
- C12N7/04 C12N 7/00 […] › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
- C12N7/08 C12N 7/00 […] › por pases sucesivos de virus.
Clasificación antigua:
- A61K39/12 A61K 39/00 […] › Antígenos virales.
- C12N7/00 C12N […] › Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00).
- C12N7/02 C12N 7/00 […] › Aislamiento o purificación.
- C12N7/04 C12N 7/00 […] › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
- C12N7/08 C12N 7/00 […] › por pases sucesivos de virus.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
Fragmento de la descripción:
Vacuna contra el síndrome respiratorio y reproductivo porcino basada en el aislado JA-142.
Antecedentes de la invención
La presente invención se refiere en líneas generales al virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (SRRP) atípico avirulento atenuado (VSRRP) y a las vacunas de virus vivo correspondientes para su administración a ganado porcino para conferir una inmunidad eficaz en el ganado porcino frente a VSRRP. La invención se refiere a un nuevo procedimiento altamente eficaz para pasar virus SRRP hasta su atenuación.
El SRRP surgió a finales de los años 80 como una enfermedad vírica importante del ganado porcino. El VSRRP causa insuficiencia reproductiva grave en cerdas gestantes, manifestada en forma de partos prematuros, aumento del número de mortinatos, cerdos momificados y nacidos débiles, tasa de partos disminuida y retraso en la vuelta al estro. Además, el sistema respiratorio del ganado porcino infectado con VSRRP se ve afectado desfavorablemente, lo que se demuestra por lesiones que aparecen en los pulmones del ganado porcino infectado. Para combatir los problemas asociados con la infección por VSRRP, se han desarrollado vacunas que conferían inmunidad a las cepas de SRRP existentes entonces.
Las epidemias de una forma excepcionalmente grave de SRRP, denominado en lo sucesivo en el presente documento "SRRP atípico", se reconoció por primera vez en Norteamérica en la última parte de 1996. Se diferenciaban de las epidemias de "SRRP típico" en que: 1) los signos clínicos eran más prolongados así como más graves; 2) la incidencia de abortos era superior, especialmente durante la primera parte y la mitad de la gestación; 3) existía una mayor incidencia de mortalidad de cerdas nulíparas y mutíparas; 4) el VSRRP se aislaba menos frecuentemente de fetos abortados, cerdos mortinatos y cerdos nacidos vivos -quizá porque los abortos eran más frecuentemente el resultado de una enfermedad maternal aguda más que de una infección transplacentaria; 5) las lesiones pulmonares de los cerdos jóvenes afectados eran más amplias; y 6) las vacunas disponibles en el mercado proporcionaban escasa o ninguna protección. En su conjunto, estas observaciones indicaban la emergencia de cepas más virulentas y antigénicamente diferentes de SRRP y la necesidad de una nueva generación de vacunas contra SRRP.
El procedimiento usado más frecuentemente para producir vacunas de virus vivo atenuado es realizar pases en serie del virus en un sustrato (habitualmente un cultivo celular) distinto del huésped natural (S) hasta que se atenúe lo suficiente (es decir, se reduzca su virulencia o capacidad para producir enfermedades) para usarlo como vacuna. Para el primer pase, se infecta un cultivo celular con el inóculo seleccionado. Después de obtener pruebas claras de replicación de virus (por ejemplo, efectos citopáticos inducidos por virus [ECP] en las células infectadas), se usa una alícuota del medio de cultivo celular, o células infectadas, o ambas, del primer pase para infectar un segundo cultivo celular. El procedimiento se repite hasta que una o más mutaciones críticas en el genoma viral causan una atenuación suficiente de modo que el virus pueda usarse con seguridad como vacuna. El grado de atenuación se determina habitualmente empíricamente exponiendo al huésped natural (S) a niveles de pase progresivamente mayores del virus.
El procedimiento anterior es básicamente válido y se ha usado con éxito para el desarrollo de numerosas vacunas para uso humano y veterinario. Sin embargo, es relativamente ineficaz porque la fase logarítmica de la replicación de virus, durante la que es más probable que se produzcan mutaciones, se completa con frecuencia mucho antes de que se hagan visiblemente evidentes pruebas de la replicación viral.
El documento US 5.840.563 desvela un procedimiento para los virus del síndrome respiratorio y de infertilidad porcino en aumento, por el que el virus se inocula en células de simio y las células de simio inoculadas se incuban.
El documento US 5.846.805 describía un virus del síndrome respiratorio y de infertilidad porcino atenuado que se produce por un procedimiento que comprende pasar el virus del síndrome respiratorio y de infertilidad porcino por células de simio.
El documento US 5.476.778 desvela un procedimiento de atenuación de virus del síndrome respiratorio y de infertilidad porcino que comprende pasar el virus por una línea celular de simio en condiciones bien definidas.
El documento US 4.211.843 desvela un procedimiento para la producción de una cepa atenuada de virus del sarampión, eficaz para la producción de vacuna de virus del sarampión atenuado.
El documento US 4.224.412 desvela una vacuna de cultivo de virus vivo contra el moquillo canino y procedimientos de preparación de dicha vacuna.
Ciaccio, G. (1970) [Biology of attenuated, mumps rubella, measles and rabies viruses. Comparative considerations on the methods of attenuation of their virulence] Rivista di biologia 63 (1), 87-129 describe la biología de diferentes virus atenuados.
Kawai y Masumoto (1977) Virology 76, 60-71 describen partículas interferentes y no interferentes generadas por un virus variante de placas pequeñas de rabia.
Por lo tanto, existe una necesidad indudable en la técnica de una vacuna que confiera una inmunidad eficaz contra cepas de VSRRP, incluyendo cepas de VSRRP atípicas recientemente descubiertas. También existe la necesidad en la técnica de un procedimiento de preparación de dicha vacuna. Por último, lo que se necesita es un procedimiento de pase de un virus que atenúe el virus más eficazmente de lo que hasta ahora se creía posible, con el virus atenuado resultante generando anticuerpos específicos de VSRRP en ganado porcino, confiriendo de este modo una inmunidad eficaz frente a una infección posterior por VSRRP.
Sumario de la invención
La presente invención se define como sigue: Un procedimiento de pases múltiples para atenuar un virus SRRP capaz de inducir un efecto citopático, que incluye las etapas de replicar sucesivamente dicho virus por inoculación y replicación del virus en cultivos celulares individuales hasta que se consiga su atenuación, caracterizado porque cada etapa de inoculación y replicación sucesiva comprende
1) retirar una muestra que contiene virus del cultivo celular mientras que el virus se está replicando a una velocidad logarítmica y antes de la inducción de efectos citopáticos en el cultivo celular,
2) inocular el siguiente cultivo celular con una alícuota de dicha muestra de modo que se usa la alícuota más pequeña que mantiene la infección y la replicación logarítmica, y de modo que sólo se transfieren cantidades pequeñas de virus de un pase a otro,
3) conservar cada cultivo celular del que se retiró una muestra (de acuerdo con la etapa 1) después de la etapa de retirada y
4) observar si se produce inducción de un efecto citopático en cada uno de dichos cultivos celulares conservados.
La etapa de retirada 1) se lleva a cabo aproximadamente 24 horas después de la inoculación de dichos cultivos celulares y los cultivos celulares empleados comprenden una monocapa de células que tienen una confluencia superior a aproximadamente el 70%.
El procedimiento comprende además la etapa de ensayar periódicamente dicho virus progenie para determinar su atenuación y también incluye la etapa de proporcionar un exceso de células inicialmente no infectadas para asegurar que dicho virus pueda replicarse a una velocidad logarítmica.
Además, cada una de las inoculaciones sucesivas que implican el pase antes de que se observe un efecto citopático se lleva a cabo después de que se observe un efecto citopático en un cultivo celular previamente inoculado, siendo dicho cultivo celular previamente inoculado un cultivo parental de las células de las que se retira una alícuota para el pase.
La presente invención supera los problemas resumidos anteriormente. Se describen cepas de VSRRP atípico atenuado y las vacunas vivas modificas mejoradas correspondientes que confieren una inmunidad eficaz contra cepas de VSRRP atípicas recientemente descubiertas. La expresión "inmunidad eficaz" se refiere a la capacidad de una vacuna para prevenir infecciones por VSRRP en ganado porcino, incluyendo infecciones por VSRRP atípico que dan...
Reivindicaciones:
1. Un procedimiento de pases múltiples para atenuar un virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (SRRP) capaz de inducir un efecto citopático, que incluye las etapas de replicar sucesivamente dicho virus por inoculación y replicación del virus en cultivos celulares individuales hasta que se consiga su atenuación,
caracterizado porque cada etapa sucesiva de inoculación y replicación comprende
2. El procedimiento de la reivindicación 1, produciéndose dicha etapa de retirada aproximadamente 24 horas después de la inoculación de dichos cultivos celulares.
3. El procedimiento de la reivindicación 1, comprendiendo dicho cultivo celular una monocapa de células que tienen una confluencia superior a aproximadamente el 70%.
4. El procedimiento de la reivindicación 1, que comprende además la etapa de ensayar periódicamente dicho virus progenie para determinar su atenuación.
5. El procedimiento de la reivindicación 1, que incluye además la etapa de proporcionar un exceso de células inicialmente no infectadas para asegurar que dicho virus pueda replicarse a una velocidad logarítmica.
6. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que cada una de las inoculaciones sucesivas que implican el pase antes de que se observe un efecto citopático se lleva a cabo después de que se observe el efecto citopático en un cultivo celular previamente inoculado, siendo dicho cultivo celular previamente inoculado un cultivo parental de las células de las que se retira una alícuota para su pase.
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