Moléculas conjugadas del Factor VIII.

Molécula del Factor VIII con dominio B truncado con una vida media circulatoria modificada, siendo conjugada dicha molécula de forma covalente con un polímero hidrofílico por medio de un oligosacárido O-ligado en el dominio B truncado, donde:

(i) la activación del Factor VIII resulta en la eliminación del polímero hidrofílico conjugado de forma covalente;

(ii) las porciones de la cadena pesada y la ligera del polipéptido precursor de FVIII son separadas por un enlace, donde la secuencia del enlace deriva del dominio B de FVIII; y

(iii) el enlace comprende un sitio de reconocimiento para la proteasa que separa el polipéptido precursor de FVIII de 10 dominio B truncado en la cadena pesada y la ligera.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/035339.

Solicitante: NOVO NORDISK A/S.

Nacionalidad solicitante: Dinamarca.

Dirección: Novo Allé 2880 Bagsvaerd DINAMARCA.

Inventor/es: THIM, LARS, DEFREES, SHAWN, STENNICKE,HENNING RALF, BOLT,Gert, STEENSTRUP,Thomas Dock, VANDAHL,BRIAN BERG STIDSEN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales caracterizadas por los... > A61K47/48 (estando el ingrediente no activo químicamente unido al ingrediente activo, p. ej. conjugados polímero-medicamento)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de trastornos de... > A61P7/04 (Antihemorrágicos; Procoagulantes; Hemostáticos; Antifibrinolíticos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/755 (Factores VIII)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen péptidos... > A61K38/37 (Factores VIII)

PDF original: ES-2476690_T3.pdf

 

google+ twitter facebook

Fragmento de la descripción:

Moléculas conjugadas del Factor VIII.

Campo de la invención 5

La presente invención se refiere a moléculas conjugadas de coagulación del Factor VIII. En particular, la presente invención se refiere a moléculas conjugadas del Factor VIII que tienen una vida media circulatoria modificada.

Antecedentes de la invención 10

La hemofilia A es un trastorno de sangrado hereditario causado por deficiencia o disfunción de la actividad del Factor VIII de coagulación (FVIII) . La manifestación clínica no está en la hemostasis primaria - normalmente tiene lugar la formación de coágulos de sangre - pero el coágulo es inestable debido a una carencia de formación de trombina secundaria. La enfermedad es tratada por inyección intravenosa del Factor de coagulación FVIII, el cual se aisla de la 15 sangre o se produce de manera recombinante.

Las recomendaciones de tratamiento actual son cambiar el tratamiento de demanda tradicional por la profilaxis. La vida media circulatoria del FVIII endógeno es de 12-14 horas y el tratamiento profiláctico tiene que ser realizado de este modo varias veces por semana para obtener virtualmente una vida sin síntomas para los pacientes. La 20 administración IV para muchos, especialmente para niños y personas jóvenes, está asociada con inconveniencia y/o dolor significativo. Existe de este modo una necesidad en la técnica de nuevos productos del Factor VIII con la actividad del Factor VIII, que sean preferiblemente homogéneos en estructura, preferiblemente seguros y que tengan preferiblemente una vida media circulatoria significativamente prolongada, para reducir el número de administración del Factor VIII por semana. Existe además una necesidad en la técnica de métodos simplemente relativos para obtener y 25 producir tales moléculas.

La PEGilación del Factor VIII para prolongar la vida media circulatoria se conoce en la técnica. Sin embargo, ha sido un obstáculo para obtener productos seguros que tengan una estructura homogénea, así como también una vida media circulatoria significativamente mejorada. Los métodos disponibles para producir moléculas conjugadas del Factor 30 VIII son a menudo laboriosos y/o tienden a conllevar bajos rendimientos y/o productos que no son homogéneos en estructura. El uso de sitios de glicosilación O-ligados diseñados artificialmente para obtener proteínas terapéuticas que tengan una vida media circulatoria prolongada de proteínas terapéuticas ha sido sugerido en el documento WO2008011633, sin embargo, ahí se describen moléculas no conjugadas del Factor VIII.

Resumen de la invención

En un primer aspecto, la presente invención se refiere a una molécula del Factor VIII truncada del dominio B con una vida media circulatoria modificada, dicha molécula es conjugada de forma covalente con un polímero hidrofílico por medio de un oligosacárido O-ligado en el dominio truncado B, donde la activación del Factor VIII conlleva eliminar el 40 grupo lateral conjugado de forma covalente, donde las porciones de la cadena pesada y ligera del polipéptido precursor de FVIII son separadas por un enlace, donde la secuencia del enlace deriva del dominio B de FVIII y donde el enlace contiene una secuencia de reconocimiento para la proteasa que separa el polipéptido precursor de FVIII truncado del dominio B en la cadena pesada y ligera.

En otros aspectos, la presente invención además se refiere a métodos para obtener tales moléculas, el uso de tales moléculas en terapias y composiciones farmacéuticas que comprendan tales moléculas.

Lo que de este modo se proporciona es una molécula conjugada del Factor VIII con vida media circulatoria modificada, donde el grupo lateral conjugado (por ejemplo, polímero hidrofílico) se elimina después de la activación. Las 50 moléculas de acuerdo con la invención, son preferiblemente homogéneas en estructura - al menos con respecto a la posición del polímero hidrofílico en el dominio B truncado - y preferiblemente tienen un perfil de seguridad ventajoso. Del mismo modo, en la presente son proporcionados además métodos relativamente simples para obtener tales moléculas. Preferiblemente, las moléculas activadas del Factor VIII de acuerdo con la invención, son similares al Factor VIII activado endógeno. 55

Descripción detallada de la invención

Definiciones:

Moléculas del Factor VIII: El Factor FVIII/FVIII es una glicoproteína compleja y grande que principalmente se produce por hepatocitos. El FVIII contiene 2351 aminoácidos, incluido el péptido de señalización, y contiene varios dominios distintos como se define por homología. Existen tres dominios A, un dominio único B y dos dominios C. El orden de los dominios puede ser enumerado como NH2-A1-A2-B-A3-C1-C2-COOH. El FVIII circula en el plasma como dos cadenas, separado en el borde B-A3. Las cadenas están conectadas por enlaces iónicos de metal bivalente. La 65 cadena A1-A2-B es llamada la cadena pesada (HC, por sus siglas en inglés) , mientras que la A3-C1-C2 es llamada la cadena ligera (LC, por sus siglas en inglés) .

Las moléculas endógenas del Factor VIII circulan in vivo como una combinación de moléculas con dominios B de varios tamaños. Lo que probablemente tiene lugar in vivo es una eliminación enzimática gradual del dominio B que conlleva una combinación de moléculas con dominios B de varios tamaños. En general, se cree que el desdoblamiento 5 en la posición 740, por el cual la última parte del dominio B se elimina, ocurre en conjunto con la activación de trombina. Sin embargo, no puede ser una regla que una variante del Factor VIII en la cual por ejemplo, el sitio de desdoblamiento en la posición 740 ha sido deteriorado, pueda ser activo.

El “Factor VIII” o “FVIII” como se usa en la presente, se refiere a una glicoproteína de plasma humana que es un 10 miembro de la trayectoria de coagulación intrínseca y es esencial para la coagulación sanguínea. El “FVIII Nativo” es la molécula humana FVIII de longitud completa como se muestra en la SEC ID NO. 1 (aminoácido 1-2332) . El dominio B recorre los aminoácidos 741-1648 en la SEC ID NO 1.

SEC ID NO 1: 15

0011] Las moléculas del Factor VIII de acuerdo con la presente invención son moléculas del Factor VIII truncadas del dominio B donde los dominios restantes corresponden a la secuencia como se expone en el aminoácido no. 1-740 y 1649-2332 en la SEC ID NO. 1. Resulta que las moléculas de acuerdo con la invención son moléculas recombinantes producidas en células hospederas transformadas, preferiblemente de origen mamífero. Sin embargo, los dominios restantes (es decir, los tres dominios A y los dos dominios C) pueden diferir ligeramente, por ejemplo, aproximadamente 5 un 1 %, 2 %, 3 %, 4 % o 5 % de la secuencia de aminoácido como se expone en la SEC ID NO 1 (aminoácidos 1-740 y 1649-2332) . En particular, es posible que se introduzcan modificaciones de aminoácidos (sustituciones, supresiones, etc.) , en los dominios restantes, por ejemplo, para modificar la capacidad de enlace del Factor VIII con varios otros componentes tales como, por ejemplo, el factor vW, LPR, varios receptores, otros factores de coagulación, superficies celulares, etc. Además, es plausible que las moléculas del Factor VIII de acuerdo con la invención comprendan otras 10 modificaciones postraduccionales en, por ejemplo, el dominio B truncado y/o en uno o más de los otros dominios de las moléculas. Estas otras modificaciones postraduccionales pueden ser en forma de varias moléculas conjugadas con la molécula del Factor VIII de acuerdo con la invención tal como por ejemplo, compuestos poliméricos, compuestos peptídicos, compuestos derivados de ácidos grasos, etc.

Las moléculas del... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Molécula del Factor VIII con dominio B truncado con una vida media circulatoria modificada, siendo conjugada dicha molécula de forma covalente con un polímero hidrofílico por medio de un oligosacárido O-ligado en el dominio B truncado, donde: 5

(i) la activación del Factor VIII resulta en la eliminación del polímero hidrofílico conjugado de forma covalente;

(ii) las porciones de la cadena pesada y la ligera del polipéptido precursor de FVIII son separadas por un enlace, donde la secuencia del enlace deriva del dominio B de FVIII; y

(iii) el enlace comprende un sitio de reconocimiento para la proteasa que separa el polipéptido precursor de FVIII de 10 dominio B truncado en la cadena pesada y la ligera.

2. Molécula según la reivindicación 1, donde la longitud del dominio B es d.

2. 30 aminoácidos.

3. Molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde el polímero hidrofílico es PEG. 15

4. Molécula según la reivindicación 3, donde el tamaño del PEG es desde aproximadamente 10.000 hasta aproximadamente 160.000 Da.

5. Molécula según la reivindicación 4, donde el tamaño del PEG es aproximadamente 40.000 Da. 20

6. Molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde el polímero hidrofílico es polisacárido.

7. Molécula según la reivindicación 6, donde el polisacárido es ácido poli siálico.

8. Molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, que comprende la secuencia de aminoácido como se expone en la SEC ID NO 2.

9. Molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde el dominio B truncado es un aminoácido más corto que en la SEC ID NO 2. 30

10. Composición farmacéutica que comprende una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-9.

11. Método para elaborar una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, donde dicho método comprende conjugar una molécula del Factor VIII con dominio B truncado con un polímero hidrofílico por medio de un oligosacárido 35 O-ligado en el dominio B truncado.

12. Molécula obtenible a través del método según la reivindicación 11.

13. Molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y 12 para uso como un medicamento para el tratamiento de 40 hemofilia.

14. Uso de una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y 12 o una composición farmacéutica según la reivindicación 10 para el tratamiento de hemofilia a través de administración subcutánea.

15. Uso de una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y 12 o una composición farmacéutica según la reivindicación 10 para el uso en el tratamiento de hemofilia por administración intravenosa.

FIGURA 8