Oligonucleótido y composiciones que lo comprenden para tratar neoplasia de linfocitos B.

Un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B en un sujeto mamífero.

Oligonucleótido y composiciones que lo comprenden para tratar neoplasia de linfocitos B

Campo técnico La presente invención proporciona un oligonucleótido con una secuencia como se muestra en la SEC ID Nº 1 para su uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B en un sujeto mamífero, una composición que lo comprende y un método para inducir apoptosis de células neoplásicas de linfocitos B in vitro, regular positivamente CD40 en células neoplásicas de linfocitos B in vitro e inducir que las células neoplásicas de linfocitos B produzcan IL-10 in vitro. El oligonucleótido puede usarse solo o en combinación con productos quimioterapéuticos, productos inmunoterapéuticos y radiación para tratar neoplasia de linfocitos B.

Antecedentes Basándose en el sistema de clasificación de la OMS (American Journal of Surgical Pathology, 1997, 21 (1) : 114121) , los tumores malignos linfoides se agrupan en tres clases principales: neoplasia de linfocitos B, neoplasia de linfocitos citolíticos naturales (NK) / linfocitos T y linfomas de Hodgkin.

La neoplasia de linfocitos B se divide adicionalmente en dos grupos: neoplasia de linfocitos B precursores y neoplasia de linfocitos B periféricos. La neoplasia de linfocitos B precursores incluye leucemia linfoblástica aguda B precursora (leucemia linfoblástica aguda de linfocitos B, B-ALL) /linfoma linfoblástico (LBL) . La neoplasia de linfocitos B periféricos incluye leucemia linfocítica crónica de linfocitos B (B-CLL) , linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de linfocitos B, linfoma linfoplasmacítico/inmunocitoma, linfoma de células del manto, linfoma folicular, linfoma folicular cutáneo, linfoma de linfocitos B de zona marginal extraganglionar de tipo MALT, linfoma de linfocitos B de zona marginal ganglionar (linfocitos B monocitoides +/-) , linfoma de zona marginal esplénica (linfocitos vellosos +/-) , leucemia de células pilosas, plasmacitoma/mieloma de células plasmáticas, linfoma de linfocitos B grande difuso, linfoma de linfocitos B grande mediastinal (tímico) , linfoma de linfocitos B grande intravascular, linfoma de efusión primaria y linfoma de Burkitt.

La leucemia linfocítica crónica de linfocitos B (B-CLL) y leucemia linfocítica/linfoblástica aguda de linfocitos B (B-ALL) son dos tipos de leucemia de linfocitos B. Las células de B-CLL expresan CD19, CD5 y CD23 (Nicholas Chiorazzi, M.D., et al. N Engl J Med 2005; 352: 804-15) . Las células B-ALL expresan marcadores CD19+ CD10+.

El linfoma linfocítico pequeño es una neoplasia de linfocitos B. La población monoclonal de linfocitos B en linfoma linfocítico pequeño expresa CD19, CD5 y CD23 (Catherine Thieblemont, et al. Blood. 2004; 103: 2727-2737) .

Dependiendo de la neoplasia de linfocitos B diagnosticada, las opciones de tratamiento actuales son quimioterapia, radioterapia e inmunoterapia.

CD40, que se expresa en la superficie celular de linfocitos B y células dendríticas normales, es un miembro de la familia del receptor de factor de necrosis tumoral (TNFR) . CD40L (CD154) , que se expresa en linfocitos T, es un miembro de la familia del factor de necrosis tumoral (Castle, BE, et al. J Immunol 1993; 151: 1777-1788) . La interacción de CD40L y CD40 promueve la proliferación, diferenciación y presentación de antígeno de linfocitos B, células dendríticas y monocitos (Ranheim EA, et al. J Exp Med 1993; 177: 925-935; Yellin MJ, et al. J Immunol 1994;

153: 666-674; Banchereau J, et al. Anhu Rev Immunol 1994; 12: 881-922; M.von Bergwelt-Baildon MS, et al. Blood 2002; 99: 3319-3325) .

CD40 también se expresa en las células neoplásicas de linfocitos B. Se ha demostrado que la potenciación de la expresión de CD40 promueve la apoptosis de células neoplásicas de linfocitos B (Peter Chu, et al. PNAS, 19 de marzo de 2002, vol. 99, Nº 6 3854- 3859; Dicker Frank, et al. BLOOD, 15 de abril 2005, Volumen 105, Número 8: 3193-3198) .

Los experimentos tanto in vitro como in vivo indicaron que la estimulación y regulación positiva de CD40 indujo la inhibición del crecimiento de células neoplásicas de linfocitos B (Funakoshi et al, Blood 83: 2787-2794, 1994; Murphy et al, Blood 86: 1946-1953, 1995; Eliopoulos, A.G., et al. 1996. Oncogene 13:2243; Hirano, A., et al. 1999. Blood 93:2999; Tong, A.W., M. et al. 2001. Clin. Cancer Res. 7:691) .

Se ha indicado que la promoción de la expresión de CD40 en células neoplásicas de linfocitos B potencia la antigenicidad de células neoplásicas de linfocitos B y en consecuencia fomenta la generación de linfocitos T citotóxicos (CTL) específicos de las células. El CTL puede destruir eficazmente células neoplásicas de linfocitos B (Dilloo D, et al. Blood. 1997; 90:1927-1933; Kato K, et al. J Clin Invest. 1998; 101:1133-1141; Wierda W.G., et al. Blood. 2000; 96:2917-2924; Takahashi S, et al. Hum Gene Ther. 2001; 12:659-670; Takahashi S, et al. Cancer Gene Ther.2001; 8:378-387) . En presencia de CD40L, las células de leucemia linfocítica crónica de linfocitos B que expresan CD40 pueden destruirse por linfocitos T citotóxicos CD4 (Dicker Frank, et al. Blood, 15 de abril de 2005 Vol. 105, Nº 8: 3193-3198) . La interacción de D40L y CD40 en células de linfoma de Burkitt podría promover que la célula presentara antígenos tumorales a CTL específicos (Khanna, R. et al. 1997. J. Immunol. 159: 5782) . Los experimentos in vivo y ensayos clínicos también han demostrado que la activación de CD40 podría potenciar la inmunogenicidad de células de leucemia linfocítica crónica de linfocitos B (B-CLL) y en consecuencia inducir la generación de CTL específicos para las células (Kato, K., et al. 1998. J. Clin. Invest. 101:1133; Wierda, W.G., et al. 2000. Blood 96: 2917) .

Juntos, estos datos indican que la potenciación de la expresión de CD40 en células neoplásicas de linfocitos B puede estimular la inmunidad anti-tumoral contra neoplasia de linfocitos B. La inmunidad antitumoral incluye pero sin limitación lo siguiente:

1. Promover la apoptosis de células neoplásicas de linfocitos B;

2. Inhibir el crecimiento de células neoplásicas de linfocitos B;

3. Potenciar la inmunogenicidad de células neoplásicas de linfocitos B y de este modo fomentar la generación de CTL específicos de las células.

La interleucina 10 (IL-10) es una citocina homodimérica producida por ciertos linfocitos T, monocitos, macrófagos y algunas de las células neoplásicas desarrolladas a partir de linfocitos B, linfocitos T o linfocitos NK (Kitabayashi et al., 1995; Masood et al., 1995; Sjoberg et al., 1996;. Beatty et al., 1997; Boulland et al., 1998; Jones et al., 1999) . La actividad de IL-10 está mediada por su receptor de superficie celular específico. El receptor se expresa en células presentadoras de antígenos, linfocitos y también células de leucemia linfocítica crónica de linfocitos B (B-CLL) . Se ha descubierto que la adición de IL-10 exógena inhibe la proliferación de células de B-CLL recién aisladas de pacientes (Jesper Jurlander, Chun-Fai Lai, Jimmy Tan, et al. Characterization of interleukin-10 receptor expression on B-cell chronic lymphocytic leukemia cells. Blood, Volumen 89, Nº 11 (1 de junio) , 1997: páginas 4146-4152) . También se ha indicado que IL-10 inhibe la proliferación de células de B-CLL y potencia la apoptosis de células de B-CLL (Anne-Catherine Fluckiger, Isabelle Durand y Jacques Banchereau Interleukin 10 Induces Apoptotic Cell Death of B-Chronic Lymphocytic Leukemia Cells. J. Exp. Med. Volumen 179 enero 1994 91-99) . Las propiedades antineoplásicas inmunoestimuladoras de IL-10 se han analizado en una revisión a partir de la que se especula que la sobre-expresión de IL-10 dentro del microambiente tumoral puede catalizar el rechazo inmunitario de cáncer (Simone Mocellin, Francesco M. Marincola y Howard A. Young. Interleukin-10 and the immune response against cancer: a counterpoint. Journal of Leukocyte Biology. 2005, 78:1043-1051) .

En la presente invención, los inventores proporcionan un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 para su uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B en un sujeto mamífero. El oligonucleótido induce la apoptosis de células neoplásicas de linfocitos B, promueve la expresión de CD40 en células neoplásicas de linfocitos B y estimula que las células neoplásicas de linfocitos B produzcan IL-10.

Sumario de la invención En un aspecto, la invención proporciona un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 para su uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B en un sujeto mamífero.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 para su uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B,... [Seguir leyendo]

1. Un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B en un sujeto mamífero.

2. El oligonucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que el oligonucleótido es para inducir apoptosis de células neoplásicas de linfocitos B.

3. El oligonucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que el oligonucleótido es para regulación positiva de CD40 en células neoplásicas de linfocitos B.

4. El oligonucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que el oligonucleótido es para estimular células neoplásicas de linfocitos B para producir IL-10.

5. El oligonucleótido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, donde dicha neoplasia de linfocitos B es leucemia de linfocitos B, linfoma de linfocitos B o mieloma.

6. El oligonucleótido de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con la reivindicación 5, donde dicha leucemia de linfocitos B es leucemia linfocítica crónica de linfocitos B o leucemia linfocítica aguda de linfocitos B.

7. El oligonucleótido de acuerdo con la reivindicación 5 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con la reivindicación 5, donde dicho linfoma de linfocitos B es linfoma linfocítico pequeño.

8. El oligonucleótido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, donde dicho sujeto mamífero es un sujeto humano.

9. El oligonucleótido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, que es para administración por vía entérica, vía parenteral o vía tópica o por inhalación.

10. Un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B, que está comprendido dentro de una composición farmacéutica.

11. Un método para inducir apoptosis de células neoplásicas de linfocitos B in vitro, que comprende poner en contacto dichas células neoplásicas de linfocitos B con una composición que comprende un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1.

12. Un método para potenciar la expresión de CD40 en células neoplásicas de linfocitos B, que comprende poner en contacto dichas células neoplásicas de linfocitos B in vitro con una composición que comprende un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1.

13. Un método para inducir células neoplásicas de linfocitos B para producir IL-10, que comprende poner en contacto dichas células neoplásicas de linfocitos B in vitro con una composición que comprende un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1.

14. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en el que dichas células neoplásicas de linfocitos B son células de leucemia linfocítica crónica de linfocitos B (B-CLL) , o células de leucemia linfocítica aguda de linfocitos B (B-ALL) , o células de linfoma linfocítico pequeño.

15. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de neoplasia de linfocitos B que comprende: (1) un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 y (2) un agente anti-neoplasia de linfocitos B.

16. La composición de acuerdo con la reivindicación 15, en la que dicho agente anti-neoplasia de linfocitos B se selecciona de productos quimioterapéuticos, productos inmunoterapéuticos o agentes usados en radioterapia.

17. La composición de acuerdo con la reivindicación 16, en la que dichos productos quimioterapéuticos se seleccionan del grupo que consiste en: fludarabina, pentostatina, vincristina, ciclofosfamida, prednisona, CVP (ciclofosfamida, vincristina y prednisona) y CHOP (ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisona) .

18. La composición de acuerdo con la reivindicación 16, donde dichos productos inmunoterapéuticos son un anticuerpo anti-CD20.

19. La composición de acuerdo con la reivindicación 16, en la que dicha radioterapia es radiación externa o un tratamiento con anticuerpo radiomarcado.

20. El uso de un oligonucleótido que tiene la secuencia de SEC ID Nº 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de neoplasia de linfocitos B.

21. El uso de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la neoplasia de linfocitos B se selecciona de leucemia de linfocitos B, linfoma de linfocitos B o mieloma.