ADMINISTRACION GENICA MEDIANTE LIPOSOMA DIRIGIDO.

Vector para la administración de un virus a una célula diana dentro de un animal huésped,

que comprende un complejo de un ligando de direccionamiento a la célula, un liposoma que comprende uno o más lípidos catiónicos, y el virus, en el que dichos lípidos catiónicos y el virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 104 - 107 lípidos catiónicos/partícula viral

Administración génica mediante liposoma dirigido.

La presente invención se refiere de forma general a la administración sistémica de una molécula terapéutica a través de un complejo liposómico que se dirige a un tipo de célula preseleccionado. Más en particular, la presente invención proporciona composiciones y procedimientos para la transferencia génica dirigida a células y terapia génica para cánceres humanos, en la que se administra una molécula terapéutica a la célula cancerosa diana a través de un complejo ligando/liposoma. El tratamiento de una enfermedad celular proliferativa (por ejemplo, el cáncer) resulta en una mejora sustancial de la eficacia de las intervenciones radioterapéuticas o quimioterapéuticas.

La terapia ideal para el cáncer sería la que se dirigiera selectivamente a una ruta celular responsable del fenotipo tumoral y que no fuera tóxica para las células normales. Hasta el momento, dicha terapia ideal sigue siendo precisamente esto, un ideal. Aunque los tratamientos contra el cáncer que comprenden terapia génica y moléculas antisentido son sustancialmente prometedores, existen algunos problemas que se deben abordar antes de que dicha promesa se haga realidad. Quizá el principal problema asociado a los tratamientos macromoleculares para el cáncer y otras enfermedades es la administración eficaz de la molécula o moléculas terapéuticas al sitio o sitios del cuerpo en el que son necesarias.

Otros han evaluado diversos sistemas de administración de ácido nucleico ("vectores") para el tratamiento del cáncer, incluyendo virus y liposomas. El vector ideal para la terapia génica del cáncer en humanos sería aquel que se pudiera administrar sistémicamente y a continuación dirigirse de forma específica y eficiente a las células tumorales, donde fuera que las mismas se encontraran dentro del cuerpo. Los procedimientos dirigidos por vector viral muestran una elevada eficiencia de transferencia génica, pero son deficientes en diversos aspectos. Las limitaciones de un enfoque viral están relacionadas con su falta de direccionamiento y con la presencia de elementos virales residuales que pueden ser inmunogénicos, citopáticos o recombinogénicos.

Una importante deficiencia de los vectores virales es su falta de especificidad respecto a células cancerosas. Debido a su incapacidad para ser dirigidos a los tumores, los vectores virales están limitados en su utilización a una administración directa y local, la cual no tiene capacidad para afectar a las metástasis, que representan la causa de muerte principal de la mayoría de pacientes con cáncer.

Los elevados títulos alcanzables y el tropismo celular que hacen atractivos los virus como terapia génica y vectores de administración de transferencia génica presentan algunas de sus mayores deficiencias. Aunque la preparación de nuevos virus con nuevas dianas de infección ha sido descrita en la bibliografía, dichos vectores resultan problemáticos debido a la necesidad de cultivar el virus hasta títulos elevados. En consecuencia, se ha dirigido una cantidad sustancial de atención a vectores no víricos para la administración de terapias moleculares, incluyendo la utilización en transferencia génica y terapia génica.

Se han obtenido algunos progresos en el desarrollo de formulaciones farmacéuticas no víricas de genes para la terapia in vivo en humanos, particularmente sistemas de transferencia génica mediados por liposoma catiónico. Los liposomas catiónicos están compuestos por bicapas lipídicas cargadas positivamente y se pueden complejar con ADN desnudo cargado negativamente simplemente mezclando lípidos y ADN de tal modo que el complejo resultante presente una carga neta positiva. El complejo es fácilmente enlazado y absorbido por las células, con una eficacia de transfección relativamente elevada. Las características de los liposomas catiónicos que los hacen versátiles y atractivos para la administración de ADN incluyen: sencillez de preparación, capacidad de complejar grandes cantidades de ADN, versatilidad en la utilización con cualquier tipo y tamaño de ADN o ARN, capacidad de transfectar muchos tipos diferentes de células (incluyendo células que no se dividen) y falta de inmunogenicidad o actividad biológicamente peligrosa. La utilización de liposomas ofrece una serie de ventajas sobre las metodologías víricas para la administración génica. Principalmente, dado que los liposomas no son agentes infecciosos capaces de autorreplicación, no presentan riesgo alguno de evolucionar hacia nuevos tipos de patógenos humanos infecciosos. Además, se ha puesto de manifiesto que los liposomas catiónicos son seguros y hasta cierto punto deficientes para la administración génica in vivo. Dado que los liposomas no son agentes infecciosos, se pueden formular por simple mezclado. Además, se ha puesto de manifiesto que los liposomas catiónicos son seguros y hasta cierto punto deficientes para la administración génica in vivo. Actualmente, se están llevando a cabo ensayos clínicos utilizando liposomas catiónicos para administración génica, y ya existen en el mercado liposomas para la administración de pequeños agentes terapéuticos moleculares (por ejemplo, agentes quimioterapéuticos y antifúngicos).

Un inconveniente de los liposomas catiónicos consiste en que no presentan especificidad tumoral y tienen unas eficiencias de transfección relativamente bajas en comparación con los vectores virales. Sin embargo, se puede alcanzar un direccionamiento hacia células cancerosas a través de liposomas modificándolos a efectos de que presenten un ligando que sea reconocido por un receptor celular de superficie. La endocitosis mediada por receptor representa una ruta de internalización altamente eficaz en las células eucariotas. La presencia de un ligando en un liposoma facilita la entrada de ADN en las células a través del enlazamiento inicial de dicho ligando por parte de su receptor sobre la superficie celular, seguido de la internalización del complejo enlazado. Una vez internalizado, una cantidad suficiente de ADN puede escapar a la ruta endocítica y ser expresado en el núcleo celular.

Actualmente, existe una base de conocimientos sustancial referente a las moléculas que residen en las superficies exteriores de las células cancerosas. Se pueden utilizar moléculas de superficie para dirigir selectivamente los liposomas a las células tumorales, ya que las moléculas que se encuentran en el exterior de dichas células tumorales son diferentes de las de las células normales. Por ejemplo, si un liposoma presenta la proteína transferrina (Tf) en su superficie, el mismo puede dirigirse a células cancerosas que presentan niveles elevados de receptor de transferrina.

Se ha examinado en diversos ligandos la capacidad de direccionamiento de liposomas, incluyendo el ácido fólico (folato), una vitamina necesaria para la síntesis de ADN, y la transferrina. Los niveles de receptor de folato y de receptor de transferrina son elevados en diversos tipos de células cancerosas, incluyendo de ovario, orales, de pecho, de próstata y de colon. La presencia de dichos receptores se puede correlacionar con el estado agresivo o proliferativo de las células tumorales. También se ha puesto de manifiesto que el receptor de folato se recicla durante la internalización del mismo en células con división rápida, tales como las células cancerosas. Además, se ha puesto de manifiesto que las macromoléculas y liposomas conjugados con transferrina y folato son absorbidas de forma específica por parte de células tumorales que presentan los receptores mediante endocitosis mediada por receptor. De este modo, los receptores de folato y transferrina se consideran útiles como marcadores tumorales de pronóstico para el cáncer y como dianas potenciales para la administración de fármacos en el tratamiento del crecimiento de células malignas.

La falta de respuesta a la radioterapia y quimioterapia representa una necesidad médica no satisfecha en el tratamiento de muchos tipos de cáncer. A menudo, cuando el cáncer es recurrente, los tumores han adquirido mayor resistencia a la radiación o a los agentes quimioterapéuticos. La incorporación a las terapias anticáncer de un nuevo componente que provoque la sensibilización a dichas terapias tendría una importancia clínica enorme. Un modo en el que se podría alcanzar dicha sensibilización a la quimioterapia/radioterapia es a través de terapia génica dirigida.

Se ha establecido la importancia del papel del p53 en el control de la proliferación celular mediante la regulación de los fenómenos del ciclo celular y la inducción...

1. Vector para la administración de un virus a una célula diana dentro de un animal huésped, que comprende un complejo de un ligando de direccionamiento a la célula, un liposoma que comprende uno o más lípidos catiónicos, y el virus, en el que dichos lípidos catiónicos y el virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁴ - 10⁷ lípidos catiónicos/partícula viral.

2. Vector según la reivindicación 1, en el que el virus comprende un ácido nucleico terapéutico.

3. Vector según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el virus es un adenovirus o un retrovirus.

4. Vector según la reivindicación 1, 2 ó 3, en el que el virus es un virus recombinante.

5. Vector según la reivindicación 2, en el que el ácido nucleico codifica:

6. Vector según la reivindicación 2, en el que el ácido nucleico codifica p53 de tipo salvaje.

7. Vector según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el ligando de direccionamiento a la célula es un ligando de direccionamiento a la célula tumoral.

8. Vector según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el ligando de direccionamiento a la célula es un folato.

9. Vector según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el ligando de direccionamiento a la célula es transferrina.

10. Vector según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el liposoma comprende además un lípido neutro o auxiliar.

11. Vector para administrar in vivo una molécula de ácido nucleico terapéuticamente eficaz a un animal que padece un tumor, consistiendo dicho vector esencialmente en un complejo de un ligando de direccionamiento a la célula seleccionado de entre el grupo constituido por folato y transferrina, un liposoma catiónico que comprende uno o más lípidos catiónicos y un virus que comprende un ácido nucleico terapéutico, en el que los lípidos catiónicos y los virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁴ - 10⁷ lípidos catiónicos/partícula viral.

12. Vector según la reivindicación 11, en el que el ácido nucleico codifica p53 de tipo salvaje.

13. Composición farmacéutica que comprende un vector según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en un portador farmacéuticamente aceptable.

14. Utilización de un complejo para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer, en el que dicho complejo comprende: un ligando de direccionamiento a la célula; un liposoma catiónico; y un virus que comprende un ácido nucleico terapéutico que codifica p53, en el que los lípidos catiónicos y el virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁴ - 10⁷ lípidos catiónicos/partícula viral.

15. Utilización según la reivindicación 14, en la que el ligando de direccionamiento a la célula es folato o transferrina, el liposoma es un liposoma catiónico y el ácido nucleico terapéutico codifica p53 de tipo salvaje.

16. Utilización según la reivindicación 14 o la reivindicación 15, en la que el medicamento comprende el complejo y un vehículo farmacéuticamente aceptable en una composición farmacéuticamente aceptable.

17. Utilización de un complejo para la preparación de un medicamento eficaz en el tratamiento o mejora del cáncer en un animal de sangre caliente, en la que dicho complejo comprende: un ligando de direccionamiento a la célula cancerosa; un liposoma que comprende uno o más lípidos catiónicos, y un virus que comprende un ácido nucleico terapéutico, estando presentes los lípidos catiónicos y el virus en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁴ - 10⁷ lípidos catiónicos/partícula viral.

18. Utilización según la reivindicación 17, en la que el complejo comprende un ligando de direccionamiento a la célula seleccionado de entre el grupo constituido por folato y transferrina, un liposoma catiónico, y en la que el virus comprende un ácido nucleico que codifica p53 de tipo salvaje.

19. Utilización según la reivindicación 17 o la reivindicación 18, en la que el medicamento es apto para su utilización simultánea, separada o secuencial con un agente quimioterapéutico anticanceroso o con radioterapia anticancerosa.

20. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, en la que el medicamento es apto para la administración intratumoral.

21. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19, en la que el medicamento es apto para la administración sistémica.

22. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19, en la que el medicamento es apto para la administración intravenosa.

23. Vector según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que los lípidos catiónicos y el virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁵ - 10⁷ lípidos catiónicos/partícula viral.

24. Vector según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que los lípidos catiónicos y el virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁶ lípidos catiónicos/partícula viral.

25. Vector según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 22, en el que los lípidos catiónicos y el virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁵ - 10⁷ lípidos catiónicos/partícula viral.

26. Vector según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 22, en el que los lípidos catiónicos y el virus están presentes en el complejo en una relación de aproximadamente 10⁶ lípidos catiónicos/partícula viral.

27. Vector según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, ó 23 ó 24 para su utilización en medicina.