Un anticuerpo contra la proteína C o la proteína C activada, que comprende regiones determinantes de la complementariedad que comprenden las secuencias de aminoácidos de:

(a) SEQ ID NOs: 9, 10, 11 (VH), y SEQ ID NOs: 21, 22, 23 (VL),

(b) SEQ ID NOs: 31, 32, 33 (VH), y SEQ ID NOs: 24, 25, 34 (VL), o

(c) SEQ ID NOs: 15, 16, 17 (VH), y SEQ ID NOs: 27, 28, 29 (VL);

en donde el anticuerpo comprende la actividad de

(i) potenciar una actividad de la proteína C activada in vivo;

(ii) suprimir la inactivación de la proteína C activada in vivo; o

(iii) suprimir la inactivación de la proteína C activada, causada por

(1) sangre;

(2) un inhibidor fisiológico de la proteína C activada; o

(3) tanto (1) como (2)

Anticuerpos anti-aPC no neutralizantes.

Campo técnico

La presente invención se refiere a anticuerpos no neutralizantes contra la proteína C activada.

Antecedentes técnicos

Después de una intervención quirúrgica abdominal importante o de una artroplastia de rodilla se produce, con frecuencia, una trombosis venosa. En la actualidad, la terapia es principalmente preventiva con el uso de heparina de bajo peso molecular y warfarina. Sin embargo, el tratamiento con heparina de bajo peso molecular requiere la administración subcutánea diaria. Warfarina se administra por vía oral, pero tiene un grado excesivamente alto de unión a proteínas, y esta interactividad limita su uso combinado con otros medicamentos. Adicionalmente, ambos medicamentos tienden a causar hemorragias. Por lo tanto, si existiera un agente antitrombótico eficaz por un período de tiempo mayor, y que no dé lugar a tendencias hemorrágicas, su administración inmediatamente después de la intervención e inmediatamente antes de dar el alta hospitalaria puede prevenir la trombosis y mejorar la calidad de vida (QoL) de los pacientes. El desarrollo de agentes antitrombóticos, especialmente de los que son eficaces durante un periodo de tiempo mayor, también está previsto para otros tipos de trombosis.

El trombo se forma por la activación de las plaquetas y del sistema de coagulación de la sangre. Se cree que las plaquetas contribuyen básicamente a la formación de trombos arteriales, mientras que el sistema de coagulación lo hace principalmente a la formación de trombos venosos. La activación del sistema de coagulación de la sangre produce formación de trombina, que conduce a la producción de fibrina, un factor fundamental en la red del trombo. Mientras tanto, la trombina altera sus propias propiedades tras la unión a trombomodulina en la superficie del endotelio vascular, activando de este modo la proteína C (PC). La PC activada (aPC) utiliza la proteína S como coenzima para inactivar los factores Va y VIIIa, suprimiendo así el sistema de coagulación. Adicionalmente, la aPC comprende la actividad de suprimir las sustancias inhibidoras de la fibrinólisis tales como PAI-1 (Inhibidor del Activador del Plasminógeno-1) y TAFI (Inhibidor de la Fibrinólisis Activado por Trombina), y refuerza de esta forma el sistema fibrinolítico. Por lo tanto, se supone que PC y aPC desempeñan papeles importantes en un mecanismo de regulación negativa de la activación del sistema de coagulación de la sangre. De hecho, tanto el déficit congénito de PC como la resistencia a la aPC debida a mutaciones del Factor Va pueden ser factores causales en la trombosis, por lo que cabe esperar que la aPC sea eficaz en el tratamiento y prevención de la trombosis.

Aun cuando no hubo ningún medicamento eficaz para tratar la sepsis, un estudio reciente informó de que la aPC recombinante fue eficaz en el tratamiento de la sepsis (N. Engl. J. Med. 2001, 344: 699-709). Igualmente, se ha sugerido que la aPC actúa sobre los endotelios vasculares y que desarrolla una actividad antiinflamatoria (J. Biol. Chem. 2001, 276: 11199-11203). Además, se informa de que la actividad antiinflamatoria en un modelo de sepsis se basa en una actividad diferente que la supresión de la producción de trombina (J. Clin. Invest. 1987, 79: 918-25).

La semivida de aPC en sangre es muy breve (sólo 20 a 30 min), por lo que requiere una administración intravenosa continua o administraciones repetidas a largo plazo. La razón de esta breve semivida es que aPC resulta inactivada de manera irreversible por inhibidores fisiológicos del organismo tales como el inhibidor de proteína C (PCI) o a1-antitripsina (AAT). Incluso si en las preparaciones se utiliza PC, la precursora de aPC, su semivida in vivo tiene una corta duración, del orden de seis a ocho horas. Por lo tanto, estas preparaciones deberían ser administradas de forma continua o frecuente, lo que desde el punto de vista de la economía sanitaria es ineficaz.

El documento EP 0138222 describe anticuerpos anti-aPC que inhiben la actividad anticoagulante de aPC.

Descripción de la invención

Como se ha descrito anteriormente, aPC actúa regulando el sistema de coagulación de la sangre, y la generación y acción de la aPC están limitadas a regiones locales donde se ha activado el sistema de coagulación. En consecuencia, cuando se administra de forma sistémica, la aPC se debe administrar continuamente a dosis elevadas para conducirla a las regiones locales donde es necesaria y para compensar su consumo, causado por la inactivación. Un agente eficaz podría potenciar la actividad de la aPC producida de forma local y endógena. La acción de un agente de este tipo estaría limitada a la región local, y se prolongaría incluso con la administración única de una dosis baja, porque el agente habitualmente no se consume. En este contexto, los presentes inventores han desarrollado un agente capaz de potenciar la acción de la aPC endógena por medio de la supresión de su inactivación y ampliando la semivida de la aPC.

Con esta finalidad, los presentes inventores clonaron hibridomas que producían anticuerpos monoclonales contra la aPC. Los inventores rastrearon los hibridomas a gran escala en busca de anticuerpos que suprimen la inactivación de la aPC en sangre y lograron aislar anticuerpos anti-aPC capaces de suprimir de manera intensa la inactivación de la aPC. Se confirmó, así mismo, que estos anticuerpos suprimen la inactivación de la aPC causada por PCI. Los anticuerpos de la presente invención suprimen la acción del sistema de coagulación de la sangre gracias a la supresión de la inactivación de la aPC y, por consiguiente, son muy útiles en el tratamiento y la prevención de la trombosis. Los anticuerpos de la presente invención se pueden usar, igualmente, en combinación con aPC, o pueden ser usados solos como agentes terapéuticos en la sepsis, o para potenciar la actividad de la aPC mediante la supresión de la inactivación de la aPC en la sangre.

De manera específica, la presente invención se refiere a anticuerpos anti-aPC que suprimen la inactivación de aPC, y a sus usos. Más específicamente, la presente invención se refiere a:

[1] un anticuerpo contra la proteína C o la proteína C activada, que comprende regiones determinantes de complementariedad que comprenden las secuencias de aminoácidos de:

en donde el anticuerpo comprende la actividad de

[2] Un anticuerpo contra el mismo epítopo que el anticuerpo del punto [1], en donde el anticuerpo comprende la actividad de

[3] El anticuerpo de los puntos [1] o [2], en donde el inhibidor fisiológico de la proteína C activada es un inhibidor de serina proteasa (SERPIN).

[4] El anticuerpo del punto [3], en donde el inhibidor de serina proteasa (SERPIN) es un inhibidor de la proteína C o a1-antitripsina.

[5] El anticuerpo de uno cualquiera de los puntos [1] a [4], en donde el anticuerpo se selecciona del grupo consistente en un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un fragmento de anticuerpo, un anticuerpo de cadena sencilla, y un diacuerpo.

[6] Una composición que...

1. Un anticuerpo contra la proteína C o la proteína C activada, que comprende regiones determinantes de la complementariedad que comprenden las secuencias de aminoácidos de:

en donde el anticuerpo comprende la actividad de

2. Un anticuerpo contra el mismo epítopo que el anticuerpo según la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende la actividad de

3. El anticuerpo según la reivindicación 1 ó 2, en el que el inhibidor fisiológico de la proteína C activada es un inhibidor de serina proteasa (SERPIN).

4. El anticuerpo según la reivindicación 3, en el que el inhibidor de serina proteasa (SERPIN) es un inhibidor de la proteína C o a1-antitripsina.

5. El anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el anticuerpo se selecciona del grupo consistente en un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un fragmento de anticuerpo, un anticuerpo de cadena sencilla, y un diacuerpo.

6. Una composición que comprende el anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. La composición según la reivindicación 6, que comprende, adicionalmente, proteína C y/o proteína C activada.

8. La composición según la reivindicación 6 ó 7, en la que la composición es una composición farmacéutica.

9. La composición según la reivindicación 6, en la que la composición es una composición farmacéutica usada en la prevención o tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo consistente en sepsis, síndrome de coagulación intravascular diseminada, trombosis arterial y trombosis venosa.

10. Uso del anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la preparación de una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad seleccionada del grupo consistente en sepsis, síndrome de coagulación intravascular diseminada, trombosis arterial y trombosis venosa.

11. La composición según la reivindicación 9, o el uso según la reivindicación 10, en donde el anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 se administra en combinación con proteína C y/o proteína C activada.

12. Un método in vitro para producir proteína C o proteína C activada cuya inactivación ha sido suprimida, que comprende la etapa de hacer contactar el anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 con proteína C o proteína C activada.

13. Un kit para prevenir o tratar una enfermedad cuyo desarrollo y/o progresión obedecen a un descenso o pérdida de una actividad de la proteína C activada, en donde el kit comprende