VACUNA DE ADN CONTRA LAS CÉLULAS ENDOTELIALES PROLIFERATIVAS Y MÉTODOS DE UTILIZACIÓN DE LA MISMA.

Vacuna de ADN contra las células endoteliales proliferativas y métodos de utilización de la misma. . Campo de la invención La presente invención se refiere a vacunas de ácido desoxirribonucleico (ADN) que codifican moléculas adecuadas eficaces para provocar una respuesta inmunitaria contra las células endoteliales proliferativas. Más particularmente, la presente invención se refiere a vacunas de ADN que codifican el receptor del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF). La vacuna de ADN se puede utilizar para inhibir la proliferación de las células endoteliales vasculares, el crecimiento tumoral y la angiogénesis. Antecedentes de la invención Las vacunas se han utilizado para proporcionar una protección de larga duración contra una serie de enfermedades mediante la administración muy limitada de un agente profiláctico que estimula la destrucción de los patógenos de dicha enfermedad por parte del sistema inmunitario del organismo antes de que los mismos puedan proliferar y provocar un efecto patológico. En Bernard R. Glick y Jack J. Pasternak, Molecular Biotechnology, Principles and Applications of Recombinant DNA, 2ª edición, ASM Press, pág. 253-276 (1998), se describen diversos aspectos sobre las vacunas y la vacunación. La vacunación es un medio para inducir al sistema inmunitario del propio cuerpo a buscar y destruir un agente infeccioso antes de que el mismo provoque una respuesta patológica. Por lo general, las vacunas consisten en agentes infecciosos (virus o bacterias) vivos, aunque atenuados, o en una forma muerta de los mismos. Una vacuna compuesta por una bacteria o un virus vivos debe ser necesariamente apatógena. Por lo general, un cultivo bacteriano o vírico se atenúa (debilita) mediante un tratamiento físico o químico. Aunque el agente ya no es virulento, todavía puede provocar una respuesta inmunitaria en el individuo tratado con la vacuna. La respuesta inmunitaria es provocada por antígenos, ya sean macromoléculas específicas o un agente infeccioso. Normalmente, dichos antígenos son proteínas, polisacáridos, lípidos o glucolípidos que son reconocidos como extraños por los linfocitos conocidos como linfocitos B y linfocitos T. La exposición de estos dos tipos de linfocitos a un antígeno provoca una rápida respuesta de división y diferenciación celular, lo que da lugar a la formación de clones de los linfocitos sometidos a dicha exposición. Los linfocitos B producen células plasmáticas que, a su vez, producen proteínas llamadas anticuerpos (Ac) que se unen selectivamente a los antígenos presentes en el agente infeccioso, neutralizando o desactivando de este modo el patógeno (inmunidad humoral). En algunos casos, la respuesta de los linfocitos B requiere la ayuda de linfocitos T CD4 cooperadores. El clon de linfocitos T especializados que se forma como respuesta a la exposición al antígeno es un linfocito T citotóxico (CTL) que puede unirse a los agentes patógenos y tejidos que presentan el antígeno y eliminarlos (inmunidad celular o mediada por células). En algunos casos, una célula presentadora de antígeno (APC), tal como una célula dendrítica, envuelve el patógeno u otra célula extraña por endocitosis. A continuación, dicha APC procesa los antígenos de las células y los presenta en forma de complejo molécula de histocompatibilidad-péptido al receptor de linfocitos T (TCR) de los CTL, lo que estimula una respuesta inmunitaria. En general, la inmunidad humoral caracterizada por la formación de anticuerpos específicos es la más eficaz contra las infecciones bacterianas agudas y las infecciones víricas recurrentes, mientras que la inmunidad celular es la más efectiva contra las infecciones víricas, las infecciones crónicas por bacterias intracelulares y las infecciones por hongos. Es conocido asimismo que la inmunidad celular protege frente a algunos cánceres y es responsable del rechazo en trasplantes de órganos. Los anticuerpos de los antígenos de infecciones previas se siguen detectando en la sangre durante períodos muy prolongados, proporcionando unos medios para determinar la exposición anterior a un patógeno. Tras la exposición repetida al mismo patógeno, el sistema inmunitario previene eficazmente la reinfección mediante la eliminación del agente patógeno antes de que pueda proliferar y producir una respuesta patógena. A veces, la misma respuesta inmunitaria provocada por un agente patógeno se puede producir mediante un agente apatógeno que presenta el mismo antígeno que el patógeno. De este modo, el sujeto puede resultar protegido frente a la posterior exposición a dicho patógeno sin haber tenido que combatir previamente su infección. Sin embargo, no todos los agentes infecciosos son fáciles de cultivar e inactivar, lo que resulta necesario para la formación de una vacuna. Las técnicas modernas de ADN recombinante han permitido la obtención de nuevas vacunas por manipulación genética con el objetivo de tratar de superar esta limitación. Se pueden crear agentes infecciosos que carecen de los genes patógenos, lo que permite disponer de una forma viva no virulenta del organismo para utilizarla como vacuna. También es posible manipular un organismo relativamente apatógeno, tal como E. coli, para que presente los antígenos de superficie celular de un portador patógeno. El sistema inmunitario del individuo tratado con un portador transformado de este tipo es engañado para que genere anticuerpos contra el 2 E03726007 16-11-2011   patógeno. Las proteínas antigénicas de un agente patógeno se pueden manipular y expresar en una especie apatógena y también se pueden aislar y purificar para producir una vacuna de subunidades. Las vacunas de subunidades presentan la ventaja de ser estables, seguras y químicamente bien definidas; sin embargo, su producción puede tener un coste prohibitivo. En los últimos años ha surgido un nuevo enfoque en el ámbito de las vacunas que se ha bautizado de forma genérica como inmunización genética. En dicho enfoque, se inserta de manera operativa un gen que codifica un antígeno de un agente patógeno en las células del individuo que se quiere inmunizar. Las células tratadas se transforman y producen las proteínas antigénicas del patógeno. A continuación, dichos antígenos producidos in vivo provocan la respuesta inmunitaria deseada en el huésped. El material genético utilizado en estas vacunas genéticas puede ser un constructo de ADN o de ARN. A menudo, el polinucleótido que codifica el antígeno se introduce junto con otras secuencias polinucleótidas promotoras a fin de favorecer la inserción, replicación o expresión del gen. Las vacunas de ADN que codifican genes de antígenos se pueden introducir en las células huésped del individuo mediante diversos sistemas de expresión. Los mismos comprenden sistemas de expresión procarióticos, de mamíferos y de levaduras. Por ejemplo, un enfoque consiste en utilizar un vector vírico, tal como un virus vaccinia que incorpora el nuevo material genético, para inocular dicho material en las células huésped. Alternativamente, el material genético se puede incorporar en un vector o se puede administrar directamente a las células huésped como un polinucleótido desnudo, es decir, simplemente como ADN purificado. Además, el ADN se puede transfectar de manera estable en bacterias atenuadas, tales como la Salmonella typhimurium. Cuando un paciente se vacuna por vía oral con la Salmonella transformada, las bacterias son transportadas a las placas de Peyer del intestino (es decir, a tejidos linfoides secundarios), que estimulan a continuación una respuesta inmunitaria. Las vacunas de ADN ofrecen una oportunidad de inmunización frente a estados patológicos no causados por patógenos tradicionales, tales como las enfermedades genéticas y el cáncer. Por lo general, en una vacuna genética contra el cáncer se deben aislar antígenos de un tipo específico de células tumorales y a continuación introducirlos en la vacuna. Así, una vacuna general eficaz contra una serie de cánceres puede implicar el desarrollo de numerosas vacunas individuales para cada tipo de célula cancerosa frente al cual se pretende inmunizar al individuo. Un enfoque general en el tratamiento de tumores consiste en la administración de compuestos inhibidores de la angiogénesis en pacientes que presentan tumores en crecimiento. La angiogénesis es el proceso por el cual se forman nuevos capilares y vasos sanguíneos. Se trata de un proceso importante en el desarrollo embrionario y en el crecimiento, reparación y regeneración de tejidos. Además de en estos procesos normales y esenciales, la angiogénesis también participa en muchos procesos patológicos anormales, tales como crecimiento tumoral, metástasis tumorales y enfermedades oculares vasculares como la retinopatía diabética. La angiogénesis implica una serie... [Seguir leyendo]

1. Vacuna de ADN eficaz para provocar una respuesta inmunitaria contra las células endoteliales proliferativas, que comprende un constructo de ADN que codifica de manera operativa una proteína receptora de VEGF en un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que la proteína receptora de VEGF se selecciona de entre el grupo constituido por VEGFR-2 que presenta la secuencia de SEC ID nº: 2, Flk-1 que presenta la secuencia de SEC ID nº: 6, y un receptor que se une al VEGF o a los fragmentos del mismo y que tiene una secuencia que comparte por lo menos 80% de homología con la secuencia de SEC ID nº: 2 ó 6 y el constructo de ADN se incorpora de manera operativa en un vector de Salmonella typhimurium o Salmonella typhi atenuadas. 2. Vacuna de ADN según la reivindicación 1, en la que el constructo de ADN es un ADN sustancialmente purificado que presenta una secuencia polinucleótida seleccionada de entre el grupo constituido por SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 5, y una secuencia polinucleótida que comparte por lo menos 80% de homología con respecto a las mismas y codifica un receptor que se une al VEGF o fragmentos del mismo. 3. Utilización de un constructo de ADN que codifica de manera operativa una proteína receptora de VEGF y un vehículo farmacéuticamente aceptable para la misma para la preparación de una vacuna de ADN para inhibir el crecimiento tumoral en un mamífero, en la que se administra por vía oral una cantidad inmunológicamente eficaz de dicha vacuna de ADN a dicho mamífero, mostrando dicho mamífero una respuesta inmunitaria provocada por la vacuna y específica para las células endoteliales proliferativas, lo que da lugar a la detención del crecimiento tumoral, la reducción del tamaño del tumor o la inhibición de la diseminación del tumor, en la que la proteína receptora de VEGF es seleccionada de entre el grupo constituido por VEGFR-2, que presenta la secuencia de SEC ID nº: 2, Flk-1, que presenta la secuencia SEC ID nº: 6, y un receptor que se une al VEGF o a los fragmentos del mismo y que presenta una secuencia que comparte por lo menos 80% de homología con la secuencia de SEC ID nº: 2 ó 6 y el constructo de ADN se incorpora de manera operativa en un vector de Salmonella typhimurium o Salmonella typhi atenuadas. 4. Utilización según la reivindicación 3, en la que el mamífero es un ser humano. 5. Artículo manufacturado que comprende una vacuna según la reivindicación 1 envasada en un recipiente estéril sellado herméticamente, presentando el recipiente una etiqueta fijada al mismo, presentando la etiqueta un material impreso que identifica la vacuna y proporciona información útil para la persona que administra dicha vacuna al paciente. 23 E03726007 16-11-2011   24 E03726007 16-11-2011   E03726007 16-11-2011   26 E03726007 16-11-2011   27 E03726007 16-11-2011   28 E03726007 16-11-2011   29 E03726007 16-11-2011   E03726007 16-11-2011   31 E03726007 16-11-2011   32 E03726007 16-11-2011   33 E03726007 16-11-2011   34 E03726007 16-11-2011   E03726007 16-11-2011   36 E03726007 16-11-2011   37 E03726007 16-11-2011   38 E03726007 16-11-2011