Compuesto anti-CD160 seleccionado del grupo que consiste en AcM anti-CD160 CL1-R2 obtenible a partir del hibridoma depositado como CNCM I-3204,

un fragmento conservativo de dicho AcM CL1-R2 y un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2 que comprende al menos un fragmento de CL1-R2, en el que dicho compuesto anti-CD160 puede competir con el AcM anti-CD160 CL1-R2 por la unión a CD160, y es suficientemente específico de CD160 para unirse a CD160 sin unirse a al menos CD8alfaß

Aplicaciones angiogénicas e inmunológicas de compuestos específicos anti-CD160 obtenibles a partir del AcM CL1-R2.

Sector de la técnica

La presente invención se refiere a un AcM específico anti-CD160 (CL1-R2 accesible con el número de depósito de hibridoma CNCM I-3204), a compuestos específicos anti-CD160 que se derivan del mismo y a las aplicaciones médicas y biológicas de tales AcM y compuestos anti-CD160.

Estado de la técnica

La presente invención se refiere más particularmente a medios para controlar y regular específicamente:

- la angiogénesis de células endoteliales (CE), y

- la contribución de células NK y T a la regulación del sistema inmunitario.

Los diferentes aspectos de la invención comparten la característica común de implementar o requerir un anticuerpo monoclonal anti-CD160 (AcM) de la presente invención, concretamente el AcM denominado por los inventores CL1-R2 (depósito según el Tratado de Budapest de hibridomas CNCM I-3204), o un equivalente conservativo del mismo.

La presente invención demuestra de hecho que el receptor CD160 (denominado también anteriormente BY55), que se sabe que se expresa por los subconjuntos de NK y T citotóxicos (CD56^dim CD16^brillante CD3- NK; T CD8+; TCRγδ), participa tanto en la regulación del sistema inmunitario como de la angiogénesis. La estructura de CD160 se ha descrito extensamente en documentos de la técnica anterior, véase por ejemplo el documento WO 98/21240 a nombre del DANA-FARBER CANCER INSTITUTE.

CE y angiogénesis

La angiogénesis, la formación de nuevos capilares a partir de los vasos sanguíneos preexistentes, es un componente crucial del desarrollo vascular embrionario y la diferenciación, la curación de heridas y la regeneración de órganos. Sin embargo, contribuye también a la evolución de patologías que dependen de la neovascularización, incluyendo crecimiento tumoral, diabetes, enfermedades oculares isquémicas y artritis reumatoide (Risau, 1997; Ferrara, 1997). Aunque los mediadores más importantes de la angiogénesis, la familia del factor de crecimiento de células endoteliales vasculares (VEGF) y la familia del factor de crecimiento de fibroblastos están bien definidos, la angiogénesis sigue siendo un proceso complejo que implica múltiples productos génicos expresados por diferentes tipos celulares que contribuyen todos a una secuencia integrada de acontecimientos.

El documento WO 03/018048 a nombre de ABTECH et al. se refiere al uso de dos moléculas de HLA de clase I solubles, concretamente sHLA-G1 y sHLA-B7, para inhibir la angiogenesis o para detectar sitios angiogénicos. En apoyo a este efecto anti-angiogénico está la demostración de que sHLA-G1 inhibe la proliferación y migración de células endoteliales (CE). Se demuestra también que sHLAG1 y sHLA-B7 pueden inhibir la evolución de un tumor inducido injertando células de adenocarcinoma de próstata humanas en ratones desnudos.

El documento WO 03/018048 menciona también que un anticuerpo anti-CD160 denominado CL1-R2 inhibe la acción ejercida por sHLA-G sobre la migración de CE. Se deduce a partir del mismo que BY55 podría ser un receptor endotelial para sHLA-G (véase el documento WO 03/018048 según se publicó, página 23 líneas 3-8).

Sin embargo, el experto se daría cuenta de que el documento WO03/018048 no facilita ninguna fuente públicamente disponible para el anticuerpo CL1-R2 mencionado.

Por otro lado, HLA solubles, tales como sHLA-G1 y sHLA-B7, son ligandos naturales para numerosos receptores.

Por tanto, sigue habiendo una necesidad en la técnica anterior de medios que sean suficientemente específicos con respecto a las rutas de señalización de la angiogénesis para permitir el esclarecimiento de los mecanismos que implican. También se necesita especificidad para proporcionar compuestos médicamente útiles que puedan ejercer un control específico sobre la angiogénesis sin alterar necesariamente otras rutas de señalización.

Células NK y T y el sistema inmunitario

Las células NK constituyen un subconjunto de linfocitos que desempeñan un papel en la inmunidad innata dirigida contra células tumorales o infectadas por virus. Sus funciones efectoras son la destrucción de células diana y la producción de citocinas. Las células NK usan una combinación de receptores inhibitorios y activadores expresados en su superficie celular para mediar la destrucción celular y la liberación de citocinas tras su interacción con ligandos específicos. Tras el acoplamiento específico con estos ligandos presentes sobre células diana, liberan gránulos citolíticos que contienen perforina y granzima que contribuyen a la apoptosis de células diana. Tras el contacto con células diana sensibles, producen también varias citocinas, incluyendo IFN-γ, TNF-α y GM-CSF de manera temprana en la respuesta inmunitaria innata que modulan la inmunidad adaptativa regulando la función de células T. La liberación de IFN-γ por células NK tanto en tejidos inflamados como en órganos linfoides secundarios influye en la respuesta inmunitaria adaptativa iniciada por células dendríticas. El IFN-γ secretado por células NK uterinas puede controlar también la vascularización y el desarrollo de la placenta durante el embarazo.

Sin embargo, se ha demostrado que sólo algunos receptores activadores de células NK humanas inducen la producción de citocinas tras el acoplamiento específico. KIR2DL4 (CD158d) induce la producción de IFN-γ en células NK activadas y en reposo. CD16 es un receptor de FcγRIII de baja afinidad responsable de la citotoxicidad celular dependiente de Ac (ADCC). La señalización a través de CD16 activa la producción de citocinas, incluyendo IFN-γ, GM-CSF y varias quimiocinas. La incubación de células NK activadas con AcM anti-NKp30 o anti-NKp46 condujo a la producción de IFN-γ por células NK. El receptor activador NKG2D humano que reconoce las moléculas MICA y MICB inducidas por estrés así como la familia ULBP de moléculas y desempeña un papel importante en la citotoxicidad mediada por células NK no puede aparentemente producir citocinas una vez activado por AcM específicos.

Las células T, incluyendo células T CD8+ y CD4+, producen también citocinas. Las células Th1 producen IL-2 e IFNγ, mientras que las células Th2 producen IL-4. Las funciones efectoras de las células T CD8+ coinciden parcialmente con las de las células T CD4+. Las células T sin tratar pueden diferenciarse en al menos dos subconjuntos con patrones de citocinas distintos: las células T citotóxicas 1 secretan un patrón de citocinas similar a Th1, mientras que las células T citotóxicas 2 secretan citocinas Th2. Actualmente, es habitual considerar que TFN-γ representa una citocina de tipo 1 típica, mientras que la citocina representativa de la respuesta de tipo 2 es la IL-4.

Las citocinas intervienen en la diferenciación y estimulación de clones de células B que producen anticuerpos y la acción citopática de células T citotóxicas. Asimismo, la secreción de citocinas influye en la capacidad de destrucción de células de las células NK, y la capacidad de los macrófagos para fagocitar diferentes componentes de la placa bacteriana.

La presente invención proporciona medios para controlar específicamente la regulación por incremento o disminución de la producción de citocinas. Los medios actúan específicamente sobre las rutas de señalización de CD160.

Entre los diferentes receptores de células NK activadores descritos hasta la fecha, CD160 es el único receptor no expresado de manera clonal en la mayoría de las células NK circulantes. Las células CD160+ corresponden al subconjunto de NK CD56^dim CD16+ no proliferativo, sumamente citolítico. El acoplamiento de CD160 con moléculas de HLA-C media la función citotóxica.

CD160 se expresa por NK CD3- CD56^dim CD16^brillante circulantes, que constituyen la mayoría de las células NK-SP. El subconjunto de células NK CD56^dim es más citotóxico de manera natural y produce menos citocinas abundantes que el subconjunto CD56^brillante tras la activación por monocitos. El subconjunto de células NK CD56^dim también expresa un patrón específico de receptores de quimiocinas y moléculas de adhesión. Tal fenotipo es característico de células efectoras diferenciadas...

1. Compuesto anti-CD160 seleccionado del grupo que consiste en AcM anti-CD160 CL1-R2 obtenible a partir del hibridoma depositado como CNCM I-3204, un fragmento conservativo de dicho AcM CL1-R2 y un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2 que comprende al menos un fragmento de CL1-R2, en el que dicho compuesto anti-CD160 puede competir con el AcM anti-CD160 CL1-R2 por la unión a CD160, y es suficientemente específico de CD160 para unirse a CD160 sin unirse a al menos CD8αβ.

2. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1, caracterizado porque además no se une a CD85j.

3. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque es un fragmento conservativo de dicho AcM CL1-R2 seleccionado del grupo que consiste en un fragmento Fab, un Fab', un F(ab)₂, un F(ab')₂ y un Fv de dicho AcM CL1-R2.

4. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque es un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2, que comprende al menos un compuesto scFv que comprende al menos una región CL1-R2 VH de CL1-R2 unida a al menos una región CL1-R2 VL de CL1-R2 a través de un ligador peptídico (L).

5. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 4, caracterizado porque dicho derivado conservativo es un scFv monovalente.

6. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 4, caracterizado porque dicho derivado conservativo es un scFv multivalente.

7. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque es un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2 que comprende un multímero de scFv derivado de dicho AcM CL1-R2, unido a un fragmento Fc.

8. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque es un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2 que comprende al menos un fragmento Fv de CL1-R2 unido a un Fc humano.

9. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque es un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2 obtenible añadiendo uno o más Fab derivados de dicho AcM CL1-R2 en el extremo C-terminal de cada cadena H del AcM CL1-R2 de longitud completa.

10. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque es un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2 obtenible uniendo covalentemente AcM CL1-R2 de longitud completa entre sí para formar una forma de Ac agregado.

11. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque es un derivado conservativo de dicho AcM CL1-R2 obtenible uniendo dos o más Fabs de cabeza a cola.

12. Compuesto anti-CD-160, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque comprende además una inmunotoxina y/o un radioelemento.

13. Compuesto anti-CD-160, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque es un compuesto soluble.

14. Compuesto anti-CD-160, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque es un compuesto que comprende al menos un sitio de unión a CD160 y al menos un sitio de unión a CD158b.

15. Compuesto anti-CD-160, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque es un compuesto agregado.

16. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 1 a 12, caracterizado porque dicho compuesto agregado comprende al menos tres sitios de unión a CD 160 y ningún sitio de unión a CD158b.

17. Fármaco que comprende un compuesto anti-CD160 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16.

18. Compuesto anti-CD 160, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 como fármaco anti-angiogénico.

19. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 18, caracterizado porque dicho fármaco anti-angiogénico está destinado a su uso en la prevención o el tratamiento de un tumor.

20. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 18, caracterizado porque dicho fármaco anti-angiogénico está destinado a su uso en la prevención o el tratamiento de preeclampsia o eclampsia.

21. Compuesto anti-CD-160, según la reivindicación 18, caracterizado porque dicho fármaco anti-angiogénico está destinado a su uso en la prevención o el tratamiento de diabetes, y/o una enfermedad ocular isquémica, y/o artritis reumatoide.